目的:探讨白屈菜红碱对烟曲霉菌的抗菌活性,以及在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用及相关机制。方法:1.采用CCK-8实验和Draize眼表毒性实验分别检测不同浓度的白屈菜红碱对永生化人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠角膜的毒性作用。2.采用最低抑菌浓度试验、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、碘化丙啶摄取试验、Calcofluor white染色和结晶紫染色评估白屈菜红碱的体外抗真菌作用。3.建立C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,并于感染后1-5天给予实验组小鼠2μg/mL的白屈菜红碱溶液点眼处理,对照组小鼠0.1%DMSO溶液或8μg/mL那他霉素溶液点眼处理,通过裂隙灯拍照和临床评分评估白屈菜红碱对烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型的治疗作用;采用平板菌落计数法检测小鼠角膜中的真菌负荷量;采用苏木精-伊红染色检测小鼠角膜中炎症细胞浸润情况。4NSC 125973体外.通过对小鼠角膜进行免疫荧光染色观察白屈菜红碱对中性粒细胞募集、浸润的影响,采用髓过氧EPZ-6438生产商化物酶(MPO)实验检测中性粒细胞的活性。5.在动物及细胞烟曲霉菌炎症模型中,通过RT-PCR检测促炎细胞因子IL-1β和IL-6以及通路因子Nrf2、HO-1及LOX-1的m RNA表达;通过ELISA检测IL-1β和IL-6的蛋白表达;采用Western Blot检测LOX-1的蛋白表达以及p38 MAPK磷酸化情况。6.使用LOX-1质粒和空白质粒对HCECs进行转染,通过Western Blot检测LOX-1的蛋白表达和p38 MAPK的磷酸化,采用ELISA检测下游炎症因子IL-1β和IL-6的蛋白表达,评估白屈菜红碱对LOX-1/p38 MAPK信号通路的作用。结果:1.2μg/mL浓度范围内的白屈菜红碱不影响HCECs的细胞活性且对小鼠角膜无毒性作用。2.在体外试验中,白屈菜红碱抑制烟曲霉分生孢子的生长,减少真菌菌丝的存活,破坏真菌的形态结构,并抑制真菌生物膜的形成。3.在烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型中,2μg/mL白屈菜红碱显著改善了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减少角膜真菌负荷,并且抑制炎症细胞浸润。4.免疫荧光结果提示白屈菜红碱可减轻烟曲霉菌性角膜炎中粒细胞募集、浸润;MPO结果显示白屈菜红碱可降低中性粒细胞活性。5.在体内、外炎症反应实Bioinformatic analyse验中,RT-PCR结果提示2μg/mL白屈菜红碱降低IL-1β、IL-6以及LOX-1的m RNA表达,同时升高Nrf2和HO-1的m RNA表达;ELISA结果表明2μg/mL白屈菜红碱可以抑制IL-1β,L-6的蛋白表达;Western Blot结果显示2μg/mL白屈菜红碱升高Nrf2和HO-1的蛋白表达,降低LOX-1的蛋白表达,抑制p38 MAPK磷酸化。6.LOX-1过表达质粒处理显著升高LOX-1蛋白表达水平、p-p38/p38 MAPK的比率以及IL-1β、IL-6的蛋白表达水平。2μg/mL白屈菜红碱预处理下调质粒刺激引起的LOX-1蛋白质表达,p38 MAPK的磷酸化和下游炎症因子IL-1β、IL-6的表达。结论:在烟曲霉菌性角膜炎中,2μg/mL白屈菜红碱对HCECs和小鼠角膜无明显毒性作用,且可以充分发挥抗菌和抗炎作用。白屈菜红碱通过抑制烟曲霉分生孢子的生长、破坏真菌菌丝的形态结构、减少真菌菌丝的存活、阻止真菌生物膜的形成等发挥抗菌作用;减少中性粒细胞的募集和浸润、下调促炎细胞因子的表达、上调Nrf2和HO-1的表达以及抑制LOX-1/p38 MAPK的信号通路发挥抗炎作用。