研究背景乳腺癌及其肺转移已成为严重危害女性健康的重大公共卫生问题。晚期乳腺癌会向远端组织内转移,其中肺转移是乳腺癌最常见的转移类型之一,绝大多数存在肺转移的乳腺癌患者存活率显著较低,因而发现能够抑制乳腺癌肺转移的治疗措施是该领域研究的热点。乳腺肿瘤组织内浸润着大量的巨噬细胞,通常呈现出促肿瘤的M2表型,其能够促进肿瘤的生长、血管生成以及转移。巨噬细胞具有较强的可塑性,其M1表型具有抗肿瘤功效,因此寻求安全有效的药物诱导肿瘤组织中巨噬细胞向M1型极化对抑制乳腺肿瘤肺转移至关重要。2-己基-4-戊炔酸(HPTA),是丙戊酸的衍生物,一种新型的HDACi,能够抑制乳腺肿瘤的生长,但HPTA能否通过促进肿瘤组织内巨噬细胞浸润并诱导其向M1型极化,从而实现对乳腺肿瘤肺转移的抑制目前还未见报道。因此,本研究通过建立小鼠原位乳腺肿瘤自发肺转移模型以探究HPTA是否能够通过诱导肿瘤组织内巨噬细胞向M1极化,抑制乳腺肿瘤肺转移的机制,旨在为乳腺肿瘤及其肺转移的临床治疗提供可靠的理论基础和实验支撑。研究方法动物水平上,通过建立4T1-Luc小鼠原位乳腺肿瘤自发肺转移模型,探究HPTA对原位肿瘤生长和肺转移肿瘤形成的影响以及可能有关的免疫机制。H&E染色观察小鼠原位肿瘤和肺转移肿瘤组织病理形态;Bouin’s染色和肺部活体成像观察乳腺肿瘤的肺转移情况;免疫组织化学(IHC)检测原位肿瘤和肺转移肿瘤组织内肿瘤细胞增殖和血管生成情况,以及髓系源细胞、巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的浸润情况等;实时荧光定量PCR(RT-qPRC)检测原位肿瘤和肺转移肿瘤组织内M1型和M2型巨噬细胞功能标志物以及有关的T细胞趋化因子;蛋白质印迹实验(WB)检测原位肿瘤和肺转移肿瘤组织内巨噬细胞功能标志物。细胞水平上,通过划痕实验证实HPTA通过诱导巨噬细胞向M1型极化进而抑制乳腺癌细胞的转移。研究结果1.HPTA能够抑制原位乳腺肿瘤的生长和肿瘤血管的生成,同时促进肿瘤组织内空泡性坏死结构的形成。2.HPTA能够降低原位乳腺肿瘤向肺部的转移,同时抑制肺转移肿瘤组织内细胞增殖和血管生成,延长肺转移小鼠的生存期。3.HPTA处理后,小鼠原位肿瘤和肺转移肿瘤组织内F4/80和CD11b的阳性表达显著升高,提示髓系来源的巨噬细胞可能参与了 HPTA介导的小鼠乳腺肿瘤生长和肺转移抑制。4.HPTA能够抑制原位肿瘤和肺转移肿瘤组织内巨噬细胞的M2表型标志物,如CVX-765细胞培养D2MLN4924研究购买06、IL-10、Arg-1等的表达,促进M1表型标志物,如CD80、TNF-α、iNOS等的表达。5.HPTA能够上调小鼠原位乳腺肿瘤和肺转移肿瘤组织内T细胞趋化因子CXCL9/10/11的表达,促进CD8+T淋巴细胞的浸润及其功能标志物颗粒酶B的表达。6.在细胞水平上,HPTA能够诱导巨噬细胞向M1型极化进而抑制乳腺癌细胞的转移,同时上调巨噬细胞Autoimmune dementia来源的CXCL9/10/11的表达。研究结论1.通过小鼠乳腺癌自发肺转移模型,HPTA不但能够抑制原位乳腺肿瘤的生长,还能抑制肿瘤向肺部的转移,延长小鼠的存活。2.HPTA能够促进原位和肺转移肿瘤组织内巨噬细胞向M1型极化,M1型巨噬细胞分泌的T细胞趋化因子CXCL9/10/11可能参与肿瘤组织内CD8+T淋巴细胞的招募。3.在细胞水平上,HPTA能够通过调控巨噬细胞向M1型极化进而抑制乳腺癌的转移。