目的：优化溶栓酶(AprE9912D)冻干粉制备工艺，探讨其抗血栓机制。方法：分离纯化后的AprE9912D与不同比例赋形剂进行真空冷冻干燥。通过样品酶活力、外观、复溶时间筛选最优冻干粉处方，加速稳定性实验筛选最佳冻干粉储存温度。体外检测AprE9912D在标准纤维蛋白平板和加热纤维蛋白平板的酶活力，分子对接预测AprE9912D与抗血栓靶蛋白相互作用，以及体外AprE9912D降解纤维蛋白、纤维蛋白原和明胶的作用。结果：AprE9912D冻干粉的最佳复方处方为1%甘氨酸和3%蔗糖，外观为白色疏松饼状；-20℃保存150 d,外观合格率为92.9%,酶活力损失率为8.4%,复溶时间为3.0 s;最佳保存温度≤-20℃。分子对接发现AprE9912D对抗血栓靶蛋白的亲和性由大到小依次为纤维蛋白原>纤non-medullary thyroid cancer维蛋白>纤溶酶原。体外纤维蛋白平板和降解实验验证AprE9912D具有直接纤溶活性和间接纤溶酶原激活作用，对纤维蛋白具有更高亲和性，抗血栓机制还可能与抗胶原诱导的血小板聚集有关。结论：冻干粉AprE9912D的GW4869处方和制备工艺可行，体外初步解析抗血栓的作用机制，为进一步开发成为抗血栓药selleckchem物奠定基础。