慢性心力衰竭(Chronic Heart Failure,CHF)是一种在中老年患者中发病率较高的心血管疾病,而心肾阳虚型慢性心衰(chronic heart failure with heart-kidney yang deficiency,CHF-HKYd)是由于肾阳不足所致的一种CHF常见证型,心室重构是慢性心衰的病理机制,心室重构的病理基础是心肌纤维化(Myocardial Fibrosis,MF)。二参真武汤(Er Shen Zhen Wu Decoction,ESZWD)是安中医一附院新安医学传人程晓昱主任根据多年临床经验,基于古代经典名方真武汤一方,另添加了红参和丹参两味药材组成,在临床上对CHF-HKYd疗效显著,经过前期研究基础,ESZWD的药效物质基础已经明晰,但是作用机制还不清楚,本文基于前期研究基础,探究ESZWD对CHF-HKYd药理作用机制。目的:(1)探究二参真武汤对CHF-HKYd心肌纤维化的药物疗效;(2)基于TGF-β1/Smads和PI3K/AKT/mTOR通路探究二参真武汤对心肌纤维化细胞模型的作用;(3)基于TGF-β1/Smads和PI3K/AKT/mTOR通路探究二参真武汤对心肾阳虚型CHF大鼠心肌纤维化的治疗作用。方法:在动物方面,将大鼠平均分为六组,正常组、模型组、二参真武汤低、中、高剂量(3.96、7.92、15.84 g/kgselleck抑制剂)组和阳性药贝那普利组(0.5 mg/kg),通过双侧甲状腺切除联合阿霉素(0.02%阿霉素1 m L/100g腹腔注射,每周2次)注射,建立CHF-HKYd大鼠模型,检测大鼠心功能,眼眦取血,检测氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)、三点甲medical philosophy状腺氨酸(Triiodothyronine,T3)、甲状腺素(Thyroxine,T4)水平验证模型成功后,灌胃ESZWD四周后取心脏组织做HE染色、Masson染色、免疫组化标记α-SMA检测纤维化程度,Western blot法检测心脏组织collagen I、collagen III、α-SMA的蛋白水平和m RNA含量;在细胞方面,使用乳鼠提取原代心肌成纤维细胞,台盼蓝染色检测细胞活性,免疫荧光检测波形蛋白验证细胞纯度,符合要求后使用2到3代细胞进行后续实验,使用含有不同浓度的Ang II(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)培养基刺激细胞,CCK-8确定血管紧张素II(Ang II)刺激原代心肌成纤维细胞的时间与浓度,建立纤维化细胞模型,取30只大鼠平均分为三组分别灌胃生理盐水,ESZWD(15.84 g/kg)和贝那普利(0.5 mg/kg),每天一次连续7天,末次灌胃1小时后取血制备血清,细胞分为四组,正常组、模型组(1μmol/L Ang II刺激24h)、ESZWD组和贝那普利组,检测细胞内collagen I、collagen III、α-SMA的蛋白水平和m RNA含量;最后取大鼠心脏组织和原代心肌成纤维细胞检测TGF-β1/Smads和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白水平和m RNA含量,免疫荧光检测大鼠心肌组织和原代心肌成纤维细胞中的TGF-β1和PI3K的表达。结果:(1)ESZWD可显著抑制心肾阳虚型慢性心衰大鼠心功能下降。(2)ESZWD能有效减轻CHF-HKYd大鼠的心脏损伤。(3)ESZWD能有效减轻CHF-HKYd大鼠心肌纤维化。(4)ESZWD含药血清改善Ang II诱导的selleck产品细胞纤维化。(5)ESZWD可以抑制TGF-β1/Smads和PI3K/AKT/mTOR信号通路减轻MF而改善CHF-HKYd。结论:ESZWD可以调控TGF-β1/Smads和PI3K/AKT/mTOR信号通路减少胶原的产生,提高细胞自噬,减轻心肌纤维化,抑制心室重构,最终改善了心肾阳虚型慢性心衰。