三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen,是我国传统的名贵中草药之一,已有600多年的使用历史,具有散瘀止血、消肿定痛、益气活血的功效,目前常用于防治心脑血管类疾病。皂苷是三七的主要活性成分,也是用于临床使用的三七相关制剂的主要成分。现代药理研究表明,三七皂苷类成分具有抗血栓、扩张血管、抗炎、抗衰老、抗肿瘤及抗氧化等药效活性。如何对其进行高效、安全的提取一直是该领域研究的热点。目前,提取此类成分的方法仍然主要采用传统的加热回流、水煎醇沉、渗漉等方法,并且主要使用乙醇、水作为提取溶剂。然而,这些溶剂存在一些缺陷,如乙醇易燃、低浓度的醇在提取时容易产生糊化现象,水的提取效率相对较低等。因此,若能找到一种新型、绿色、有效的溶剂对三七皂苷类成分进行提取,不仅对优化三七提取工艺具有重要价值,也为未来三七及其他含皂苷类成分中药的开发应用提供重要的借鉴和思路。天然低共熔溶剂(nature deep eutectic solvents,NADES),指由一定化学计量比的氢键受体(如季铵盐、两性离子等)和氢键供体(如羧酸,多元醇、糖等)组合而成的两组分或三组分低共熔混合物,在室温条件为均一稳定的液体。NADES因其原料都为天然产物,价格低,可回收,是一种新型环境友好型溶剂,符合绿色化学的理念。此外,NADES还具有良好的生物相容性,具有生物降解性、可接受的生物毒性和可持续性等优势。近年来,NADES在药用植物活性成分的提取及分离纯化领域备受关注。由于某些NADES与目标活性成分之间能形成较多的氢键相互作用力,因此NADES常表现出优于传统溶剂的提取能力。因此,本研究拟将NADES应用于三七皂苷类成分提取工艺的优化过程中,并对NADES的细胞毒性及三七皂苷类成分NADES提取液的相关生物活性进行考察,主要研究结果如下:1.NADES初筛:首先通过文献检索,筛选出了24种适用于皂苷类成分extramedullary disease提取的NADES组分及配比。之后通过制备共获取了14种在室温下为均一稳定液体的NADES溶剂。2.NADES种类、组分配比、含水量的确定:通过测定三七皂苷类成分在上述NADES溶剂中的溶解度,并考察NADES组分配比、含水量对三七皂苷类成分提取率的影响,以三七皂苷类成分的溶解度及提取率作为工艺的评价指标,确定了含水为45%(v/v)的1:2的氯化胆碱/尿素为适用于三七皂苷类成分提取的NADES溶剂。3.超声辅助NADES提取三七皂苷类成分及提取工艺的优化:以三七皂苷类成分的提取率为指标,采用超声辅助NADES提取三七中皂苷类成分,并结合单因素和响应面实验设计优化出最佳提取工艺条件,即在提取温度为47℃、提取时间为36 min、液固比为40 m L/g条件下,可实现三七皂苷类成分提取率为71.97 mg/g,与70%(v/v)甲醇的提取效果(70.89 mg/g)相当,优于水(65.60mg/g)的提取效果。4.NADES可回收性的初步考察:采用HPD101型大孔吸附树脂对三七皂苷类成分NADES提取液中的皂苷类成分进行初步的回收,皂苷类成分的回收率达84.57%,并且NADES体积回收率为75.76%。随后,根据优化的提取方法,回收的NADES对三七皂苷类成分的二次提取率为70.22 mg/g,与第一次提取(71.97mg/m L)效果相当。5.NADES的细胞毒性研究:使用噻唑蓝比色法和苏木素-伊红染色法考察了NADES对RAW264.7、HEK293及A549细胞的细胞毒性。与已发表的相关ILs的细胞毒性的研究结果相比,NADES具有相对较大的IC_(50)值,即表现出相对较小的细胞毒性。6.三七皂苷类成分NADES提取液的生物活性研究:(1)三七皂苷类成分NADECP-456773临床试验S提取液的抗炎活性研究表明,三七皂苷类成分NADES提取液对肿瘤坏死因子α和白介素1βm RNA表达的抑制作用优于水提液,且呈剂量依赖关系。(2)三七皂苷类成分NADES提取液的抗氧化活性研究表明,相比于水提液,三七皂苷类成分NADES提取液具有较强的OH自由基和ABTS自由基清除能力。(3)三七皂苷类成点击此处分NADES提取液的抗凝血活性研究表明,在考察的生药浓度范围内(1.5625-25 mg/m L),与空白组(生理盐水)相比,仅浓度为25 mg/m L的三七皂苷类成分NADES提取液能显著延长活化部分凝血酶时间(P<0.05);12.5和25 mg/m L的三七皂苷类成分NADES提取液能显著延长凝血酶原时间(P<0.05),其他剂量组无统计学意义,说明一定浓度的三七皂苷类成分NADES提取液具有较强的抗凝血活性。综上所述,通过对超声辅助NADES提取三七皂苷类成分工艺条件的优化,表明NADES可作为传统有机溶剂的有效的、绿色的和可持续的替代品,用于从三七中提取皂苷类活性成分。此外,NADES不仅具有相对较小的细胞毒性,而且其三七皂苷类成分NADES提取液整体上表现出较强的抗炎、抗氧化和抗凝血活性。这为今后NADES在中药制药领域中应用与创新发展提供了思路和有价值的参考。