目的:本研究拟通过地黄叶总苷干预阿德福韦酯所致肾损害的乙肝小鼠模型,及地黄叶总苷主要有效成分毛蕊花糖苷干预阿德福韦酯损害的HK-2细胞模型。观察地黄叶总苷对阿德福韦酯治疗慢乙肝所致肾损害的治疗效果,并研究其治疗作用的可能机制。方法:1.动物实验:将转基因乙肝鼠用随机数表法分为25只,分为对照组9只和阿德福韦酯组16只,使用阿德福韦酯40mg/Kg(肾损伤模型剂量)每天一次灌胃建立HBV小鼠肾损伤模型,造模1周及2周检测各组肾功能(血肌酐、KIM-1、NGAL)。2周时每组处死4只小鼠。通过荧光定量PCR、蛋白印迹法、免疫组织化学染色检测各组肾脏组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达,并行透射电镜检测肾脏线粒体自噬现象。以小鼠血清KIM-1、NGAL明显升高为阿德福韦酯肾损伤造模成功标准。小鼠肾损伤模型成功后,将阿德福韦酯组HBV小鼠分为阿德福韦酯加地黄叶总苷胶囊治疗组(予阿德福韦酯1.75mg/kg(正常治疗剂量)每日一次及地黄叶总苷胶囊52mg/kg每日两次灌胃治疗)及阿德福韦酯加生理盐水组(予阿德福韦酯1.75mg/kg(正常治疗剂量)每日一次及生理盐水每日两次灌胃)PCI-32765,每组6只,同对照组(予同剂量生理盐水每日两次灌胃治疗)剩余的5只HBV小鼠继续治疗8周。检测肾功能,观察各组肾脏组织形态并通过荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组肾脏组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin变化。2.细胞实验:将不同浓度的ADV(0,11.25,22.5,45,90,180μmol/L)和HK-2细胞培养48小时后,观察ADV对HK-2细胞的作用。使用CCK-8试剂盒算出ADV对于HK-2细胞的IC50。再将不同浓度毛蕊花糖苷(0,9.375,18.75,37.5,75,150μmol/L)与加入了ADV半数抑制浓度的HK-2细胞共同培养48 h。观察毛蕊花糖苷对ADV干预后的HK-2细胞的作用,使用CCK-8试剂nanoparticle biosynthesis盒算出毛蕊花糖苷对ADV损害的HK-2细胞EC50。然后将HK-2细胞分为对照组(正常培养HK-2细胞不加入任何药物),阿德福韦酯组(HK-2细胞与半数抑制浓度的ADV)和阿德福韦酯加毛蕊花糖苷组(HK-2细胞与半数抑制浓度的ADV及半数有效浓度的毛蕊花糖苷)每组培养48小时。各组细胞干预培养后通过荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组HK-2细胞线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin变化。结果:1.动物实验:与对照组相比,阿德福韦酯组造模2周引起HBV小鼠肾功能异常及肾组织病理形态的损伤,且阿德福韦酯组肾组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达水平升高。透射电镜观察到阿德福韦酯组肾脏组织线粒体自噬现象。与阿德福韦酯加生理盐水组相比,地黄叶总苷胶囊CP-690550试剂治疗8周,HBV小鼠肾功能较前好转,损伤的肾组织病理形态有所改善,且治疗组线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达减低。2.细胞实验:毛蕊花糖苷对于ADV损害的HK-2细胞有保护作用。阿德福韦酯组粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达水平升高,且阿德福韦酯加毛蕊花糖苷组线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达减低。结论:地黄叶总苷对于阿德福韦酯治疗CHB所致的肾功能损害具有保护作用。地黄叶总苷对阿德福韦酯所致的肾损害的保护作用可能部分与抑制PINK1/Parkin介导的线粒体自噬有关。