目的:通过收集临床数据,探讨中国人内脏脂肪指数(Chinese visceral adipose index,CVAI)及内脏脂肪面积(Visceral fat area,VFA)与糖尿病肾病的相关性及疾病的预警价值。同时经体外细胞培养,研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)介导的炎症反应对高糖及内脏脂肪素处理人肾小管上皮细胞(Human renal tubular epithelial cells,HKC)细胞转分化的影响,为糖尿病肾病患者的治疗提供新思路。方法:第一部分:选取甘肃省人民医院内分泌科2020年10月至2022年10月住院治疗的2型糖尿病患者,共442例,收集患者临床相关床资料(一般资料、体格检查、生化指标等)。根据有无糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)分为DN组(n=209)、非DN组(n=233)。将CVAI及VFA与尿白蛋白排泄率、尿白蛋白/肌酐PUN30119细胞培养比值、血清肌酐、估算肾小球滤过率作Spearman相关性分析。采用多因素logistic逐步回归分析筛选2型糖尿病病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者发生DN的独立危险因素,并建立多因素logistic回归模型,通过受试者工作特征曲线对模型及各危险因素的预测价值进行评估。第二部分:体外培养HKC细胞,不同浓度(0ng/m L、25ng/m L、100ng/m L、200ng/m L、400ng/m L、800ng/m L、1600ng/m L)的内脏脂肪素(Visfatin)分别处理HKC细胞48h后,通过CCK8和ELISA分别检测细胞相对活性和促炎因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的含量,确定VisfatinEtoposide溶解度最佳浓度用于本次实验研究。不同浓度(0μM、5μM、10μM、20μM、40μM、80μM)的MG-132(TRAF6抑制剂)处理HKC 48h后,通过CCK8及q RT-PCR分别检测细胞相对活性和细胞内TRAF6基因的表达,筛选出MG-132最佳抑制TRAF6浓度;将细胞随机为4组:正常组(Coimmune resistancentrol)、高糖组(H-Glu)、高糖+内脏脂肪素组(H-Glu+Visfatin)、高糖+内脏脂肪素+MG-132组(H-Glu+Visfatin+MG-132)。高糖及内脏脂肪素处理HKC48h后,免疫荧光检测Control组、H-Glu组、H-Glu+Visfatin组细胞内的TRAF6的蛋白表达及q RT-PCR检测细胞内Toll样受体4(Toll-receptor,TLR4)、TRAF6、核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙黏素(E-cadherin)的m RNA的表达;MG-132处理细胞48h后,采用q RT-PCR法检测各组(Control组、H-Glu组、H-Glu+Visfatin组、H-Glu+Visfatin+MG-132组)细胞内NF-κB、α-SMA和E-cadherin的m RNA的表达及ELISA检测TNF-α及IL-6的释放。结果:第一部分:1.参与本次研究的442例对象中,DN组共209例,非DN组共233例。与非DN组比较,DN组糖尿病病程较长,体重、体质指数、腰围比较大,收缩压、舒张压、甘油三酯、脂质蓄积指数、CVAI、VFA、皮下脂肪面积较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.对两组进行Spearman相关性分析,结果显示:尿白蛋白排泄率、尿白蛋白/肌酐比值、血清肌酐与CVAI、VFA呈正相关(rs值分别为0.239、0.194、0.160、0.102、0.146、0.094,均P<0.05)。估算肾小球滤过率与CVAI之间存在负相关(rs=-0.197,P<0.05)。3.二元logistic回归结果显示,CVAI、VFA、收缩压及糖尿病病程是T2DM患者发生DN的独立危险因素(P<0.05)。4.ROC曲线分析显示,CVAI的曲线下面积为(AUC)为0.645,敏感度为0.507,特异度为0.734;VFA的AUC为0.632,敏感度为0.636,特异度为0.631;多因素logistic回归模型AUC为0.700,敏感度为0.670,特异度为0.652。此结果均优于各因素参数。第二部分:1.经过CCK8检测显示,不同浓度的Visfatin对HKC活性无显著性影响(P>0.05),但随着Visfatin浓度的增大,细胞培养上清中IL-6及TNF-α的浓度逐渐升高,当Visfatin浓度为200ng/m L时,IL-6和TNF-α的含量达到最大值。故选取浓度200ng/m L作为后续实验的内脏脂肪素的浓度。2.随着TRAF6抑制剂(MG-132)浓度的增大,HKC增殖抑制作用越强,细胞内TRAF6的m RNA的表达降低,根据细胞增殖抑制和TRAF6基因表达能力,选择20μM的MG-132浓度作为后续实验作用浓度。3.免疫荧光结果显示:各组TRAF6在均有表达,与Control组相比,高糖处理HKC细胞48h后TRAF6免疫荧光增强,与H-Glu组相比,H-Glu+Visfatin组可进一步增强细胞内TRAF6的绿色荧光;4.q RT-PCR法检测结果显示,与Control组相比,H-Glu组、H-Glu+Visfatin组中HKC内的TLR4、TRAF6和NF-κB、α-SMA的m RNA相对表达量升高(P<0.05),E-cadherin的m RNA相对表达量降低(P<0.05);与H-Glu组相比,H-Glu+Visfatin组中HKC内的TLR4、TRAF6和NF-κB、α-SMA的m RNA相对表达量明显升高(P<0.05),E-cadherin的m RNA相对表达量降低(P<0.05);5.抑制TRAF6后,与H-Glu组及H-Glu+Visfatin组相比,H-Glu+Visfatin+MG-132组细胞内NF-κB和α-SMA的m RNA表达降低,E-cadherin的m RNA表达升高(均P<0.05),细胞释放的IL-6及TNF-α炎性因子降低(P<0.05)。结论:1.CVAI、VFA和糖尿病病程是T2DM患者发生DN的独立危险因素,为内脏型肥胖患者的管理提供重要的理论依据。2.在高糖及内脏脂肪素干预下,细胞内TRAF6蛋白的表达增加,并且可上调α-SMA基因表达,下调E-cadherin基因表达,引起肾小管上皮细胞转分化。当抑制TRAF6表达后,可降低细胞内IL-6和INF-α的含量,能够抑制α-SMA的表达,促进E-cadherin的表达,可抑制肾小管上皮细胞转分化。从理论上看,适当剂量的MG-132抑制TRAF6的表达,从而有效的抑制HKC细胞的转分化,减少纤维化细胞的产生和细胞外基质生成,抑制TRAF6可有效的抑制炎症反应产生,为延缓及治疗糖尿病并发症提供重要的理论依据,也为DN的药物提供新的作用靶点。