植物病原菌的检测与鉴定在保护我国农林业经济与生态安全方面有着重要意义,是检疫工作的重中之重。等温扩增技术具有高效、特异性,可快速实现即时检测,已被应用于检疫工作中。Bst DNA聚合酶是等温扩增中的核心酶,具有较强的热稳定性、链置换活性和聚合酶活性,在恒温条件下快速、高效、特异性地扩增模板。本研究前期基于环介导等温扩增技术(loop-mediated let-7 biogenesisisothermal amplification,LAMP)建立了核酸检测体系,但DNA提取过程中加入的表面活性剂一定程度上影响了体系中Bst酶的活性,导致实验结果不稳定、重复www.selleck.cn/products/AZD2281(Olaparib)性低。本研究拟基于已解析的Bst聚合酶蛋白结构,设计相关关键氨基酸位点的突变,并表达纯化这些Puromycin小鼠突变体,比较突变体与野生型的酶活力,最终设计出可耐受1%表面活性剂的高效突变体,从而建立Bst酶在植物病原物检测的稳定体系,为田间病害监测及进出口检疫工作提供预警信息。