【目的】克隆花?抗缪勒氏管激素基因,分析其序列特征及亚细胞定位LGK-974抑制剂,检测不同浓度雌激素处理下的表达变化规律,为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供参考。【方法】根据花?转录组测序获得的unigenes序列,克隆Amh基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-AMH,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白亚细胞定位情况。同时,利用荧Biophilia hypothesis光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花?Amh基因cDNA序列全长为1849 bp,开放阅读框为1671 bp,编码556个氨基酸。系统进化分析表明花?Amh与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类亲缘关系最近,聚为一支。构建重组表达质粒pET32a-AMH,并制备AMH多克隆抗体。通过酶联免疫方VP-16 IC50法(ELISA)检测抗体效价为2.4×10~(6)以上,Western blotting检测显示抗体具有特异性。免疫荧光结果显示AMH蛋白在花?卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花?60 d,组织学结果显示低浓度雌二醇(100 μg/g)促进花?卵母细胞生长,卵巢内皮质液泡数量增多。荧光定量结果显示,经雌二醇处理,卵巢中Amh基因的表达量降低,说明Amh响应性类固醇激素的调节。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域,在卵巢颗粒细胞表达,且响应雌激素的调控,可能在花?卵巢发育中发挥调控作用。