目的:毛蕊异黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及诱导凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法:1.基于课题组前期毛蕊异黄酮作用肺腺癌SPC-A1细胞实验研究,参考选择毛蕊异黄酮浓度梯度为(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于多发性骨髓瘤U266细胞,分别取12、24、36和48h时间点,采用CCK8法检测毛蕊异黄酮对各组细胞活力的影响,计算不同时间点IC20、IC40和IC60对应的毛蕊异黄酮浓度,筛选并验证所选择的后续实验的干预时间及浓度。2.采用FCM法检测毛蕊异黄酮对各组细胞周期阻滞情况。3.采用TUNEL法检测毛蕊异黄酮各组细胞凋亡影响。4.采用WB检测毛蕊异黄酮干对各组细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、NF-κB p65和p-IκBα的表达影响。5.采用RT-qPCR检测细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1 m RNA的表达情况。结果:1.毛蕊异黄酮浓度梯度(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于U266细胞不同时间点(12、24、36和48h)后,对CCK8法所测OD值分析:随着毛蕊异黄酮浓度梯度不断增加对U266细胞的抑制率逐渐增加,同一浓度随着培养时间的延长对U266细胞的抑制率也逐渐增加,毛蕊异黄酮对U266细胞的抑制作用呈明显浓度-时间依赖性。根据公式分别计算出不同时间毛蕊异黄酮作用U266细胞的IC20、IC40和IC60值,并对IC20、IC40和IC60所对应浓度验证后选取浓度48h及48h时所对应IC20、IC40和IC60的毛蕊异黄酮的浓度(13.88μM、34.2μM和91.78μM)为后续实验的作用条件。2.通过FCM法探究不同浓度毛蕊异黄酮作用于U266细胞后对细胞周期的影响,结果显示毛蕊异黄酮可以使U266细胞得细胞周期停medical worker滞在G0/G1期,并具有浓度依Apoptosis抑制剂赖性。3.TUNEL染色在镜下观察细胞的凋亡情况,随着毛蕊异黄酮浓度逐渐增加,U266细胞的凋亡数量逐渐增加,具有明显的浓度依赖性。4.WB结果显示各实验组药物处理后蛋白NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1的表达量均下调,Bax蛋白的表达水平上调,与对照组比较,均有显著差异(P<0.05),其中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1在毛蕊异黄酮浓度为13.88μM、34.2μM组时蛋白的表达水平有明显的差异性(P<0.05),34.2μM、91.78μM浓度处理的细胞中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1蛋白的表达水平变化不明显(P>0.05),但是Bax蛋白上调水平与毛蕊异黄酮浓度有明显的依赖性(P<0.05)。5.RT-qPCR结果显示不同作用浓度的毛蕊异黄酮处理后细胞中Cyclin D1、CDK4m RNA的表达水平均下调,与对照组比较均有明显差异(P<0.05),13.88μPS-341配制M与34.2μM浓度处理的细胞差异性明显(P<0.05),34.2μM与91.78μM浓度处理的细胞中Cyclin D1和CDK4 m RNA的表达无明显差异性(P>0.05)。结论:CA有抑制U266细胞增殖及促进其凋亡的作用,机制可能与抑Cyclin D1、CDK4、p-IκBα、NF-κB p65和Bcl-2蛋白的表达及促进Bax蛋白的表达相关。