ALK抑制剂

目的 探讨滑胎安胎协定方促进滋养细胞迁移侵袭治疗复发性流产（RSA）的作用机制。方法 体外培养蜕膜巨噬细胞（DM）并分为中药干预组（加入滑胎安胎协定方含药血清）、IL-4诱导组和空白对照组；采用流式细胞术检测DM分型，ELISA法检测DM中粒细胞集落因子（G-CSF）含量。共培养DM与滋养细胞HTR-8/SVneo细胞，分为DM组、DM+中药组、G-CSF组和空白对照组；采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞存活率，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，Western blot检测磷脂酰肌醇三羟基激Crizotinib酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/细胞外调节蛋白激酶（ERK）和上皮间质转化（EMT）相关因子蛋白表达水平。结果 DM实验显示，与空白对照组比较，中药干预组、INVP-TNKS656配制L-4诱导组DM数量均明retina—medical therapies显减少（均P<0.05）,M2型DM数量均明显增加（均P<0.05），而M1型DM数量比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;DM中G-CSF含量均明显升高（均P<0.05）。滋养细胞实验显示，与空白对照组比较，DM组、DM+中药组、G-CSF组滋养细胞存活率、迁移率均明显升高（均P<0.05），滋养细胞侵袭数量均明显增多（均P<0.05）;DM组、DM+中药组、G-CSF组滋养细胞p-AKT/AKT、p-ERK1/2/ERK1/2、波形蛋白表达水平均明显升高（均P<0.05）,DM+中药组、G-CSF组上皮细胞钙黏蛋白表达水平均明显降低（均P<0.05）。结论滑胎安胎协定方可通过促进DM分泌G-CSF来激活PI3K/AKT/ERK信号通路和EMT进程，进而调控滋养细胞增殖、迁移和侵袭，从而防止RSA的发生。

目的 探讨血管生成素(ANG)及其突变体对膀胱癌血管生成的影响及作用机制。方法 构建ANG突变质粒(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114R)),与BIU87-ANG组成实验组，BIU87-C1为对照组。采用pEGFP-C1-ANG~(H13R)、pEGFP-C1-ANG~(H114R)、pEGFP-C1-ANG及pEGFP-C1稳定转染膀胱癌BIU87细胞，构建稳定转染细胞系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉Elexacaftor试剂素靶蛋白(mTOR)通路中的相关靶蛋白；采用鸡胚尿囊绒NSC 127716毛膜(CAM)血管生成实验和小管形成实验检测ANG及其突变体对膀胱癌血管生成的影响；采用双荧光素酶报告基因系统检测过表达核糖核酸酶抑制因子时核糖体RNA(rRNA)的转录活性。结果 稳定转染ANG及其突变体的膀胱癌BIU87细胞系构建成功；当ANG及突变体过表达时，磷酸化PI3K、磷酸化GSK3(α/β)、磷酸化AKT、磷酸化mTOR、磷酸化PTEN水平增加；CAM血管生成实验和小管形成实验结果表明，实验组(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114R)、BIU87-ANG)CAM血管生成及小管形成均明显多于对照组(BIU87-C1),差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果表Biological pacemaker明过表达核糖核酸酶抑制因子抑制rRNA的转录活性。结论 ANG及其突变体可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进膀胱癌肿瘤血管生成。

背景:前列腺癌的发病率及致死率逐年升高,雄激素剥夺疗法(Androgen Deprivation Therapy,ADT)是前列腺癌的常见疗法之一,ADT虽有一定疗效,但是病情在短暂控制后常会发生恶化,并逐步演变为去势抵抗性前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC)。研究表明在ADT治疗后肾上腺雄激素—硫酸脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEAS)由有机阴离子转运多肽2B1(Organic Anion Transporting Polypeptides 2B1,OATP2B1)转运进入癌细胞内转化为强效雄激素二氢睾酮,进一步激活雄激素受体(Androgen receptor,AR)并促进增殖,产生去势抵抗。许多中药活性组分如18β-甘草次酸(18β-Glycyrrhizic acid,18β-GA)等能抑制OATP2B1的转运功能。恩杂鲁胺(Enzalutamide,ENZ)是一种AR拮抗剂,能阻断雄激素与AR结合,但部分患者最终在ENZ治疗过程中产生耐药性。因此,研究中药活性组分18β-GA阻断OATP2B1摄取DHEAS这一途径减少雄激素生成,并与雄激素受体抑制剂ENZ协同延缓肿瘤进展,将为CRPC的防治提供新方法、新思路。目的:研究18β-GA通过抑制OATP2B1摄取DHEAS减少细胞内雄激素生成进而与雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制,为CRPC的防治探寻新方法、新策略。方法:1、使用RT-q PCR和Western blotting技术研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌LNCap和22RV1细胞中转运体OATP2B1的表达情况,细胞毒性实验和克隆形成实验探究DHEAS对细胞增殖情况的影响。2、利用三重四极杆串联质谱技术(LC-MS/MS),建立HEK293细胞中DHEAS浓度的检测方法。3、使用LC-MS/MS分析方法研究OATP2B1-HEK293细胞模型中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用及其抑制模式。4、使用LC-STM2457价格MS/MS分析方法研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌22RV1细胞中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用,使用Western blotting实验、细胞毒性实验、克隆形成实验、Transwell及划痕实验、TUNEL实验验证18β-GA联合雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗肿瘤细胞的生物学活性作用。5、使用裸鼠异种移植模型,考察去势条件下18β-GA对体内肿瘤细胞摄取DHEAS的影响,通过生化指标检测、苏木精-伊红染色、免疫组化等方法揭示18β-GA基于OATP2B1介导DHEAS摄取抑制与ENZ协同抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制。结果:1、在雄激素剥夺培养条件下,LNCap和22RV1细胞中OATP2B1的m RNA水平分别上调458.74%和108.48%,蛋白水平分别上调89.51%和68.89%。DHEAS会促进细Colforsin体内胞的增殖,与正常组相比,LNCap和22RV1细胞组的细胞活力分别增加了21.78%和20.79%。2、本实验建立的检测DHEAS浓度的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、稳定、可靠,其特异性、线性范围、提取回收率、基质效应、批内批间精密度和准确度均符合相应接受标准。3、在OATP2B1-HEK293细胞中,环孢菌素A(OATP2B1的经典抑制剂)可明显抑制DHEAS的摄取转运,进一步证明DHEAS是OATP2B1的底物,其摄取动力学参数Km(μM)为10.393±2.33,Vmax(pmol/mg protein/min)为24.25±2.03。18β-GA显著抑制OATP2B1对DHEAS的摄取,其IC50值为3.51±1.19μM。在系列浓度DHEAS的基础上外加18β-GA(100μM)后,发现DHEAS的摄取动力学参数Vmax值明显减小(从44.82±1.28减少至34.87±0.74 pmol/mg protein/min),但是Km值几乎不变,提示18β-GA可能是通过非竞争性抑制模式,对OATP2B1摄取DHEAS产生抑制。4、在雄激素剥夺培养条件下,DHEAS(10μM)会促进前列腺癌细胞22RV1增殖,18β-GA(40μM)可对抗DHEAS引起的细胞增殖效应。18β-GA联用ENZ可协同对去势抵抗前列腺癌,在增殖、迁移、凋亡方面都表现出一定的协同对抗作用。5、在异种移植裸鼠体内,去势条件下腹horizontal histopathology腔注射DHEAS可促进肿瘤的生长,在给DHEAS的基础上,18β-GA可抵消其促进作用;18β-GA和ENZ联用可以显著抑制肿瘤生长,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。结论:1、18β-GA能明显抑制OATP2B1介导的DHEAS摄取转运,是OATP2B1的抑制剂,在去势抵抗前列腺癌中可能发生基于OATP2B1介导的相互作用。2、18β-GA抑制DHEAS经OATP2B1的摄取转运,进而减少雄激素的生成,18β-GA与雄激素受体拮抗剂ENZ联用通过减少配体的生成和抑制雄激素受体共同抵抗去势抵抗前列腺癌进展。

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

目的:内镜下静脉曲张治疗(endoscopic variceal treatmUrban biometeorologyent,EVT)是肝硬化患者中高危食管胃底静脉曲张和急性静脉曲张出血治疗的主要治疗措施。质子泵抑制剂(proton pump inhibitor,PPI)广泛用于各种胃酸分泌过量的相关疾病。然而,PPI对EVT术后并发症的影响,尤其是消化道出血(gastrointestinal bleeding,GIB),尚存在争议。本研究旨在评估住院期间术后使用PPI对肝硬化患者EVT术后并发症的影响。方法:本研究纳入了2016年1月至2020年6月期间入住北部战区总医院消化内科的肝硬化患者,纳入患者均由一位主治医师诊治并在住院期间接受了EVT手术治疗。采用Logistic回归分析探讨术后使用PPI对住院期间EVT术后并发症发生的影响。计算优势比(odds ratio,OR)和95%置信区间(confidence interval,CI)。结果:本研究最后纳入143例寻找更多肝硬化患者。EVT术后GIB和其他术后并发症的发生率分别为4.90%和46.85%。总体分析结果显示,术后使用PPI并未显著降低EVT术后GIB(OR=0.525,95%CI=0.113-2.438,P=0.411)或其他术后并发症(OR=0.804,95%CI=0.413-1.565,P=0.522)的发生风险。根据入组时间、EVT术后PPI的使用种类和给药途径、EVT术前PPI的使用、EVT术后血管活性药物的使用、EVT的适应证(治疗、一级预防或二级预防)以及门静脉系统血栓、腹水和肝细胞肝癌的存在进行亚组分析,结果表明术后使用PPI对EVT术后GIB或其他术后并发症的发生仍无显著影响。结论:不推荐肝硬化患者在BaricitinibEVT术后常规使用PPI以预防住院期间EVT术后并发症的发生。

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW501516对低氧诱导的肺动脉内皮细胞（PAECs）损伤的影响及机制。方法 通过检测PAECs的相对存活率，观察GW501516的细胞毒性作用；采用Western blot法检测PPARδ蛋白的表达水平。建立低氧条件下PAECs损伤的细胞模型，以抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）为阳性对照，通过检测细胞凋亡率、细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）活性、活性氧（ROS）水平，考察GW501516对细胞损伤及ROS产生的影响。以核因子E2寻找更多相关因子2(NInfection raterf2)激活剂富马酸二甲酯（DMF）为阳性对照，在低氧条件下通过GW501516和（或）Nrf2抑制剂ML385孵育PAECs，以细胞损伤（细胞凋亡、细胞活力、LDH活性）及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、ROS水平及Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、裂解型胱天蛋白酶3(C-caspase-3)蛋白的表达水平，探讨GW501516对低氧致PAECs损伤的作用机制。结果 低氧刺激能够抑制PAECs内PPARδ蛋白的表达（P<0.05），而GW501516可在低氧条件下促进PPARδ蛋白的表达且无明显的细胞毒性作用。GW501516可抑制PAECs凋亡，提高细胞活力，降低LDH活性及ROS水平。GW501516可通过激活Nrf2通路，上调PAECs内HO-1蛋白表达水平及SOD、GBaricitinib采购Px、CAT水平，降低MDA、ROS水平（P<0.05），而Nrf2抑制剂ML385能够逆转GW501516的上述作用（P<0.05）。GW501516下调C-caspase-3蛋白表达，抑制低氧诱导的PAECs损伤的作用与Nrf2激活剂DMF相似（P<0.05），而Nrf2抑制剂ML385能够逆转GW501516抑制PAECs损伤的作用（P<0.05）。结论 GW501516可通过抑制氧化应激来减轻低氧诱导的PAECs损伤，其机制与激活Nrf2有关。

目的：研究异泽兰黄素（Eupatilin,Eptl）对大鼠酒精戒断（Ethanol withdrawal,EtOHWI）焦虑样行为的改善作用及其与腹侧海马（Ventral hippocampus,vHippo）相关机制。方法：将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组，分别为生理盐水对照组、EtOHWI模型组、Eptl低剂量治疗组和Eptl高剂量治疗组，每组各8只。EtOHWI模型组、Eptl低、高剂量治疗组每天1次腹腔注射3 g/kg乙醇（Ethanol,EtOH），连续28 d，戒断3 d制备大鼠EtOHWI模型，生理盐水对照组腹腔注射等容积生理盐水。在3 d戒断期间，Eptl低、高剂量治疗组分别每天1次灌胃10和30 mg/kg Eptl，第3次给药30 min后，利用旷场（Open filed,OF）和高架十字迷宫（Elevatedplusmaze, EPM）实验对各组大鼠进行焦虑样行为学检测。利用ELISA检测血清皮质酮（Coritosterone,CORT）浓度、vHippo组织中GABA水平；利用实时荧光定量PCR检测vHippo组织中谷氨酸脱羧酶67(GAD 67)mRNA相对表达量；利用Western blot(WB)检测vHippo组织中GABAaRα1(GABAa receptor α1,GABAaRα1)、GABAaRα2、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达；利用试剂盒检测vHippo组织中MDA、T-SOD、CAT、GSH以及IL-6和TNF-α的含量。利用免疫荧光检测技术观察HT22细胞的核中Nrf2蛋白水平。结果：与EtOHWI模型组相比，Eptl低、高剂量治疗组大鼠在OF中央区活动距离极显著升高（P<0.01），分别为70.62%和124.21%，活动时间显著升高（P购买Tofacitinib<0.05或P<0.01），分别为251.75%和selleck Rapamycin371.62%, EPM的开放臂进入次数百分比显著升高（P<0.05或P<0.01），分别为110.33%和207.32%，滞留时间百分比显著升高（P<0.05或P<0.01），分别为99.56%和184.18%；血清CORT含量极显著降低（P<0.01）;vHippo组织中GABA含量和GAD67mRNA表达显著升高（P<0.05或P<0.01）;GABAaRα1、GABAaRα2、Nrf2和HO-1蛋白表达显著增多（P<0.05或P<0.01）;MDA水平极显著降低（P<0.01），而T-SOD、CAT和GSH的活性或水平显著升高（P<0.05或P<0.01）;IL-6、TNF-α含量显著降低（P<0.05或P<0.01）。体外实验结果显示，与空白对照组相比，200μmol/L H_2O_2刺激的HT22AMP-mediated protein kinase细胞核中Nrf2的水平极显著增多（P<0.01），但30μmol/L Eptl预处理显著抑制了Nrf2水平的增多（P<0.05）。结论：Eptl具有改善大鼠EtOHWI焦虑样行为的作用，其机制可能通过Eptl的抗氧化和抗炎作用而调节EtOHWI大鼠vHippo的GABAaR传递紊乱所介导。