山核桃Shell biochemistry饼粕作为山核桃加工的副产物,并未得到较好的开发利用。然而山核桃饼粕含有较高营养价值的蛋白质,可以作为一种潜在的生物活性肽来源。根据多肽得率、总抗氧化能力和分子量分布,从四种常见蛋白酶中选出复合蛋白酶为最佳蛋白酶并通过响应面优化确定最佳水解工艺为55℃,pH 7.7,酶浓度3900 U/g和2 h。山核桃饼粕蛋白水解物具有较高的抗氧化活性,DPPH和ABTS自由基清除率的IC50分别为0.249 mg/mL和0.362 mg/mL。经复合蛋白酶水解后所得Galunisertib试剂多肽分子量主要集中在<3 kDa范围,含量达到94.03±0.41%。HPLC分析结果显示,多肽的疏水性氨基酸含量较高。FTIR与XRD结果显示,α-螺旋和β-转角分别从29.49%和24.9%下降到20.31%和15.16%。β-折叠、β-反平行和无规则卷曲分别从24.23%、7.72%和13.66%增加到33.45%、9.30%和21.79%。超滤果显示,分子量(MW)<3 kDa的组分抗氧化能力最高。通过凝胶色谱和LC-MS/MS从中分离鉴定出6个肽段,其中VYGYADK和VLFSNY表现出最强的抗氧化能力。氨基酸替换实验结果表明,VYGYADK发挥抗氧化的关键氨基酸是Tyr。分子对接结果表明,VYGYADK和VLFSNY可以与Keap1蛋白的Kelch区域结合。细胞活力结果显示VYGYADK和VLFSNY对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有显著的保护作用(500-2000 μM)。同时,VYGYADK和VLFSNY显著降低了细胞内活性氧水平,增加了 SOD和CAT的活性。对超滤所得的三个组分>10 kDa,3-10 kDa和<3 kDa进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定,结果显示<3 kDa组分显示出最高的抑制活性,在3 mg/mL时抑制率达到47.90%。都其进行序列鉴定后利用PeptLGK-974抑制剂ide Ranker网站和Autodock Vina对所得多肽进行筛选并将多肽与α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶进行分子对接,以最低结合能为指标,筛选出四条可能具有降血糖活性的多肽,分别为PWLYFI、HAFFPL、WIFWVGP 和 QFPEW。PWLYFI、WIFWVGP 和 QFPEW 均表现出一定的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性。其中PWLYFI的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制率最高,在1 mg/mL时达到57.17± 6.32%和51.71±2.76%。