背景和目的脓毒症是可能诱发多器官功能障碍综合征的系统性感染。过度炎症和先天免疫反应是脓毒症的特征之一,心脏,肾脏,肝脏是最容易受到损伤的器官。与细胞凋亡不同,细胞焦亡是一种炎症程序性细胞死亡方式,GSDMD是其关键执行者。这提示我们细胞焦亡是治疗Talazoparib抑制剂脓毒症的重要靶点,抑制细胞焦亡的过度激活,会抵抗脓毒症导致的多器官损伤。但是目前没有直接抑制细胞焦亡治疗脓毒症的临床报道。目前针对脓毒症的研究机制很多,但是由于发病机制非常复杂,也没有临床药物抑制细胞焦亡治疗脓毒症患者的报道,故探索针对抑制焦亡治疗脓毒症的临床药物仍面对许多挑战。血必净注射液(XBJ)是中医药治疗脓毒症的临床常用注射剂。自2020年来,广泛治疗新冠肺炎。虽然XBJ已经广泛应用于临床治疗,并且具有较好的疗效,由于XBJ成份较多,其作用机制十分复杂,目前仍有诸多科学问题需要回答。课题组前期研究揭示XBJ有效缓解脓毒症小鼠诱导的心脏功能障碍和肺损伤。虽然XBJ对细胞焦亡的影响尚未有报道,但是在前期转录组中存在干预细胞焦亡通路的机制。并且有研究发现,XBJ中两种化合物芍药苷和羟基红花黄色素A可以通过抑制细胞焦亡抵抗缺血再灌注导致的心脏功能障碍和脑损伤,我们前期研究发现C0127-2(芍药苷和羟基红花黄色素A的组合)可以发挥与XBJ类似的疗效。这提示XBJ中有抑制细胞焦亡靶点的化合物,可以达到通过抑制细胞焦亡抵抗脓毒症的目的。因此提出“XBJ通过抑制细胞焦亡治疗脓毒症的假说”,并提出了关键科学问题:1.XBJ是否通过抑制细胞焦亡防治脓毒症导致的器官损伤?2.C0127-2能否达到与XBJ类似的抑制细胞焦亡作用?实验目的:基于以上研究背景,此课题探究XBJ能否抑制细胞焦亡发挥治疗脓毒症导致的器官损伤的作用,组合物C0127-2能否起到与XBJ类似的抗细胞焦亡作用,对于明确XBJ治疗脓毒症的机制研究和主要药效成分起到重要作用。实验方法:在本研究中,体内实验利用XBJ治疗CLP诱导的小鼠脓毒症,并且探索前期课题组研究的羟基红花黄色素A和芍药苷的组合物C0127-2抑制细胞焦亡治疗脓毒症导致的器官损伤的研究。体外实验利用LPS+ATP诱导RAW264.7巨噬细胞焦亡,并研究XBJ和C0127-2干预的药效和机制。1.体内实验:(1)建立小鼠脓毒症CLP模型,ICR小鼠随机分为Sham组,CLP组,XBJ组,C0127-2组,利用病理学评价XBJ和C0127-2的保护脏器损伤的药效。(2)探索XBJ和C0127-2能否通过抗细胞焦亡抵抗脓毒症导致的心脏损伤。(3)探索XBJ和C0127-2能否通过抗细胞焦亡抵抗脓毒症导致的肾脏损伤。(4)流式细胞仪检测血液和脾脏中巨噬细胞的PI阳性水平评估XBJ和C0127-2的抗焦亡能力。2.体外实验:(1)成功建立巨噬细胞细胞焦亡模型,实验分组为Control组,Model组,XBJ组,C0127-2组。(2)流式细胞仪检测巨噬细胞的PI阳性水平评估XBJ和C0127-2的抗焦亡能力。(3)PCR,免疫荧光,WB实验揭示XBJ和C0127-2抗细胞焦亡的机制。(4)细胞活力,细胞毒性和WB实验揭示C0127-2中真正发挥抵抗细胞焦亡的成分。实验结果;1.体内实验结果显示,XBJ和C0127-2能够抑制细胞焦亡抵抗脓毒症诱导的器官损伤,具体体现在以下几个方面:(1)在脓毒症模型中,HE病理学检测发现,XBJ和C0127-2改善了CLP诱导的心脏组织损伤,肾组织损伤,肝脏损伤。(2)PCR实验,免疫组化,WB实验Tamoxifen采购结果显示,XBJ和C0127-2抑制细胞焦亡来保护心脏和肾脏损伤。(3)流式细胞仪检测血液中巨噬细胞的细胞焦亡(PI阳性),发现XBJ和C0127-2降低血液和脾脏中巨噬细胞的PI阳性水平。2.体外实验结果显示,XBJ和C0127-2能抑制LPS+ATP诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡,体现在以下几个方面:(1)通过CCK8实验和LDH实验发现,XBJ和C0127-2可以抵抗细胞焦亡导致的细胞活力降低和LDH的高水平。(2)流式细胞仪检测巨噬细胞的PI阳性水平实验发现,LPS+ATP刺激后,模型组的巨噬细胞的PI阳性率显著上升,XBJ和C0127-2显著降低了PI阳性水平。(3)通过PCR实验,细胞免疫荧光实验和WB实验发现,LPS+Aburn infectionTP刺激后,在模型组巨噬细胞中细胞焦亡相关蛋白表达水平显著上升,而XBJ组和C0127-2组显著降低了这些分子的表达。(4)羟基红花黄色素A可以拮抗细胞焦亡导致的细胞活力下降,并降低LDH水平升高,还抑制caspase-11的激活。而芍药苷没有发挥抗焦亡作用。结论:1.XBJ可以通过抑制细胞焦亡抵抗脓毒症导致的器官损伤2.C0127-2可以拮抗脓毒症诱导的器官损伤,并抵抗细胞焦亡。3.羟基红花黄色素A是发挥抗焦亡作用的关键化合物