非洲猪瘟病毒CD2v重组蛋白真核表达及单克隆抗体的制备

本研究目的为表达非洲猪瘟病毒CD2v蛋白作为抗原，制备鼠源性CD2v单克隆抗体。以ASFV-SY18分离株为模板合成EP402R基因，构duck hepatitis A virus建pcDNA3.1-His真核表达载体，通过Expi-CHO表达系统获得重组CD2v蛋白，应用细胞融合技术制备杂交瘤细胞并筛选出单克隆抗体细胞株。实验结果显示，截短EP402R基因成功克隆至表MS-275分子式达载体，构建出pcDNA3.1-CD2v-His质粒，转染至CHO细胞后收获重组蛋白，使用镍亲和层析法纯化带有His标签的CD2v蛋白。经SDS-PAGE及Western Blot确认，CD2v蛋白大小为55 kDa且与免疫小鼠血清反应良Compound C体内实验剂量好。共筛选出3株杂交瘤细胞株分别命名为2D6，4B2及4G12。间接ELISA鉴定三株杂交瘤细胞所制备的腹水效价均高达1:12800，Western blot及间接免疫荧光实验证明三株单抗均可特异性识别重组CD2v蛋白。本研究成功制备了CD2v重组蛋白及其特异性单抗，为开发竞争性ELISA诊断方法及ASFV野毒鉴定奠定了基础。