目的:探究铁死亡与增生性瘢痕发生发展的关系,并基于Nrf2/GPx4通路探究铁死亡对增生性瘢痕的影响及相关分子机制。方法:收集新疆医科大学第一附属医院6例增生性瘢痕组织,组织块培养法获取增生性瘢痕原代成纤维细胞(HSFs),实验分为5个组:空白对照组、5ng/ml TGF-β1组、5ng/ml TGF-β1+0.5μM erastin组、5ng/ml TGF-β1+1μM Fer-1组、5ng/ml TGF-β1+0.5μM erastin+1μM Fer-1组;CCK-8法检测不同浓度的Erastin和Fer-1对细胞活性的影响,筛选合适的药物浓度;倒置显微镜观察各组细胞生长状态;划痕实验检测细胞迁移能力;荧光探针法和试剂盒检测各组细胞中GSH、MDA、RGW-572016核磁OS、Fe~(2+)含量变化;q RT-PCR检测细胞中Nrf2、GPx4、SLC7A11、TFRC、α-SMA、COL-1基因表达;Western Blot检测各组细胞中Nrf2、GPx4、SLC7A11、TFRC、α-SMA、COL-1的蛋白表达,免疫荧光检测Nrf2的蛋白表达及定位。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:不同浓度的erastin处理的HSFs存活率逐渐下降,erastin干预细胞24h IC_(50)=0.566μM;Fer-1在浓度为0～20μM对HSFs无明显毒性(P<0.05);与对照组相比,TGF-β1组的HSFs中ROS、MDA、FeGrowth media~(2+)水平显著增加(P<0.05),GSH水平降低(P<0.001),GPx4和SLC7A11蛋白和m 确认细节RNA水平上调,TFRC蛋白和m RNA水平下调,TGF-β1组SLC7A11、GPx4表达明显降低;与对照组相比,TGF-β1+erastin干预24h后HSFs出现细胞铁死亡,形态上胞核大小无明显变化、胞质变少、核质比增加,触角变细拉长,细胞活力及迁移能力减弱(P<0.001),细胞中ROS、MDA、Fe~(2+)水平增加(P<0.01),GSH水平降低(P<0.0001),GPx4和SLC7A11m RNA和蛋白表达水平均下调,TFRC、COL-1 m RNA和蛋白表达均上调,α-SMA m RNA水平上调;与TGF-β1组相比,TGF-β1+erastin干预组GSH含量进一步降低,Nrf2、GPx4和SLC7A11蛋白表达均下降,而COL-1蛋白表达进一步增加;与对照组相比,TGF-β1+Fer-1组HSFs中ROS和MDA水平均下降,Nrf2、GPx4、SLC7A11 m RNA和蛋白表达上调,TFRC、α-SMA和COL-1蛋白表达均增加,此外,与TGF-β1组相比,TGF-β1+Fer-1干预后的HSFs中Fe~(2+)含量降低,TFRC m RNA和蛋白表达降低;与对照组相比,TGF-β1+erastin+Fer-1干预后细胞迁移能力及形态恢复至对照组水平,GPx4和SLC7A11蛋白表达上调,TFRC表达下调,但细胞中ROS和Fe~(2+)仍较高,MDA和GSH含量与对照组水平相当;与TGF-β1组相比,TGF-β1+erastin+Fer-1组中Nrf2、GPx4、SLC7A11 m RNA和蛋白表达上调,TFRC、COL-1表达均下调,且细胞中ROS、MDA和Fe~(2+)水平显著减少,GSH含量增加。结论:铁死亡可能参与增生性瘢痕的发生发展;erastin能够抑制Nrf2/GPx4通路增加脂质过氧化,诱导HSFs铁死亡,加重增生性瘢痕纤维化;Fer-1能够通过激活Nrf2/GPx4信号通路使细胞抗氧化能力增加,使GSH合成增多,减少脂质过氧化物蓄积,影响细胞铁代谢,有效预防HSFs发生铁死亡,抑制增生性瘢痕纤维化进程。