目的 建立三重微滴数字PBiomedical ResearchCR(ddPCR)方法同时定量检测即食食品中的沙门菌、蜡样芽胞杆菌和单核细胞增生李斯特菌。方法 选择以沙门菌ttrA/ttrC、蜡样芽胞杆菌essC、单核细胞增生李斯特菌侵袭相关内肽酶基因等3个单拷贝基因对应的3对引物探针，采用实时荧光定量PCR验证引物/探针特异性后，建立三重ddPCR方法同时定量检测3种致病菌的拷贝数。结果 该方法的线性范围分别为：沙门菌25～22 IACS-010759体内687 copies/20μL；蜡样芽胞杆菌19～15 620 copies/20μL；单核细胞增生李斯特菌18～23 373 copies/20μL，线性相关因子r2≥0.999,6个浓度3次重复测定3种菌的相对标准偏差（RSD）≤12%，重复性好，对于上述菌株的最低检出限分别为6、3和7 copies/20μL；采用已建立的ddPCR方法和平板计数方法对模拟染菌米粉样品进行检测，两种方法测定值结果 RSD小于9%，结果一致性较好。结论 本研究建立的三重ddPCR同时定量检测即食食RAD001试剂品中沙门菌、蜡样芽胞杆菌和单核细胞增生李斯特菌的方法与平板计数法相比，更快速、灵敏，结果准确。