研究背景:乳腺癌仍是女性最常见的癌症,居于女性癌症死亡的第二位,远处转移和复发是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。到目前为止,乳腺癌的治疗仍然以化疗和手术治疗为主,但多药耐药、复发和转移等限制了化疗的疗效。近年来,免疫治疗已成为多种肿瘤治疗的新策略。但是,乳腺癌本身是一种免疫原性低的冷肿瘤,单药免疫治疗不能获得有效的抗肿瘤免疫反应。肿瘤免疫原性细胞死亡不仅可以将癌症转化为“治疗性疫苗”使濒死的癌细胞具有免疫原性,还可以通过激活树突状细胞进而激活特异性T细胞反应来触发免疫应答。一些传统的化疗药物可以诱导肿瘤免疫原性细胞死亡,这种化学免疫治疗弥补了传统化疗与免疫疗法的缺陷。乳腺癌表达高水平的CD47使肿瘤细胞能够逃避先天免疫系统的攻击,与肿瘤低免疫原性密切相关,抑制CCCRG 81045研究购买D47的表达可以增强乳腺癌抗肿瘤免疫。Toll样受体在先天免疫和适应性免疫中起连接作用,TLR7/8激动剂瑞喹莫德可以通过将M2型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞、活化树突状细胞等方式,调控肿瘤免疫微环境,从而增强机体免疫系统的抗肿瘤能力。本课题设想应用化疗诱导的免疫原性细胞死亡实现乳腺癌化学免疫治疗的同时联合其他免疫治疗方法,如抑制CD47表达、联合R84selleckchem8,共同调节免疫微环境,增强肿瘤免疫原性,利用免疫系统实现抑制肿瘤生长、复发和转移。纳米技术可以有效地将最佳剂量的免疫原性细胞死亡诱导剂准确地输送到特定部位,同时装载多种药物,使有效载荷不被降解,避免药物过早释放,实现联合免疫治疗。研究目的:验证化疗药紫杉醇能够诱导乳腺肿瘤免疫原性死亡,在此基础上构建一种能够同时高效递送不同种药物成分的纳米药物,探索化疗诱导的免疫原性细胞死亡联合其他免疫治疗共同增强肿瘤免疫原性实现抑制乳腺肿瘤生长、转移和复发的方案,为解决乳腺癌治疗难题提供研究基础。研究方法:用紫杉醇作用于乳腺癌4T1细胞后,利用流式细胞技术对细胞膜表面钙网蛋白的表达进行检测,ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1的分泌,验证紫杉醇能否诱导乳腺癌发生免疫原性死亡。通过双乳化法制备一种新型纳米药物(NP-PTX/si CD47/R848),Handshake antibiotic stewardship它包载了紫杉醇、抑制CD47表达的小干扰RNA和免疫调节剂R848。对NP-PTX/si CD47/R848的电势和粒径进行表征。通过建立小鼠原位乳腺癌4T1模型,研究NP-PTX/si CD47/R848尾静脉注射后4T1原位肿瘤生长情况及其免疫反应,并利用流式细胞术进行实验性检测,以探究药物对肿瘤免疫细胞的影响。研究结果:1.通过双乳化法成功制备了一种具有良好治疗效果的新型纳米药物NP-PTX/si CD47/R848,粒径71.9±3.6nm,表面电势40.4±0.8m V。2.4T1细胞被紫杉醇处理后,细胞膜表面上钙网蛋白增多。3.尾静脉注射纳米药物的乳腺癌模型小鼠,其原位肿瘤的质量、体积明显低于PBS组。4.尾静脉注射纳米药物的乳腺癌模型小鼠,其引流淋巴结中CD4/CD8的比值显著升高,外周血中树突状细胞百分比显著升高。研究结论:综上所述,化疗药物紫杉醇可以诱导乳腺癌细胞免疫原性死亡,通过双乳化法制备的纳米药物NP-PTX/si CD47/R848,可以有效地将紫杉醇、CD47si RNA和R848富集到肿瘤部位。4T1细胞荷瘤模型小鼠实验证明该纳米药物的能够增强肿瘤免疫原性,抑制乳腺肿瘤生长,为解决乳腺癌治疗提供了新方案。