板蓝根IsatidisJNJ-42756493细胞培养 Radix,为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根,性寒、味苦,治疗外感发热、温病初起、咽喉肿痛、温毒发斑、丹毒、痈肿疮毒,为双贝糖浆中的君药。双贝糖浆是由板蓝根等9味中药组成的复方制剂,临床应用历史悠久,疗效确切,但是其药效物质基础与有效成分的研究甚少。为了研究双贝糖浆的抗炎物质基础,本文基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析方法识别鉴定并比较板蓝根提取物与双贝糖浆化学成分与体内入血成分。通过网络药理学方法研究君药板蓝根的抗炎活性成分、核心靶点及作用机制,通过MTT法检测11个主要入血成分的细胞毒性,在细胞无毒性的安全剂量范围内,Griess法检测11个入血成分对LPS诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞释放炎症介质一氧化氮(NO)的抑制作用,评价其抗炎活性。根据MTT法与Griess法的研究结果,筛选出NO活性理想的活性成分,进一步通过ELISA实验检测5个活性成分、板蓝根提取物与双贝糖浆对炎症因子TNF-α与IL-6的抑制作用,探讨板蓝根与双贝糖浆发挥抗炎作用的主要成分。对提升双贝糖浆的质量控制标准、完善其药效机制研究及指导其进一步的临床应用具有一定的意义。通过UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法在正、负离子模式下,分别检测并分析板蓝根提取物和双贝糖浆中的化学成分,板蓝根水提取物中共鉴定出71个化学成分,双贝糖浆中共鉴定出66个化学成分。通过比较发现苹果酸、9(S),10(S),11(R)-三羟基-12(Z),15(Z)-十八碳二烯酸、香草酸己碳糖、5-羟甲基糠酸、靛玉红在板蓝根提取物中可以鉴定出来,但是并未在双贝糖浆中发现。通过大鼠灌胃给予板蓝根提取物和双贝糖浆,眼眶静脉丛取血,基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的方法分析其体内入血成分。4’-羟基-7-甲氧基异黄酮、5-羟甲基糠酸、苹果酸、次黄嘌呤、2,5-二羟基吲哚、4-甲氧基-2,3-吲哚二酮、3-(2’-羧基苯基)-4(3H)喹唑酮仅在板蓝根提取物组中入血,靛红、3-吲哚乙酰胺、邻氨基苯甲酸-7-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、丁香酸仅在双贝糖浆组血清样品中可以检测到,38个共同的入血成分可能是入血发挥药效的主要成分。网络药理学结果显示,板蓝根中发挥抗炎作用的活性成分主要包含芸苔葡糖硫苷、半齿泽兰素、异牡荆素、羟基靛玉红等35个活性成分,33个板蓝根潜在抗炎靶点,主要为PTGS2,TNF,NOS2,MAPK14等,达到抗炎作用所涉及的通路主要有癌症信号通路、雌激素信号通路、甲状腺激素信号通路和神经活性配体受体相互作用等,符合中药多成分、多靶点、多通路的作用特点。通过体外抗炎实验,验证5-羟甲基糠醛、异牡荆素、半齿泽兰素、胞苷与色胺酮点击此处5个化学成分、板蓝根提取物与双贝糖浆对LPS诱导RAW 264.7细胞释放NO具有较强的抑制作用,异牡荆素、半齿泽兰素、色胺酮对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞释放TNF-α与IL-6的抑制作用较好,板蓝根提取物Puerpal infection与双贝糖浆能明显地抑制TNF-α、IL-6的释放,并呈良好的剂量依赖性。综上所述,通过网络药理学方法筛选得到的君药板蓝根抗炎成分异牡荆素与半齿泽兰素,可以在板蓝根提取物与双贝糖浆给药组大鼠血清样品中检测出,有较好的抗炎活性。异牡荆素、半齿泽兰素为板蓝根与双贝糖浆的关键抗炎活性成分。