为为探究布鲁氏菌候选保selleckchem LBH589护性抗原L7/L12免疫原性及其对小鼠保护效果的评价，本研究以羊种布鲁氏菌16M为模板，构建重组质粒p ET-22b-L7/L12，转化至E. coli BL21(DE3)中，经诱导表达纯化后SDS-PAGE与western blot检测显示获得了16 Falsified medicineku的重组蛋白rL7Erdafitinib采购/L12，且纯化效果较好。将rL7/L12以100μg/只腹腔注射免疫6周龄SPF级BALB/c小鼠，14 d后以50μg/只的rL7/L12加强免疫，试验同时设相应体积的1×PBS免疫小鼠为对照组。首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d分别对两组所有小鼠经尾静脉采血，分离血清。通过间接ELISA方法检测两组小鼠血清中IgG抗体水平，其亚型（IgG1、IgG2a）抗体水平及比值，结果显示，rL7/L12免疫后IgG抗体水平均极显著高于免疫PBS对照组（P<0.01）；免疫小鼠14 d时，rL7/L12组的IgG1抗体水平极显著高于IgG2a抗体水平（P<0.01）,IgG1/IgG2a比值大于1；小鼠免疫42 d后，rL7/L12组的IgG2a抗体分泌水平极显著高于IgG1(P<0.01),IgG2a/IgG1比值大于1。通过ELISA方法检测细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的表达量，结果显示，首免21 d和35 d后，蛋白免疫组IL-2和TNF-α含量极显著高于PBS对照组（P<0.01），首免35 d后，蛋白免疫组抑炎因子IL-10表达量极显著低于PBS对照组（P<0.01）。在首免后21 d和35 d，每组分别颈部脱臼剖杀3只小鼠，无菌取其脾脏，分离小鼠脾淋巴细胞，利用ELISpot斑点法检测首免后21 d和35 d小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达量，结果显示，首免21 d,r L7/L12组极显著低于阳性刺激组（ConA组）的IFN-γ分泌水平（P<0.01），首免35 d,rL7/L12组极显著高于阴性刺激组的IFN-γ分泌水平（P<0.01）。首免后42 d通过腹腔注射途径以100μL（含1×105cfu）/只的羊种布鲁氏菌新疆流行株043攻毒小鼠，攻毒后5 d观察两组小鼠的死亡情况，15 d后，颈部脱臼剖杀全部小鼠，称量体重，无菌取其脾脏并称重，通过检测脾指数及脾脏载菌量来评价L7/L12重组蛋白对小鼠的保护效果，结果显示，攻毒后5 d观察到PBS对照组小鼠精神沉郁，两组小鼠均无死亡情况；rL7/L12组的脾指数和脾脏载菌量均显著低于PBS对照组（P<0.05）。本研究上述结果首次表明，rL7/L12免疫小鼠后会引起机体的体液免疫和细胞免疫，细胞免疫在此过程中占据主要地位，r L7/L12对布鲁氏菌的预防也起到积极作用，该研究结果为布鲁氏菌L7/L12亚单位的疫苗研发奠定了基础。