大黄酸(RH)是一种主要从中药大黄中提取出的一种蒽醌类化合物,具有良好的抗肿瘤活性,对结肠癌、鼻咽癌、胰腺癌均有良好的抑制作用。但由于其水溶性低,严重限制了其在临床上的开发利用。普朗尼克(Pluronic)所形成的胶束内核由于大量醚氧原子的存在使其形成胶束的内核仍处于一个相当亲水的环境,因此其临界胶束浓度(CMC)较高。通过化学键将RH缀合到Pluronic两端,然后制备成前药胶束。在RH蒽醌环的π-π堆积作用下,可以使形成的胶束CMC降低,增加胶束在体内的稳定性。因此本课题设计了一种含有二硫键的Pluronic-SS-RH聚合物前药,通过溶剂挥发法将含有二硫键的Pluronic-SS-RH聚合物前药制备成一种具有氧化还原敏感性的前药胶束。最后我们研究了前药胶束细胞药物动力学规律和体内药物动力学规律,为其开发利用提供参考。本课题所进行的研究内容如下:制备含有二硫键的Pluronic-SS-RH聚合物前药。通过羰基二咪唑(CDI)活化Pluronic两端的羟基,将含有二硫键的胱胺连接在Pluronic两端,最后通过酰胺反应将RH连接在改性以后Pluronic两端的氨基上制得Pluronic-SS-RH聚合物前药。通过核磁共振氢谱,红外光谱,紫外光谱等表征其结构,证明Pluronic-SS-RH聚合物前药的成功合成。利用溶剂挥发法制备PlurZ-VAD-FMK NMRonic-SS-RH前药胶束。所制备的前药胶束的平均粒径为182.4±4.7 nm,PDI为0.130±0.42,Zeta电位为-10.5 m V。前药胶束的含药量为5.7%。透射电镜显示前药胶束呈类圆球形,大小均一,且分散均匀,无团聚现象。前药胶束的CMC为46.49μg/ml,远低于单独的Pluronic形成胶束CMC。前药胶束保存15天,其粒径大小和PDI无明显变化,表明其储存稳定性良好。当前药胶束的稀释50倍后,前药胶束的粒径仍然保持在220 nm以内说明其稀释稳定性良好。Pluronic-SS-RH前药胶束在p H=5.5 GSH为20m M的条件下药物的累积释Obesity surgical site infections放率达73%,明显高于p H=5.5 GSH为2μM的条件下的累积释放率,说明Pluronic-SS-RH前药胶束具氧化还原敏感性。Pluronic-SS-RH前药胶束在GSH的存在下孵育24 h,粒径由195 nm增加到了450 nm。PDI由孵育前的0.186增加到了0.420。这进一步证明了Pluronic-SS-RH前药胶束具氧化还原敏感性。空白材料Pluronic在1 mg/ml以内的溶血率均小于5%;空白材料Pluronic与人正常肝细胞细L-02和人结肠癌细胞SW-480孵育48h后其细胞存活率均大于80%。空白材料细胞毒性实验和溶血性实验结果表明该材料的生物相容性良好。体外抗肿瘤实验选用人结肠癌细胞HCT-116、SW-480、SW-620作为模型细胞,通过MTT法考察游离RH与Pluronic-SS-RH前药胶束对三种结肠癌细胞毒性。结果显示游离RH与Pluronic-SS-RH前药胶束在药物浓度为10～125μM的范围内,细胞存活率不断下降,呈现出明显的浓度依赖性。随着给药时间Roxadustat体内实验剂量的延长,游离RH与Pluronic-SS-RH前药胶束组的细胞存活率均有明显下降的趋势,游离RH与前药胶束对三种结肠癌细胞的细胞毒性有明显的时间依赖性。并且Pluronic-SS-RH前药胶束的对肿瘤细胞的抑制作用明显强与游离的RH。细胞毒性实验结果表明RH制备成氧化还原敏感性的胶束以后,可以显著增加药物对肿瘤细胞的毒性。通过制备负载香豆素-6的Pluronic-SS-RH前药胶束在荧光倒置显微镜下观察前药胶束的细胞摄取情况,结果显示开始时负载香豆素-6的前药胶束细胞摄取量明显低于香豆素-6,但在6 h以后前药胶束可以与游离的香豆素-6达到相同的摄取量,证明将RH制备成前药胶束后不会影响肿瘤细胞对RH的摄取量。本文建立了高效液相色谱法测定细胞液中RH含量的方法,并对该分析方法进行了方法学验证。结果表明:所建立的测定细胞液中RH含量测定方法专属性良好,并具有较好的精密度和准确性。通过所建立的含量测定方法,测定药物摄取阶段与药物消除阶段细胞内RH的含量,进行细胞药物动力学研究。结果显示前药胶束组与游离RH相比,药物半衰期(t_(1/2))和药时曲线下面积(AUC),滞留时间(MRT)均有所增加。RH在细胞内的滞留时间延长有利于增加RH对细胞的毒性。本文建立了高效液相色谱法测定大鼠血浆中RH的含量的方法,并对该分析方法进行了方法学验证。结果表明:所建立的测定大鼠血浆中RH含量测定方法专属性良好,并具有较好的精密度和准确性。通过所建立的含量测定方法,测定24 h内不同时间点大鼠血浆中RH的含量,进行体内药物动力学研究。结果显示前药胶束组与游离RH组相比,药物半衰期(t_(1/2))和药时曲线下面积(AUC),体内滞留时间(MRT)均有所增加。药物在体内的半衰期、滞留时间延长,有利于增强RH对肿瘤的治疗效果。综上所述,本课题所制备的Pluronic-SS-RH前药胶束具有明显的氧化还原敏感性,且稳定性和生物安全性良好。体外细胞毒性实验、细胞药物动力学研究、体内药物动力学研究证实该前药胶束可以提高对肿瘤治疗效果,在肿瘤治疗方面有很大的潜力。