纳米抗体作为一种新型抗体,具有更高的溶解性和抗原结合能力,更适用于基因操作手段以及更低的人工制造成本,因而被广泛用于科学研究和临床应用。越来越多的疾病被发现与蛋白质翻译后的修饰异常激活/失活有关,这导致了修饰抗体的开发研究。磷酸化抗体是其中一种,因为许多重要蛋白质的磷酸化状态对其活性health care associated infections和功能有很大影响。本研究探讨了通过全合成纳米抗体文库进行磷酸化抗体筛选的方法开发。磷酸化是一种常见的蛋白质修饰方式,它通过在蛋白质中加入磷酸基团来改变蛋白质的结构和功能。而多点磷酸化在蛋白质中的多个位点加入磷酸基团,从而www.selleck.cn/products/Rapamycin使蛋白质发生更加复杂的结构改变,甚至可以影响整个蛋白质复合物的稳定性和功能。因此,单点或多点磷酸化抗体的开发可能意味着不同的难度,以及对方法的不同要求,值得系统性的探究,从而为方法开发提供依据。此前,我们的研究发现精神压力可以激活RBM24 S181位点的磷酸化,而RBM38 S117/T132两点磷酸化能够被缺氧诱导。Tau蛋白的proline-rich domain在脯氨酸定向蛋白激酶(如GSK3β)的作用下在Ser Pro/Thr Pro基序中发生多个位点的磷酸化修饰。Tau蛋白异常磷酸化的发生与多种神经退行性疾病密切相关。本研究以磷酸化抗体开发为目标,构建了一种全合成的纳米抗体展示文库,并通过噬菌体表面展示技术,及噬菌体和酵母表面展示联合筛选方式,筛选针对RBM24 S181位点、RBM38 S117/T132位点以及TTelaglenastatAU T117/T231/S235位点磷酸化的特异性纳米抗体。我们通过噬菌体表面展示技术筛选到了靶向RBM24 S181单点磷酸化的纳米抗体;通过噬菌体和酵母表面展示联合筛选技术成功筛选到了靶向RBM38 S117/T132位点磷酸化的纳米抗体,但未筛选到靶向TAU T117/T231/S235位点磷酸化的纳米抗体。因此,通过本研究我们证明全合成的纳米抗体展示文库可以用于磷酸化纳米抗体的开发,这些纳米抗体的发现将有助于深入研究这些蛋白质的磷酸化修饰及其在疾病中的作用机制。