目的本研究旨在评价葛花和枳椇子药对提取物(PHE)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠的治疗效果及分子作用机制的研究。方法将中药材葛花和枳椇子分别进行煎煮及干燥后,按一定比例混合获得葛枳提取物(PHE),使用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS分析PHE中所含有的化学成分。将雄性C57BL/6小鼠(7周龄,18-20g)随机分为四组(n=8):正常对照组(NC)、3%DSS干pediatric hematology oncology fellowship预组(DSS)、低剂量PHE治疗组(PHE-L,185mg/kg/d)和高剂量PHE处理组(PHE-h,740mg/kg/d)。从第8天到第14天,除NC组外的小鼠自由饮用3%的DSS溶液。从第1天到第14天,PHE治疗组的小鼠通过胃内给药分别给予低、高剂量的PHE。每天记录体重和药物反应。最后一天饮用DSS之后,处死小鼠,收集结肠组织待测。通过对小鼠体重的减轻、疾病活动指数(DAI)变化、结肠长度缩短程度和肠GSK2118436供应商道病理变化(HE染色法及免疫组化)评价PHE对DSS诱导的小鼠结肠炎的保护作用。通过ELISA和RT-qPCR水平来检测炎症细胞因子水平。通过生化试剂盒检测氧化应激水平(ROS,CAT,SOD,MDA和T-AOC)。小鼠结肠中的INOS和COX-2的表达量以及MAPK信号通路中JNK、p-JNK、ERK、p-ERK、P38、p-P38的蛋白表达量通过western blotting实验分析确定。采用16S rRNA测序方法分析和探究肠道菌群改善情况。结果PHE的化学成分组成在PHE中初步鉴定出27种化合物,黄酮、皂苷、挥发油、生物碱、甾醇和氨基酸,黄酮类、异黄酮类及其糖苷衍生物构成PHE中的大部分生物活性化合物。PHE对DSS诱导的小鼠结肠炎的疗效评价NC组小鼠体重平稳,状态良好,模型组小鼠体重显著下降,状态较差,并且疾病活动指数也表现出最高值,Nirmatrelvir化学结构出现血便和直肠出血,结肠长度与NC组相比减少了近一半。而PHE治疗组在不同程度上抑制了体重的下降(P<0.01),有效地降低了疾病活动指数(P<0.01),显著恢复了结肠长度(P<0.01),小鼠结肠炎组织病理学损伤明显恢复(P<0.05)。用ELISA和生化试剂盒检测炎性因子表达情况发现,与NC组相比,DSS治疗显著增加了NO和PGE2的产生,而PHE给药降低了炎症反应(P<0.01),模型组小鼠结肠组织中的促炎因子IL-6、TNF-α的表达水平显著升高(P<0.05),PHE给药后,上述炎症因子的趋势均出现了逆转,差异具有统计学意义(P<0.05),同时模型组结肠中这些促炎因子的mRNA表达也显著增加(P<0.01),PHE治疗降低了TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达(P<0.05),提示葛枳提取物可以有效治疗小鼠结肠炎。PHE治疗对结肠炎小鼠氧化应激的影响模型组的ROS和MDA含量提高到NC组的两倍以上(P<0.01),表明DSS诱导的结肠组织中存在严重的氧化应激。PHE治疗后低剂量和高剂量下的ROS和MDA的含量明显降低(P<0.01)。同时模型组显著降低了SOD和CAT的活性,而PHE给药恢复了酶活性(P<0.05)。模型组中T-AOC的降低也通过PHE治疗得到改善(p<0.01)。这些数据表明PHE显著改善了结肠组织中的氧化应激。PHE治疗对结肠炎小鼠INOS、COX-2和MAPK通路活化的影响Western Blot结果表明,与NC组小鼠相比,DSS组小鼠的结肠样品中的INOS和COX-2的表达显著提高,但PHE组小鼠的表达降低(P<0.05),DSS组中p-ERK、p-P38和p-JNK显著升高,而PHE治疗能够显著抑制MAPK信号通路中的蛋白表达。PHE对肠道菌群组成的影响小鼠肠道菌群16S rRNA基因测序分析结果显示PHE可以通过增强疣微菌门等有益菌和减少变形杆菌等有害细菌,从而改变肠道菌群的丰度和组成,由此进一步调节肠道免疫功能以减轻炎症,达到治疗结肠炎的作用。结论葛枳提取物通过改善炎症因子释放、调节氧化应激、调节肠道菌群的失衡来发挥治疗结肠炎的作用,PHE治疗结肠炎的作用机制可能是通过阻断i NOS、COX-2和MAPK信号通路的激活从而调节炎性细胞因子和介质的产生来实现的。