加味防己黄芪汤通过抑制上皮间质转化过程中TGF-β1/Smad/Snail信号通路减轻肾间质纤维化

研究加味防己黄芪汤在小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型中,以及转化生长因子β1(selleck Torin 1TGF-β1)诱导大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK-52E)纤维化模型中对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响,探讨加味防己黄芪汤减轻肾间质纤维化的分子机制。对C57/BL小鼠予UUO手术,0.5、2倍加味防己黄芪汤以及蒙诺阳性对照药给AZD6738生产商药7 d后取材,Masson染色观察小鼠肾间质组织胶原沉积情况,Western blot、RT-qPCR检测肾组织中TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad2/3、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达水平。利用SD大鼠制备不同浓度加味防己黄芪汤含药血清,CCK-8检测不同浓度含药血清对NRK-52E增殖活力的影响。TGF-β1诱导NRK-52E纤维化模型,显微镜观察不同浓度含药血清处理后细胞形态。TGF-β1诱导NRK-52E纤维化模型,1倍加味防己黄芪汤含药血清处理,Western blot、RT-qPCR检测p-Smad2/3、Smad2/3、Snail、E-cadherin、α-SMA、vimentin表达水平,以及同等模型下shRNA沉默medullary rapheSnail基因后,1倍加味防己黄芪汤含药血清处理,测量指标同上。结果显示,加味防己黄芪汤能改善UUO模型小鼠纤维化损伤,减轻TGF-β1诱导NRK-52E纤维化模型中的纤维化,使EMT相关指标p-Smad2/3、α-SMA、Snail、vimentin蛋白及mRNA表达降低,E-cadherin蛋白及mRNA表达升高;当shRNA沉默Snail基因后,加味防己黄芪汤含药血清处理前后EMT相关指标E-cadherin、α-SMA及vimentin蛋白表达及mRNA水平差异没有统计学意义。结果表明,加味防己黄芪汤可能通过抑制TGF-β1/Smad/Snail信号通路减轻肾间质纤维化,参与EMT进程。