毛蕊异黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡机制的初步探讨

目的:毛蕊异黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及诱导凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法:1.基于课题组前期毛蕊异黄酮作用肺腺癌SPC-A1细胞实验研究,参考选择毛蕊异黄酮浓度梯度为(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于多发性骨髓瘤U266细胞,分别取12、24、36和48h时间点,采用CCK8法检测毛蕊异黄酮对各组细胞活力的影响,计算不同时间点IC20、IC40和IC60对应的毛蕊异黄酮浓度,筛选并验证所选择的后续实验的干预时间及浓度。2.采用FCM法检测毛蕊异黄酮对各组细胞周期阻滞情况。3.采用TUNEL法检测毛蕊异黄酮各组细胞凋亡影响。4.采用WB检测毛蕊异黄酮干对各组细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、NF-κB p65和p-IκBα的表达影响。5.采用RT-qPCR检测细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1 m RNA的表达情况。结果:1.毛蕊异黄酮浓度梯度(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于U266细胞不同时间点(12、24、36和48h)后,对CCK8法所测OD值分析:随着毛蕊异黄酮浓度梯度不断增加对U266细胞的抑制率逐渐增加,同一浓度随着培养时间的延长对U266细胞的抑制率也逐渐增加,毛蕊异黄酮对U266细胞的抑制作用呈明显浓度-时间依赖性。根据公式分别计算出不同时间毛蕊异黄酮作用U266细胞的IC20、IC40和IC60值,并对IC20、IC40和IC60所对应浓度验证后选取浓度48h及48h时所对应IC20、IC40和IC60的毛蕊异黄酮的浓度(13.88μM、34.2μM和91.78μM)为后续实验的作用条件。2.通过FCM法探究不同浓度毛蕊异黄酮作用于U266细胞后对细胞周期的影响,结果显示毛蕊异黄酮可以使U266细胞得细胞周期停medical worker滞在G0/G1期,并具有浓度依Apoptosis抑制剂赖性。3.TUNEL染色在镜下观察细胞的凋亡情况,随着毛蕊异黄酮浓度逐渐增加,U266细胞的凋亡数量逐渐增加,具有明显的浓度依赖性。4.WB结果显示各实验组药物处理后蛋白NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1的表达量均下调,Bax蛋白的表达水平上调,与对照组比较,均有显著差异(P<0.05),其中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1在毛蕊异黄酮浓度为13.88μM、34.2μM组时蛋白的表达水平有明显的差异性(P<0.05),34.2μM、91.78μM浓度处理的细胞中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1蛋白的表达水平变化不明显(P>0.05),但是Bax蛋白上调水平与毛蕊异黄酮浓度有明显的依赖性(P<0.05)。5.RT-qPCR结果显示不同作用浓度的毛蕊异黄酮处理后细胞中Cyclin D1、CDK4m RNA的表达水平均下调,与对照组比较均有明显差异(P<0.05),13.88μPS-341配制M与34.2μM浓度处理的细胞差异性明显(P<0.05),34.2μM与91.78μM浓度处理的细胞中Cyclin D1和CDK4 m RNA的表达无明显差异性(P>0.05)。结论:CA有抑制U266细胞增殖及促进其凋亡的作用,机制可能与抑Cyclin D1、CDK4、p-IκBα、NF-κB p65和Bcl-2蛋白的表达及促进Bax蛋白的表达相关。

鹿血多肽的制备、体内外免疫调节活性及其机制研究

目的:鹿血多肽(DBP)是以鹿血为原料,经过蛋白酶水解提取的多肽成分,中医临床预防及治疗方面得到了广泛的开发与利用。同时,多种疾病的发生发展与患者自身免疫力低下相关,调节自身免疫力对多种疾病的辅助治疗都是行之有效的途径。目前,对于鹿血多肽的免疫调节活性相关的深入研究较少。因此,本研究的目的是筛选免疫调节活性高的鹿血多肽的制备方法,并用RAW 264.7细胞以及环磷酰胺(CTX)致免疫抑制小鼠模型对其进行验证,从而揭示鹿血多肽在免疫调节方面的作用机制。方法:酶解法制备鹿血多肽,得到胃蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解的鹿血多肽(PTDBP)、胃蛋白酶提取的鹿血多肽(PDBP)和胰蛋白酶提取的鹿血多肽(TDBP)。用比色法测定含量,Tricine-SDS-PAGE法测定分子量区间。通过细胞活力,吞噬活性和一氧化氮(NO)的分泌能力的检测,筛选并确定了具有免疫调节活性潜力的PTDBP。用体外抗氧化体系评价PTDBP、PDBP、TDBP的抗氧化能力。测定了PTDBP中氨基酸的组成及含量,评价PTDBP的营养价值。采用小鼠RAW 264.7巨噬细胞探究PTDBP的体外免疫调节作用,观察PTDBP对巨噬细胞的细胞活力,吞噬活性,NO的分泌能力,黏附能力,活性氧(ROS)分泌能力的影响。检测细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况,并检测RAW 264.7细胞的细胞周期。在基因水平上研究了PTDBP对i NOS、TNF-α和IL-6 m RNA的表达量的影响。基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,探讨PTDBP对RAW 264.7的免疫调节活性机制。建立CTX致免疫抑制小E7080体内鼠模型,以研究PTDBP的体内免疫调节活性。计算小鼠免疫器官指数,检测血象相关指标,测定免疫球蛋白和细胞因子的变化情况,并对小鼠免疫器官进行了HE染色。通过Western blot实验方法,探讨PTDBP是否激活MAPK信号通路以发挥体内免疫调节作用。通过正交试验,以腥味评定为指标,研究β-环糊精和酵母的最佳脱腥工艺。以稳定性系数为指标,筛选合适的稳定剂。以感官评定为指标,确定PTDBP口服液Cell Imagers的配方。最后,通过测定PTDBP口服液的理化指标,考察其稳定性。结果:成功制备了PTDBP、PDBP、TDBP,其中PTDBP的多肽含量最高。初步免疫调节活性研究表明,与PDBP和TDBP相比,PTDBP可以增强巨噬细胞的增殖作用,吞噬活性和NO分泌量,说明PTDBP具有最佳的免疫调节活性。PTDBP氨基酸分析结果表明,PTDBP中包含了18种氨基酸,其中含有7种必需氨基www.selleck.cn/products/wnt-c59-c59酸。PTDBP对DPPH·的IC_(50)值为4.061±0.288 mg/m L,对ABTS·的IC_(50)值为0.629±0.015mg/m L,对·OH的IC_(50)值为3.864±0.245 mg/m L,表明PTDBP有一定的自由基清除活性。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,PTDBP分子量小于7.8k Da。基于RAW 264.7巨噬细胞,研究了PTDBP的体外免疫调节活性。结果表明,PTDBP对细胞无明显毒性。125.0-500.0μg/m L PTDBP显著提高巨噬细胞的吞噬能力、黏附功能、NO、TNF-α、IL-6的分泌水平,还可以刺激巨噬细胞产生ROS。PTDBP通过作用于RAW 264.7细胞G0/G1期,达到促进细胞增殖的作用。PTDBP上调i NOS、TNF-α、IL-6m RNA表达水平,激活MAPK信号通路发挥免疫调节作用。建立CTX致小鼠免疫抑制模型,研究PTDBP的体内免疫调节活性。实验结果表明,经过PTDBP干预后,缓解了CTX造成的减重倾向,恢复了小鼠白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)等血细胞指标及骨髓有核细胞数(BMNC),并且促进了免疫抑制小鼠血清中免疫球蛋白Ig G和细胞因子TNF-α和IL-6的分泌。同时,PTDBP提高免疫抑制小鼠的免疫器官指数,保护脾脏和胸腺的生长以及改善病理学变化。Western blot实验结果显示,不同浓度的PTDBP可以上调CTX诱导的免疫抑制小鼠脾脏MAPK信号通路中p38、JNK、ERK蛋白磷酸化水平,表明PTDBP激活MAPK信号通路发挥免疫调节作用。制备PTDBP口服液,4.0%β-环糊精和1.5%酵母作为脱腥剂,黄原胶0.07%、果胶0.06%、CMC-Na 0.06%为稳定剂,配方为PTDBP 0.5%,蔗糖4.98%,柠檬酸0.05%。PTDBP口服液感官良好。结论:本研究采用两步酶解法制备了PTDBP,研究表明PTDBP通过激活MAPK通路,提高体内和体外的免疫调节活性,为PTDBP作为免疫调节肽的综合利用与开发开辟新思路。

胃镜活检与术后病理检查在胃癌诊断中的一致性、准确性研究

目的 探究胃镜活检与术后病理检查在胃癌诊断中的一致性、准确性。方法 回顾性分析2021年6月至2022年12月于我院行胃部分切除手术的87例胃癌患者临床资料,所有患者均在术前进行胃镜活检和术后病理检查。对比术前胃镜活检与术后病理检查诊断的一致性和准确率。结GDC-0973作用果 术前胃镜活检检出疑似胃癌、排除胃癌占比率高于术后病理检查,确诊胃癌占比率低于术后病理检查(P <0.05)。术前胃镜活检分化型检出率低于术后病理检查,分化不良型检出率高于术后病理检查(P <0.05)。术前胃镜活检与术后病理gastrointestinal infection检查对胃癌细胞浸润深度的诊断一致率为91.95%(80/87),Kappa一致性指数为0.826(P <0.05)。结论 术前胃镜活检与术后病理检查诊断结果不一致,但术前胃镜活检阳selleck HPLC性诊断敏感度较高,可在早期胃癌筛查和诊断预防中发挥重要作用。

含阿莫西林、呋喃唑酮的四联疗法联合微生态制剂对根治幽门螺杆菌感染疗效及对肠道微生态的影响分析

目的:幽门螺杆菌(Hp)是一种定植于人胃黏膜的革兰阴性杆菌,全球约50%的人口患有Hp,其是胃癌发生的主要危险因素。中国是Hp高发病区,其感染率为42%-64%,平均55%。质子泵抑制剂(PPI)、阿莫西林、克拉霉素或甲硝唑曾是根除Hp的标准三联方案,但随着长时间的用药,甲硝唑和克拉霉素耐药率逐渐提高,从而导致标准三联疗法根除率明显下降。因此,需要寻找新的药物来辅助或代替抗生素治疗Hp感染具有重要临床意义。研究显示,根除HP的抗菌治疗会打破肠道菌群稳态,导致肠道菌群紊乱引发感染炎症疾病发生。微生态BYL719价格制剂益生菌因其具有调节肠道菌群构成的作用,辅助治疗可减轻根除引起的肠道菌群失衡,有可能减少抗生素的使用或减少其副作用。基于此,本研究通过开展随机对照临床试验,应用含阿莫西林、呋喃唑酮的四联疗法联合微生态制剂对根治幽门螺杆菌感染疗效及对肠道微生态的影响分析。观察分析HP治疗疗效以及肠道微生态的变化,为微生态制剂在Hp治疗中的临床应用提供一定的参考。方法:选取2022年1月-2022年12月郯城县第一人民医院就诊Hp感染阳性的初治患者110例作为研究对象,采用前瞻性、随机数字对照方法PF-03084014配制分成两组,对照组(n=55),实施含阿莫西林、呋喃唑酮的四联疗法,包括雷贝拉唑钠肠溶胶囊,胶体果胶铋胶囊,阿莫西林,呋喃唑酮,观察组(n=55),在对照组基础上联合双歧杆菌乳杆菌三联活菌片,两组持续治疗14d后对比两组治疗后Hp根除率、临床疗效,肠道微生态水平,统计不良反应发生率。结果:观察组ITT根除率90.91(50/55),对照组ITT根除率76.36(42/55),χ~2=4.251,P=0.039;观察组PP根除率96.15(50/52),对照组PP根除率84.00(42/50),χ~2=4.258,P=0.039;观察组Hp根除率高于对照组,差异具有统计数意义(P<0.05);观察组治疗总有效率(98.18%)高于对照组(87.27%),具有统计学意义,(P>0.05);两组治疗前乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌比较(P>0.05)。治疗后对照组乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌明显降低,而观察组无异常变化,且菌数量高于对照组,差异具有统计数意义(P<0.05);选取的110例患者,共发生21例不良反应,总发生率19.09%(21/110);观察组发生6例,总发生率为10.91%(6/55),对照组发生15例,总发生率为27.27%(15/55);观察组不良反应总发生率低于对照组,χ~2=4.767,P=0.029,差异具有统计学意义,(P<0.05)。结论:含阿莫西林、呋喃唑酮的四联疗法联合微生态制剂能增加Hp的根治率collapsin response mediator protein 2,明显改善临床症状,具有较好的治疗效果,可以提高机体有益菌益生菌的数量,降低不良反应发生率,安全性较好,可作为Hp一线根除疗法的选择方案。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9通过肝源性巨噬细胞移动抑制因子调控动脉粥样硬化炎症反应的研究

目的 利用人细胞株,系统研究PCSK9是否通过肝源性MIF调控单核/巨噬细胞炎症反应,进而为动脉粥样硬化(Atherosclerosis)等炎症性疾病的临床防控提供新的思路和依据。方法 利用小干扰RNA(Small interfering RNA,SiRNA)介导的MIF基因转染THLE-3细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THLE-3)和MIF正常表达组(Con-THLE-3),通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测肝细胞中PCSK9、MIF mRNA表达。在Si-MIF-THLE-3组和Con-THLE-3组中分别给与PCSK9重组蛋白进行干预,通过Western Blot检测肝细胞中PCSK9、MIF蛋白表达,并用ELISA测定培养液中PCSK9及MIF的含量,并收集上述肝细胞的培养液,-80℃冻存。利用SiRNA介导的MIF基因转染THP-1细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THP-1)和MIF正常表达组(Con-THP-1),通过Western Blot检测MIF的蛋白表达。将收集的肝细胞培养液分别加入Si-MIF-THP-1和Con-THP-1组共培养48 h,其中PCSK9干预组另设TLR4特异性抑制剂TAK-242(1 μM)(P+T)。通过ELISA检测炎症因子表达;Western Blot检测THP-1细胞株中TLR4—NF-κB信号通路的表达。结果 (1)Si-MIF-THLE-3组较Con-THLE-3组的MIF mRNA表达selleck MLN8237显著降低,而PCSK9的mRNA表达升高(P均<0.05)。(2)PCSK9干预后肝细胞MIF蛋白的表达以及分泌至培养液中的含量升高,而PCSK9蛋白的表达以及培养液中的含量不变(P均<0.05)。(3)Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的MIF蛋白表达显著降低(P均<0.05)。(4)Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组炎症因子的表达低,PCSK9干预组较正常组和P+T组的炎症因子表Plant bioaccumulation达升高;PCSK9干预组较正常组和P+T组的TLR4蛋白表达升高;Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的IKBα蛋白表达高,PCKPT-330体内实验剂量SK9干预组较正常组和P+T组的IKBα蛋白表达低;PCSK9干预组较正常组和P+T组的P65/P50蛋白表达高(P均<0.05)。结论 PCSK9可诱导肝细胞MIF的合成与分泌,肝细胞分泌的MIF可与巨噬细胞表面受体TLR4结合,激活下游NF-κB炎症信号通路,促进TNF-α、白介-6、白介-1β、单核细胞驱化因子-1等炎症因子的分泌,激发炎症效应。

凉山州地区原发性扩张型心肌病住院患者临床特征及预后危险因素和中医证型分布规律的研究

目的:回顾分析总结710例扩张型心肌病住院患者的临床特征及预后危险因素,探究扩张型心肌病在中医证型的分布规律,对比不同证型的患者的临床特征,为后续扩张型心肌病患者的中西医结合治疗提供新的思路和方法。方法:连续收纳凉山州第一人民医院、凉山州第二人民医院、凉山州中西医结合医院、西昌市人民医院2013-2020年共计710例扩张型心肌病住院患者,收集患者相关临床指标和中医四诊资料,以全因死亡、心血管死亡/心脏移植和猝死为研究终点,采用SPSS 27.0软件对数据进行分析计算累积生存估计值,单因素、多因素COX比例风险回归模型来确定全因死亡、心血管死亡/心脏移植和猝死的危险因素,根据临床症状、中医四诊,对扩张型心肌病患者进行辨证分型亚组分析,观察扩心病中医证型的分布情况,对比不同Trichostatin A价格证型之间的临床特征。研究结果:纳入的710例患者的平均年龄(53.42±14.10)岁,其中男性431人,女性284人,所有患者平均随访37.7个月,存活567例,死亡143例,死亡率为20.14%,死亡患者中33例为猝死,52例为心血管死亡。多因素COX回归分析结果显示Log(NT-pro-BNP)(HR,4.646,[95%CI,1.613-4.13.381],P=0.004)是扩心病患者全因死亡的危险因素;舒张压(HR,0.942,[95%CI,0.887-0.999],P=0.046)、年龄(HR,1.100,[95%CI,1.007-1.202],P=0.035)是扩心病患者心血管死亡的危险因素;房颤(HR,9.485,[95%CI,1.8endophytic microbiome20-49.433],P=0.008)、Log(NT-pro-BNP)(HR,5.910,[95%CI,0.992-35.204],P=0.05)是扩心病患者猝死的危险因素。扩心病中医辨证分型中占比最大的是气阴两虚证(40.3%),其次是气虚血瘀证(27.0%),再者是痰饮阻肺证(17.9%),最少的是阳虚水泛证(14.8%)。研究结论:扩心病患者中男性多于女性,扩心病患者多在40-60岁发病;扩心病患者容易并发各类心律失常,以室性心律失常最多见,房颤次之,Imidazole ketone erastin合并房颤的患者发生终点事件概率更高。NT-pro-BNP与心衰的关系密切,是扩心病病患者全因死亡、猝死的危险因素;舒张压、年龄是扩心病患者心血管死亡的危险因素。中医辨证分型中,占比最大的为气阴两虚证、其次是气虚血瘀证、痰饮阻肺证,阳虚水泛证患者最少,阳虚水泛证、痰饮阻肺证患者较气阴两虚证、气虚血瘀证患者的心功能更差,临床症状更严重,死亡率更高。

IRES元件应用于癌症预后分析的研究

内部核糖体进入位点(IRES)是一段能够介导非帽依赖翻译机制的m RNA序列。癌细胞在遭遇细胞凋亡、免疫监视、化疗和放射性治疗等应激状态时,通过IRES元件介导的非帽依赖翻译维持基本功能,从而帮助癌细胞对应激环境产生抗性。目前在人类m RNA中存在着大量的IRES元件尚未被发ATM/ATR抑制剂现,实验鉴定IRES元件的过程复杂繁琐。随着大数据时代的到来,深度学习正在越来越广泛地应用于生物序列的预测。因此,构建深度学习模型来预测IRES元件成为一种值得借鉴的方法。而转录因子中存在着大量IRES元件,转录因子是调控细胞转录过程的蛋白质,控制着许多细胞过程,包括增殖、凋亡、分化和炎症。转录因子的失调导致了大量人类疾病的产生,尤其是癌症。靶向转录因子已经表现出强大的癌症治疗效果,因此转录因子具有巨大的抗癌治疗潜力。在所有癌症中,肺癌是最具侵略性的恶性肿瘤。由于早期症状不明显,肺癌的预后极差,肺癌患者5年生存率不足20%。肺癌在临床表现、组织病理学、治疗反应和术后复发风险方面具有很大的异质性。利用高通量测序技术分析癌症的分子特征,可以在肺癌的诊断、预后和治疗方面发现可靠的生物标志物。考虑到IRES元件和转录因子在肿瘤发生发展过程发挥着重要作用,我们开发了一种新的基于深度学习的IRES元件识别程序,从转录因子中识别具有IRES元件的基因,接着从中筛选与肺癌预后相关的基因,构建预后模型,最后,基于预后模型评估肺癌患者的预后状况。本论文的主要工作和结果如下:我们通过深度学习的方法构建了一种新的IRES元件识别程序——acute chronic infectionIREStest。该程序的训练数据集正负样本为经过实验验证的1209个序列,并首次使用了基于深度学习的模型构建IRES元件预测程序,其特征提取模块由双向门控循环单元(Bi GRU)组成。在加入Transformer中的预热学习策略优化后,IREStest在测试集上有着76.25%的预测准确度和97.50%的敏感性,以及68.42%的精确度和80.41%的F1值,并且在独立测试集中准确度和F1值达到了86.96%和86.96%。而现有的两个真核IRES元件预测程序IRESfinder和IRESPred测试集准确率分别为65.00%和52.50%。IREStest在准确性、敏感性和F1值上都展现出更优异的性能。与现有IRES元件预测程序对比,IREStest具有更强的预测性能。鉴于IRES元件和转录因子在肿瘤发生和发展中的重要作用,我们旨在建立一个基于IRES-转录因子基因的预后模型来预测肺癌患者的预后。首先,通过IREStest从1617个转录因子中筛选到762个可能含有IRES元件的IRES-转录因子基因。然后,从TCGA和GEO分别获得1019例和462例肺癌患者基因表达数据和临床信息,作为训练集和测试集。通过Cox回归分析和LASSO回归从IRES-转录因子基因中筛选与预后相关的基因,最后经过精心挑选得到17个IRES-转录因子基因对构建预后模型。根据这一模型将1019例来自TCGA的肺癌患者和462例GEO数据集中的肺癌患者分为高风险组和低风险组,生存分析表明基于IRES-转录因子基因构建的模型能够评估点击此处患者的生存时间(p<0.001)。在独立预后分析中表明由IRES-转录因子构成的风险值能够作为独立于年龄、性别、分级和分期的预后因子判断肺癌患者的预后。最后我们使用CIBERSORT分析了高风险组和低风险组之间的免疫细胞差异,并通过GO富集分析评估了高风险组和低风险组在生物过程、分子功能和细胞成分之间的差异。本文使用深度学习开发了一种新的IRES元件识别程序IREStest,并将该程序用于从转录因子中识别具有IRES元件的基因,并进一步从中筛选出与肺癌预后相关的基因。我们使用Cox回归分析和LASSO回归方法,最终选出了17个IRES-转录因子基因对来构建预后模型。这种基于预后模型的方法可以预测肺癌患者的预后状况,为肺癌的个性化治疗提供了新的思路和方法。本文研究成果有助于进一步研究IRES元件和转录因子在癌症中发挥作用的分子机制,为癌症的诊断和靶向治疗打下了良好的科学研究基础。

细胞器应激反应与自噬及铁死亡参与氯化钴诱导的血管平滑肌细胞损伤

目的:综合采用生物信息学分析和体外细胞实验验证,研究化学性低氧诱导剂氯化钴(CoCl_2)诱导血管平滑肌细胞损伤与细胞器应激反应及自噬性死亡(自噬)和铁死亡之间的关系。方法:从基因表达数据库(GEO)中获取CoCl_2处理血管平滑肌细胞的基因芯片数据集GSE119226,采用R语言分析数据,探讨CoCl_2处理与细胞器应激反应(高尔基体应激、内质网应激)及两种细胞死亡方式(铁死亡、自噬性死亡)间的关系。采用原代培养的大鼠血管平滑肌细胞(rVSMC)和CoCl_2诱导的体外缺氧模型,CCK-8法检测细胞活力变化,DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平,Western blot法检测缺氧关键分子HIF-1α、高尔基体应激标志物GM130与p115、内质网应激标志物GRP78与CHOP、自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1以及铁死亡标志物GPx4与xCT的表达水平,并观察给予相应的处理剂来诱导或抑制细胞器应激反应或细胞死亡对CoCl_2诱导的细胞损伤作用的影响。结果:对GSE119226数据集进行差异表达基因筛选分析,结果显示CoCl_2处理血管平滑肌细胞对细胞器功能与应激反应、自噬和铁死亡相关基因有明显影响,其中内质网应激、内质网蛋白加工、高尔基体对质膜蛋白转运的调控、自噬/自噬性死亡、铁离子调节与铁死亡等是主要富集的信号通路和生物学过程。体外实验结果显示,与培养的正常对照rVSMC相比,CoCl_2处理后细胞活力明显降低,细胞内HIF-1α蛋白表达与活性氧水平升高。CoCl_2处理后,rVSMC中反映高尔基体应激发生的高尔基体结构蛋白GM130与p115的表达水平降低,反映内质网应激发生的标志分子GRP78与CHOP升高;同时CoCl_2也使细胞自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1水平降低,提示自噬水平降低,而铁死亡标志物GPx4与xCT的表达水平降低则提示细胞发生铁死亡。与CGW-572016小鼠oCl_2处理组相比,诱导高尔基体应激、内质网应激或铁死亡可使细胞活力进一步降低,而抑制上述过程可改善细胞活力;另一方面,升高自噬水平可改善CoCl_2降低的细胞活力。结论:CoCl_2诱导低氧可导致血管平滑肌细胞损伤,高尔基体应激、内质网Modeling human anti-HIV immune response应激和铁死亡发生以及自噬水平降低在其中起重要作用,抑制细胞器应激反应和铁死亡或升高自噬水平可改善CoCl_2导致的Emricasan小鼠血管平滑肌细胞缺氧损伤。

基于网络药理学及体外实验探讨黄芪甲苷治疗胃癌的机制

目的 基于网络药理学方法及体外实验探讨黄芪甲苷治疗胃癌的分子机制。方法 (1)通过SwissTarget、TargetNet、Super-PRED、pharmMapper数据库检索黄芪甲苷作用靶点;利用OMIM、GeneCards、TTD数据库筛选胃癌疾病相关靶点;取上述二者的交集靶点(共同靶点),即为黄芪甲苷治疗胃癌的潜在作用靶点。将交集靶点通过STRING平台建立蛋白互作(PPI)网络,并筛选出黄芪甲苷治疗胃癌的核心靶点。利用R语言包clusterProfiler软件进行潜在作用靶点的GO功能及KEGG通路富集分析,利用Cytoscape 3.8.2软件绘制“疾病-药物-通路-靶点”网络图。使用AutoDock 1.5.6软件进行核心靶点与黄芪甲苷的分子对接验证,并对关键靶点进行体外实验验证。(2)使用不同浓度(20、40、80、120、160、200μg·mL~(-1))黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞24、48、72、96 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。采用80、120、160μg·mL~(-1)黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞48 h后,采用Western Blot法检测细胞PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS蛋白表达水平。结果 (1)共得到87个黄芪甲苷治疗胃癌的潜在作用靶点;筛选出20个黄芪甲苷治疗胃癌的核心靶点;其中PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS等核心靶点与黄芪甲苷的结合能<-5.0 kcal·mol-1,有较好的结合活性;潜在作用靶点主要涉及蛋白激酶信号通路、氧化、化学应激等生物学过程,以及PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路等多条通路。(2)与对照组比较,黄芪甲苷在20~200μg·mL~(-1)浓度范围,分别干预24、48、72、96 h后,Baricitinib供应商MKN-45、HGC-27细胞相对活力均明显降低(P<0Q-VD-Oph说明书.05,P<0.01),且呈现明显的时间、浓度依赖性。与对照组比较,120、160μg·mL~(-1)黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞48 h后,PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),且呈现明显的浓度依赖性。结论 黄芪甲苷通过PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、Mthoracic medicineAPK1、HRAS等多靶点,调控PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等多通路,发挥治疗胃癌的作用。

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究Rural medical education冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培此网站养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10~50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10~50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Fer-1Bax比例,调节细胞凋亡有关。