背景RAD001半抑制浓度:膀胱癌是人类最常见的泌尿系统肿瘤之一。膀胱癌早期临床症状不典型,部分膀胱癌患者发现时已是晚期,然而晚期膀胱癌的治疗药物有限,所以开serum immunoglobulin发高效、低毒的新药物对膀胱癌患者意义重大。毛兰素是从中药鼓槌石斛中提取的一种天然化合物,对多种癌症具有明显的抗肿瘤作用。我们前期研究发现毛兰素能诱导肺癌细胞发生铁死亡,但是毛兰素、铁死亡与膀胱癌三者的关系尚未有文献报道。方法:CCK-8试剂盒检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡,PI试剂盒检测细胞周期,DCFH-DA染色检测活性氧水平,Western Blot检测细胞蛋白水平,分子对接预测药物作用靶点,sh RNA转染敲低靶基因,实时荧光定量PCR检测RNA水平,免疫组化检测组织蛋白水平等一系列实验方法研究了毛兰素对膀胱癌细胞的药理机制。结果:(1)通过CCK-8和流式凋亡实验,发现毛兰素能诱导膀胱癌细胞(KU-19-19和RT-4)死亡;(2)通过多种抑制剂和毛兰素联合作用,CCK-8结果显示只有铁离子螯合剂可拮抗毛兰素对膀胱癌细胞的药效,降低对细胞的杀伤作用,而其他抑制剂对毛兰素的拮抗作用无显著统计学意义;(3)毛兰素可使膀胱癌细胞内活性氧活化,丙二醛积累,谷胱甘肽消耗,并且活性氧抑制剂N-乙酰半胱胺酸(NAC)能明显逆转毛兰素的药GNE-140效,而且蛋白质印迹法显示:毛兰素能抑制铁死亡相关蛋白Nrf2、GPX4等的表达,说明毛兰素可能通过铁死亡途径诱导膀胱癌细胞死亡;(4)皮下荷瘤裸鼠实验证实,毛兰素可通过铁死亡途径诱导膀胱癌细胞死亡;(5)分子对接结果显示毛兰素与Nrf2有较好的结合,为了进一步证实分子对接的结果,首先使用Nrf2的激活剂TBHQ与毛兰素联用,通过CCK-8和蛋白质印迹法实验发现TBHQ能拮抗毛兰素对膀胱癌细胞的作用,并逆转毛兰素诱导膀胱癌细胞发生铁死亡;(6)通过对膀胱癌细胞进行敲低和过表达Nrf2,发现敲低Nrf2后可以促进毛兰素对铁死亡相关指标和相关蛋白水平的变化,而过表达Nrf2可以逆转毛兰素铁死亡相关蛋白水平的变化,证实了Nrf2可能是毛兰素诱导膀胱癌细胞发生铁死亡的重要靶点;(7)为了进一步的研究毛兰素诱导膀胱癌细胞发生铁死亡的机制,我们通过RT-PCR和蛋白质印迹法实验发现毛兰素可能通过Nrf2/HO-1信号通路发挥铁死亡作用。结论:毛兰素可通过铁死亡途径诱导膀胱癌细胞死亡;Nrf2可能是毛兰素诱导膀胱癌细胞铁死亡的关键靶点;毛兰素可能通过调控Nrf2/HO-1信号通路从而诱导膀胱癌细胞发生铁死亡。