【目的】:观察美洲大蠊研粉干预的脊髓半横断损伤(h SCI)大鼠后肢运动功能恢复情况;探讨美洲大蠊研粉对h SCI大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬流以及氧化应激的影响。【方法】:1、实验分组:(1)第一部分:50只雌性SD大鼠随机数表法分为5组:分别为假手术(Sham)组、生理盐水(SCI+NS)组、美洲大蠊研粉210mg/kg(SCI+210mg/kg)组、美洲大蠊研粉420mg/kg(SCI+420mg/kg)组、美洲大蠊研粉630mg/kg(SCI+630mg/kg)组;Sham组仅打开椎板,不做任何处理,其他组别均行左侧脊髓半横断损伤。术前30min和术后每天均行灌胃处理,每只大鼠每次灌胃量均为5ml。Sham组和SCI+NS组为NS,其他组为5ml不同剂量的美洲大蠊研粉溶液,术后14d处死取材。(2)第二部分:60只雌性SD大鼠随机数表法分为生理盐水(SCI+NS)组和美洲大蠊研粉630mgVX-661 IC50/kg(SCI+630mg/kg)组,均行脊髓左侧半横断损伤,各30只。每组分为5个时间点,分别是术后6h、第1d、3d、7d、14d,每个时间点各6只。术前30min SCI+NS组予以5ml/只的NS灌胃、SCI+630mg/kg组以630mg/kg美洲大蠊研粉溶液5ml/只灌胃,根据时间点处死取材。2、观察指标:(1)观察第一部分大鼠各组术前、术后6h、第1d、3d、7d、14d的BBB评分和术后第14d的足迹印迹情况。(2)苏木精-伊红染色(HE染色):观察第一部分大鼠各组术后第14d h SCI区域的病理学变化。(3)尼氏染色:观察第一部分大鼠各组术后第14d h SCI区域的神经元数目。(4)ELISA实验:检测第一部分大鼠术后第14d h SCI区域MDA、8-OHdG的含量;检测第二部分大鼠术后6h、第1d、3d、7d、14d h SCI区域MDA、8-OHd G的含量。(5)Western blot实验:检测第一部分大鼠术后第14d h SCI区域的Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p62表达情况;检测第二部分大鼠术后6h、第1d、3d、7d、14d h SCI区域Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p62表达情况。【结果】:1、美洲大蠊研粉治疗14d后,与Sham组比较,其他组从术后6h起,BBB评分均低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);与SCI+NS组比较,SCI+210mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+630mg/kg组BBB评分在术后第7d、第14d均高于SCI+NS组,差异有统计学意义(P<0.05);SCI+210mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+630mg/kg组两两相互比较术后第14d BBB评分均有差异(P<0.05),其中SCI+630mg/kg组最高。足迹结果显示经过美洲大蠊研粉治疗后第14d,大鼠h SCI后的足迹无拖拽痕迹,足迹清晰,美洲大蠊研粉各剂量组足迹分辨情况均优于SCI+NS组。2、HE染色:SCI+NS组组织结构疏松,灰质部分明显损伤,神经元出现明显的水肿、核碎裂、核溶解等病理变化,整个视野未见正常形态的神经元,美洲大蠊研粉各剂量组神经元仍然出现水肿、核碎裂等病理变化,但神经元形态相对完整,其水肿程度、核碎裂、核溶解等病理变化较SCI+NS组轻。美洲大蠊研粉各剂量治疗均能减轻神经元的损伤程度,其中以剂量为630mg/kg的组别大鼠的神经元损伤最轻。3、尼氏染色:Sham组神经元数目最多,其次是SCI+630mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+210mg/kg组,SCI+NS组的神经元数目最少。4、MDA、8-OHdG的含量:第一部分各组大鼠与SCI+NS组比较,术后第14d Sham组、SCI+210mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+630mg/kg组MDA、8-OHd G含量均低于SCI+NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分SCI+NS组与SCI+630mg/kg组大鼠各时间点相互比较,术后第7d、第14d SCI+630mg/kg组MDA、8-OHd G含量低于SCI+NS组Fulvestrant,差异有统计学意义(P<0.05),两组分别进行组内各时间点比较,SCI+NS组MDA、8-OHd G术后6h时开始升高,术后第7d达高峰,然后开Integrative Aspects of Cell Biology始下降;SCI+630mg/kg组MDA、8-OHd G术后6h时开始升高,术后第3d达高峰,然后开始下降。5、Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p62表达:第一部分各组大鼠与SCI+NS组比较,术后第14d Sham组、SCI+210mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+630mg/kg组Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达均高于SCI+NS组,差异有统计学意义(P<0.05),SCI+210mg/kg组、SCI+420mg/kg组、SCI+630mg/kg组p62表达均低于SCI+NS组,Sham组p62高于SCI+NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分大鼠SCI+NS组与SCI+630mg/kg组各时间点比较,SCI+630mg/kg组Beclin-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达在术后第7d、第14d均高于SCI+NS组,p62在术后6h、第1d、3d、7d、14d均低于SCI+NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组分别进行组内比较,SCI+NS组Beclin-1表达从术后6h开始升高,第1d达到高峰随后开始下降,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达从术后6h开始升高,第3d达到高峰随后开始下降,p62的表达从术后6h开始下降,第3d时达到低峰,随后开始升高。SCI+630mg/kg组Beclin-1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达趋势一致,表达都从术后6h开始升高,第3d达到高峰随后开始下降,p62表达都从术后6h开始下降,第3d达到低峰,随后开始上升。【结论】:1、美洲大蠊研粉能促进h SCI大鼠后肢运动功能的恢复,且呈剂量依赖,以630mg/kg效果最佳。2、美洲大蠊研粉减少了大鼠h SCI区域MDA、8-OHd G的含量,抑制了氧化应激反应。3、美洲大蠊研粉上调了大鼠h SCI区域自噬蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ,下调p62的表达,促进自噬流,增强自噬。