谷氨酸棒状杆菌属于革兰氏阳性细菌,作为研究分子机制的模式菌株之一,是重要的工业发酵菌株,能够发酵生产多种氨基酸及小分子化合物。因其具有良好的酚类物质降解和耐受能力,所以CCS-based binary biomemory是用于木质纤维素进行生物转化最具潜力的底盘微生物之一。根据前期研究,发现谷ZD1839小鼠氨酸棒状杆菌一个未知功能的假定蛋白GprA在抗酚类物质等环境因子胁迫中发挥重要作用,并初步筛选到与GprA互作的靶标蛋白分枝菌酰转移酶A(MytA)。本论文在验证GprA与MytA互作的基础上,进一步研究了mytA缺失对谷氨酸棒状杆菌抗酚类物质及其他环境胁迫能力的影响,验证MytA是否参与GprA抗酚类物质胁迫功能,并阐明了GprA对MytA体外酯酶活性的影响及关键互作位点,从而揭示了GprA通过MytA介导谷氨酸棒状杆菌抗酚类物质胁迫的分子作用机制。研究结果将有助于我们进一步了解谷氨酸棒状杆菌环境适应机制,也为我们进一步改造基因工程提供了思路。研究结果如下:1、qRT-PCR实验、生长胁迫实验和存活率实验表明MytA参与了谷氨酸棒状杆菌抵抗酚类物质、过氧化物、热、乙醇和酸胁迫功能。2、构建ΔmytA突变体及回补菌株,通过存活率实验表明MytA参与了GprA介导的抗酚类物质胁迫;通过透视电子显微镜观察和薄层色谱分析实验发现,与ΔmytA突变体类似,gprA缺失导致谷氨酸棒状杆菌细胞包膜结构缺陷,细胞包膜脂质海藻糖单分枝菌酸酯(TMM)/海藻糖双分枝菌酸酯(TDM)含量比值升高。3、分子对接实验、细菌双杂实验和体内共表达实验表明GprA与MytA的N-末端催化结构域存在相互作用。4、构建相关克隆,重组表达并纯化GST-GprA蛋白、His_6-MytA蛋白、His_6-MytA_(44-406)蛋白及GST-GprA_(mut)三点突蛋白;通过体外酯酶活性测定实验发现GprA蛋白能显著增强MytA的N-末端酯酶活性,GST-GprA_(mut)不能促进His6-MytA的体外酯酶活购买Empagliflozin性,说明第24位Asn残基、第27位Lys残基和第28位Val残基是GprA促进MytA体外酯酶活性的关键结合位点。