目的:本研究拟明确植物乳杆菌LP45抗氧化以及干预巨噬细胞产生的细胞因子与成骨/破骨细胞分化和凋亡的关系,并解析LP45拮抗糖皮质激素诱导的破骨细胞、成骨细胞功能改变以及氧化应激反应的机制,从而在分子水平阐明植物乳杆菌LP45干预骨质疏松的相关机理,为骨质疏松症的早期预防提供新的科学依据及新方式。方法:1.以巨噬细胞RAW264.7为实验对象,将其分为LPS组、LP45组、LPS+LP45组、空白对照组,采用氧化应激探针染色检测细胞内氧化应激指标水平,采用蛋白免疫印迹法检测NOX4、P22、P47氧化应激相关蛋白表达水平以及IL-1β、NLRP3、IRF3、INF-β炎性因子相关蛋白表达水平,采用ELISA法检测MDA和SOD的浓度。2.使用Traswell小室完成巨噬细胞—成骨细胞培养体系及巨噬细胞—破骨细胞培养体系的建立,将其分为LPS组、LP45组、LPS+LP45组、空白对照组,采用免疫荧光染色检测RANKL表达,采用蛋白免疫印迹法检测OPG、RANKL、RUNX3、β-catenin成骨细胞相关蛋白表达量以及N F-κB、CREB、AP-1破骨细胞蛋白表达水平,采用CCK-8法检测成骨细胞增殖能力。结果:1.各组RAW264.7巨噬细胞氧化应激水平结果显示:荧光显微镜观察发现,与空白对照组相比,LPS组ROS水平明显降低(P<0.01);与LP45组相比,LPS组、LPS+LP45组ROS水平明显升高(P<0.01);与LPS组相比,LPS+LP45组ROS的产生明显降低(P<0.01);ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,LP45组MDA水平下降,SOD水平明显升高(P<0.01);与LP45组相比,LPS组、LPS+LP45组MDA水平明显升高,SOD水平明显降低(P<0.Aeromonas veronii biovar Sobria01);与LPS组相比,LPS+LP45组MDA水平明显降低,SOD水平明显升高(P<0.01)。2.各组RAW264.7巨噬细胞氧化应激相关蛋白表达结果显示:与空白对照组相比,LP45组NOX4、P47表达量降低(P<0.01),LP45组P47表达量显著降低(P<0.01);与LP45组相比,LPS组、LPS+LP45组N OX4、P22、P47的表达量均显著增加(P<0.01);与LPS组相比,LPS+LP45组NOX4、P22、P47的表达量均显著降低(P<0.01);与LP45组相比,LPS+LP45组NOX4、P22、P47的表达量仍然较高(P<0.01)。3.各组巨噬细胞SHP2结果显示:与LP45组点击此处相比,LPS组、LP45+LPS组SHP2表达水平显著下降(P<0.01);与LPS组相比,LP45+LP S组SHP2表达水平显著上升(P<0.01);各组炎性因子相关蛋白表达水平结果显示:与LP45组相比,LPS组、LP45+LPS组IL-1β、NLRP3、I RF3、INF-β表达水平显著上升(P<0.01);与LPS组相比,LP45+LPS组L-1β、NLRP3、IRF3、INF-β表达受到抑制,表达水平显著下降(P<0.01)。4.各组成骨细胞活性及RANKL免疫荧光染色结果显示:CCK检测法检测成骨细胞活性发现,培养48h后空白对照组、LPS组与LP45组之间细胞活性有显著差异(P<0.01);采用免疫荧光实验观察RANKL的表达结果显示,与空白对照组相比,LP45组成骨细胞RANKL表达量明显降低(P<0.01);与LP45组相比,LPS组、LPS+LP45组其表达量明显升高(P<0.01);与LPS组相比,LPS+LP45组表达量明显降低(P<0.01)。5.各组成骨细胞相关蛋白表达水平结果显示:与LP45组相比,LP S组、LP45+LPS组的RANKL表达水平明显上升(P<0.01);与LPS组相比,LP45+LPS组Etoposide配制的RANKL表达水平明显下降(P<0.01);与空白对照组相比,LP45组OPG、RANKL、RUNX3表达水平明显升高(P<0.01);与LP45组相比,LPS组、LP45+LPS组的OPG、RANKL、RUNX3表达水平明显下降(P<0.01);与LPS组相比,LP45+LPS组的OPG、RANK L表达水平明显下降(P<0.01)。6.各组破骨细胞相关蛋白的表达水平结果显示:与空白对照组相比,LP45组NF-κB、CREB、AP-1表达水平显著降低(P<0.01);与LP45组相比,加入LPS后,LPS组、LP45+LPS组的NF-κB、CREB、AP-1表达水平明显上升(P<0.01);与LPS组相比,LP45+LPS组的NF-κB、C REB表达水平明显下降(P<0.01),AP-1表达水平下降(P<0.05)。结论:LPS通过介导产生氧化应激,降解SHP2和相关激酶活化破坏成骨细胞分化、促进破骨细胞生成。LP45可以通过抑制氧化应激的产生及炎症因子的产生,发挥抗氧化及抗炎作用,以激活SHP2信号通路,促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞生成从而维持骨稳态、改善骨代谢。