背Smoothened Agonist景和目的:糖尿病肾病(DN)是糖尿病最严重的微血管并发症之一,其主要病理特征为肾小球肥大、基底膜增厚和肾脏纤维化,这些变化共同导致了肾功能障碍,最终发展为终末期肾衰竭。糖尿病肾病的发病机制和原因尚未完全被阐明,目前缺乏有效的治疗药物。近年来,由高血糖引起的慢性炎症反应备受关注,已证明慢性炎症会导致肾小球内皮细胞损伤以及粘附分子和趋化因子的上调,导致巨噬细胞浸润到肾组织中。因此,靶向抗炎治疗有望成为防治糖尿病肾病的有效手段。已有研究证实,天然化合物香紫苏醇具有抗炎、抗肿瘤、抗微生物感染、利胆等多种生物活性。香紫苏醇预防性给药通过抑制炎症相关的NF-κB、MAPK和HO-1信号通路缓解了脂多糖诱导的急性肺损伤。因此,本研究基于高糖刺激SV40 MES-13细胞构建体外的高血糖诱导肾损伤模型和STZ诱导的1型糖尿病小鼠模型,拟对香紫苏醇在糖尿病肾病中潜在的治疗效果和分子机制进行探究。方法:(1)基于高糖诱导的SV40 MES-13细胞炎性损伤的体外模型。首先利用CCK-8实验确Purification定天然化合物香紫苏醇的最佳体外给药浓度;采用RT-q PCR检测细胞纤维化因子(Tgf-β、Col-4)、炎症因子(Tnf-α、Il-6、Il-1β)和黏附因子(Mcp-1、Icam-1、Vcam-1)的m RNA表达水平;采用Western blot检测MAPK通路中ERK、JNK、p38的磷酸化水平和NF-κB通路中IκBα、p65的蛋白水平;采用免疫ICI 46474荧光检测p65在细胞质和细胞核中的定位情况。探讨香紫苏醇对高糖诱导的SV40 MES-13细胞炎性损伤和纤维化的改善作用。(2)基于STZ诱导的1型糖尿病小鼠模型,造模第9周给予香紫苏醇(5 mg/kg和10mg/kg)治疗,第14周收集血清、尿液及肾组织样本。每周监测小鼠体重和血糖变化;检测各组小鼠尿白蛋白与肌酐比值和血清BUN等生化指标;采用HE、Masson、天狼星红、PAS染色和炎症指标的免疫组化染色评价肾脏病理学改变及炎症因子浸润情况;采用RT-q PCR检测肾组织中纤维化因子、炎症因子和黏附因子的m RNA表达水平;采用Western blot检测肾组织MAPKs和NF-κB通路中相关蛋白水平。探讨香紫苏醇对糖尿病肾病的保护作用。(3)使用MAPK的混合抑制剂(JNK抑制剂SP600125、p38 MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂U0126)处理SV40 MES-13细胞,Western blot检测NF-κB通路中相关蛋白水平;采用RT-q PCR检测细胞中炎症因子的m RNA表达水平。进一步探讨香紫苏醇保护糖尿病肾病的分子作用机制。结果:(1)天然化合物香紫苏醇改善体外高糖诱导的SV40 MES-13细胞的炎症和纤维化,能抑制MAPKs通路的磷酸化和NF-κB通路中IκBα的降解以及p65的核易位。(2)香紫苏醇能缓解糖尿病小鼠的肾功能障碍,改善肾脏肥大、纤维化、肾小球基底膜增厚,降低肾脏炎症反应,对糖尿病肾病有良好的保护作用。(3)体外研究进一步证实香紫苏醇通过抑制MAPKs介导的NF-κB信号通路改善高血糖诱导的炎性反应进而对肾脏起到保护作用。结论:在SV40 MES-13细胞和1型糖尿病小鼠中,香紫苏醇能够缓解高糖和高血糖引起的肾损伤。香紫苏醇具有广泛的抗炎作用,可以抑制细胞因子的生成,抑制F4/80阳性巨噬细胞向肾组织的浸润。机制研究证实香紫苏醇在糖尿病肾病中的肾脏保护作用是部分通过抑制MAPKs介导的NF-κB通路的活化实现的。香紫苏醇有望成为治疗糖尿病肾病的候选药物,研究抗炎靶点或许为糖尿病肾病的治愈带来曙光。