非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌最常见的亚型,约占肺癌总发生率的80-85%。具有并发症多、易复发和转移等特点,患者5年生存率仅为26.4%。化疗是目前治疗NSCLC的主要方式,紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是从太平洋紫衫的树皮及针叶中提取的一种三环二萜类化合物,是目前NSCLC临床的一线化疗药物。但其具有疏水性,常规注射剂通常缺乏组织和器官特异性,快速在体内清除、副作用大。研发出高效的药物递送系统是解决这一问题的有效策略。近些年来,细胞介导的药物递送系统受到诸多国内外研究者的青睐,这种新的药物递送方式利用了内源性细胞载体在体内循环时间久、形态可塑性大、受体丰富、可通过生物屏障、无免疫原性等优点,能够高效、快速的将药物传递到靶向部位,最大限度的提高治疗效果。中性粒细胞(Neutrophils,NEs)是循环系统中最丰富的白细胞。NEs能够在细胞因子的作用下通过血管和间质组织迅速的到达炎症部位,释放细胞因子,吞噬病原体,修复损伤。炎症是心血管疾病、自身免疫性疾病和癌症等的主要病理特征。基于上述背景,本文设计了一种NEs介导的紫杉醇脂质体药物递送系统(NE-LP-PTX)。首先制备脂质体(LP)对PTX进行封装,LP不仅可以解决PTX疏水性的问题,还可以避免游离PTX对NEs产生毒性。而后,提取NEs对紫杉醇脂质体(LP-PTX)进行包载后再回输,利用肿瘤部位的炎症环境,使得NEs迅速通过血管和组织间质迁移到肿瘤部位,释放出药物。对LP-PTX和NE-LP-PTX的制备方法进行了一系列的优化,并进行了体内外的药效学考察,具体内容如下:1.PTX体外分析方法学建立通过高效液相色谱建立PTX的体外分析方法。紫外可见分光光度计检测得到PTX在227 nm处有最大吸收峰,符合药典记载,PTX标准曲线R~2为0.9993,PTX浓度在15.63-500.00μg/m L范围内的线性回归方程为:y=33832x-214799。验证建立的PTX体外分析方法学,结果显示该方法专属性良好,精密度、回收率和稳定性检测的RSD值均小于3.00%,实验结果符合标准,可以用于后续的PTX含量检测分析。2.LP-PTX的制备及表征通过薄膜分散法制备LP-PTX,对其进行理化性质的表征,粒径163.6 nm左右,PDI为0.168,电位为-2.47 m V,包封率为92.10%,载药量为3.55%。扫描电镜显示脂质体成规整的球形囊状结构,空白脂质体的粒径小于载药脂质体。稳定性结果显示,72 h内脂质体的粒径和PDI并无明显变化。3.NE-LP-PTX的构建本研究选择小鼠骨髓腔内的中性粒细胞负载LP-PTX,骨髓提取得到的细胞数量可以达到7.24×10~6 cell/mouse,纯度和形态符合后期实验要求。选择细胞电穿孔法使NEs负载LWave bioreactorP-PTX,并对NEs电穿孔包载LP-PTX的条件进行优化,NEs-LP-PTX制备的最终电穿孔条件为:220 V,脉冲时间5 ms,10个脉冲循环,LP-PTX的浓度为120μg/m L。4.LP-PTX的体外评价选用A549细胞作为细胞模型,进行了细胞毒性、细胞摄取和细胞内活性氧(ROS)水平的分析。细胞毒性结果显示,在1-24μg/m L的浓度范围内,LP-PTX相较于游离药物对A549细胞的杀伤更为明显,且对A549细胞的增殖抑制效果成剂量依赖性。细胞摄取结果显示,A549细胞对LP-PTX摄取效率与时间呈正相关。ROS水平检测结果显示,PTX组只有少量的活性氧累积,LP-PTErdafitinib作用X组细胞内活性氧的累积是PTX组的4.77倍。5.NE-LP-PTX的体内评价选用A549细胞建立裸鼠异位荷瘤模型,治疗结束后与Control组相比,NE-LP-PTX能显著抑制肿瘤的增长,与Control组相比NE-LP-PTX组抑SAHA制了89.0%的肿瘤体积增长,与LP-PTX相比,NE-LP-PTX组抑制了53.66%的肿瘤体积增长,与PTX组相比,NE-LP-PTX组抑制了68.82%的肿瘤体积增长。肿瘤组织病理学结果显示,Control组肿瘤织坏死区域较少,LP-PTX和NE-LP-PTX组肿瘤组织范围内坏死较多。TUNEL肿瘤细胞凋亡检测结果显示,Control组肿瘤细胞生长旺盛,NE-LP-PTX组凋亡细胞最多,LP-PTX次之,PTX相对较弱。对主要脏器进行H&E染色分析和体重监测,NE-LP-PTX具有良好的生物安全性。综上所述,本研究制备的LP-PTX具有良好的包封率、粒径、分散性和稳定性。体外实验显示LP-PTX具有良好的抑制A549细胞增殖活性和细胞摄取效率,促进A549细胞内ROS累积。采用细胞电穿孔的方式成功制备NE-LP-PTX,处理后的NEs仍保持良好的细胞活性和细胞迁移能力,体外实验证实了NE-LP-PTX具有良好的抑瘤效果和生物安全性。