目的本研究通过构建大鼠大脑中动脉栓塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),探讨褪黑素对脑缺血再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠的影响及其可能存在的相关作用机制。方法将90只体重在250-280 g的成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,RNA biology随机分为3组:假手术组(Sham组),脑缺血再灌注损伤组(I/R组),褪黑素给药组(MT组)。Sham组只分离血管,不插栓。I/R组和MT组大鼠均制备为局灶性大脑中动脉栓塞模型。其中MT组在大鼠缺血2 h完成后拔栓以实现再灌同时通过腹腔注射10 mg/kg的褪黑素。再灌注24 h完成后,评估神经功能缺损程度并评分;利用TTC染色测量脑梗死体积;利用苏木精-伊红(HE)染色和尼氏(Nissl)染色观察各组大鼠脑组织形态和尼氏小体的变化;检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量;TUNEL细胞凋亡染色观察各组神经元的凋亡情况;免疫荧光染色观察TLR4和MyD88蛋白的表达情况。Western blot测定TLR4、MyD88、Cleaved Caspase-3和Bcl-2的蛋白表达。结果1、神经功能评分结果显示,Sham组大鼠神经功能正常,无神经功能缺损。I/R组与MT组大鼠神经功能均有受损,且MT组与I/R组相比神经功能缺损程度得到了一定的恢复且差异有统计学意义(P<0.01)。2、TTC结果显示,Sham组大鼠脑组织正常,无梗死区;I/R组大鼠可见明显梗死区,MT组与I/R组相比脑梗死区体积显著缩小且差异有统计学意义(P<0.01)。3、I/R组与Sham组相比SOD活性显著降低,MDA含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);MT组与I/R组相比SOD活性显著增加,MDA含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。4、HE染色结果显示,Sham组组织结构完整正常,未见明显水肿,神经元细胞形态完整,核仁清晰;I/R组大鼠间质水肿明显,与Sham组相比神经细胞数目明显减少,可见神经细胞坏死以及坏死后留下的空泡;MT组与I/R组比较神经元数目增多,空泡减少,形态相对规则可见少量的神经元固缩深染。5、Nissl染色结果显示,Sham组神经细胞排列规律整齐,尼氏小体相对表达量多,染色深。与Sham组相比,I/R组大鼠神经元间排列疏松层次减少,出现尼氏小体的减少或消失,染色变浅;MT组与I/R组相比染色较深,神经细胞排列较为整selleck HPLC齐紧密细胞层次增加,尼氏小体数量减少不明显。6、TUNEL染色结果显示,I/R组大鼠脑组织切片细胞凋亡率最高,与I/R组相比MT组细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.01)。7、Western blot结果显示,与Sham组相比,I/R组大鼠TLR4、MyD88以及Cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低差异有统计学意义(P<0.01)。与购买CH-223191I/R组相比MT组TLR4、MyD88以及Cleaved Caspase-3蛋白的表达显著降低且差异有统计学意义(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、脑缺血再灌注损伤的机制涉及到TLR4/MyD88信号通路;2、褪黑素可能通过调控TLR4/MyD88信号通路,发挥抗氧化应激及抗凋亡的作用,从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。