基于单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析法检测玉米赤霉烯酮

目的:针对玉米赤霉烯酮(ZEN)建立一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫法。方法:通过羧甲基羟胺法合成玉米赤霉烯酮半抗原,采用碳二亚胺法分别偶联牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)合成玉米赤霉烯酮免疫原(ZEN-CMO-BSA)、包被原(ZEN-CMO-OVA)。免疫原(ZEN-CMO-BSA)经MALDI-TOF测定偶联比后用于免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合、筛选,以及细胞克隆化后,得到一株编号为5D10B12G3的杂交瘤细胞株,采用体内诱生法制备腹水,并使用辛酸-硫酸铵沉淀法对小鼠腹水进行纯化。对纯化后的抗体采用间接ELISA法测定抗体亲和力常数,并用此株单抗建立间接竞更多争酶联免疫法:包被量为0.0Docetaxel价格5μg/孔,抗体稀释64000倍,0.5%脱脂乳粉为封闭液,0.01 mol/LClinico-pathologic characteristics PBS(pH 7.4)为抗体及标品稀释液。结果:免疫原(ZEN-CMO-BSA)经MALDI-TOF测定偶联比为19.5,5D10B12G3株抗体亲和力常数为4.05×10~8 L/mol,在最优试验条件下,该方法灵敏度(IC_(50))为0.37μg/L,检出限(IC_(15))为0.05μg/L。讨论:该检测方法灵敏度高,操作相对简便,检出限(IC_(15))为0.05μg/L,远低于国家限量标准。