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目的 基于网络药理学方法及体外实验探讨黄芪甲苷治疗胃癌的分子机制。方法 （1）通过SwissTarget、TargetNet、Super-PRED、pharmMapper数据库检索黄芪甲苷作用靶点；利用OMIM、GeneCards、TTD数据库筛选胃癌疾病相关靶点；取上述二者的交集靶点（共同靶点），即为黄芪甲苷治疗胃癌的潜在作用靶点。将交集靶点通过STRING平台建立蛋白互作（PPI）网络，并筛选出黄芪甲苷治疗胃癌的核心靶点。利用R语言包clusterProfiler软件进行潜在作用靶点的GO功能及KEGG通路富集分析，利用Cytoscape 3.8.2软件绘制“疾病-药物-通路-靶点”网络图。使用AutoDock 1.5.6软件进行核心靶点与黄芪甲苷的分子对接验证，并对关键靶点进行体外实验验证。（2）使用不同浓度（20、40、80、120、160、200μg·mL~(-1)）黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞24、48、72、96 h后，采用MTT法检测细胞增殖情况。采用80、120、160μg·mL~(-1)黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞48 h后，采用Western Blot法检测细胞PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS蛋白表达水平。结果 （1）共得到87个黄芪甲苷治疗胃癌的潜在作用靶点；筛选出20个黄芪甲苷治疗胃癌的核心靶点；其中PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS等核心靶点与黄芪甲苷的结合能<-5.0 kcal·mol-1，有较好的结合活性；潜在作用靶点主要涉及蛋白激酶信号通路、氧化、化学应激等生物学过程，以及PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路等多条通路。（2）与对照组比较，黄芪甲苷在20～200μg·mL~(-1)浓度范围，分别干预24、48、72、96 h后，Baricitinib供应商MKN-45、HGC-27细胞相对活力均明显降低（P<0Q-VD-Oph说明书.05,P<0.01），且呈现明显的时间、浓度依赖性。与对照组比较，120、160μg·mL~(-1)黄芪甲苷分别干预MKN-45、HGC-27胃癌细胞48 h后，PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1、HRAS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05,P<0.01），且呈现明显的浓度依赖性。结论 黄芪甲苷通过PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、Mthoracic medicineAPK1、HRAS等多靶点，调控PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等多通路，发挥治疗胃癌的作用。

目的 探究Rural medical education冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培此网站养和处理方法，采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况，采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况，并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后，随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加，U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后，随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高，促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力，其作用机制可能与促进Bax表达，抑制Bcl-2表达，改变细胞Bcl-2/Fer-1Bax比例，调节细胞凋亡有关。

目的 探讨千金藤素基于蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物购买Empagliflozin雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路诱导宫颈癌细胞自噬的作用机制。方法 取人宫颈癌HeLa细胞株进行培养、传代，千金藤素低剂量、中剂量及高剂量组分别以15、30、60μmol·L~(-1)千金藤素处理，对照组以等量生理盐水处理。检测细胞增殖活性、细胞凋亡率及自噬溶酶体的数量；检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ, LC3-Ⅱ)、Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous Benign pathologies of the oral mucosadomain protein, Beclin1)及p62 mRNA的表达；检测细胞磷酸化丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(phosphorylated pyruvate dehydrogenase kinase 1,p-PDK1)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt, p-Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase, p-PI3K)及磷酸化mTOR(phosphorylated mTOR,p-mTOR)蛋白的相对表达量。结果 与对照组比较，千金藤素3组细胞的增殖活性降低，细胞凋亡率升高，且比较细胞增殖活性，高剂量组<中剂量组<低剂量组，比较细胞凋亡率，低剂量组<中剂量组<高剂量组(P<0.05);AO染色结果显示，与对照组比较，千金藤素3组亮红色荧光比例升高，自噬溶酶体的数量增多，自噬程度增强，且低剂量组<中剂量组<高剂量组；与对照组比较，千金藤素3组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1 mRNA的表达水平升高，p62 mRNA的表达水平及p-PDK1/PDK1、p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR蛋白的相对表达量降低，且比较LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1 mRNA表达量，低剂量组<中剂量组<高剂量组，比较p62 mRNA表达及p-PDK1/PDK1、p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR蛋白的相对表Alpelisib分子量达量，高剂量组<中剂量组<低剂量组(P<0.05)。结论 千金藤素可诱导宫颈癌细胞自噬，降低细胞的增殖能力，促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PDK1介导的Akt/mTOR信号通路有关。

目的：分析肺淋巴瘤患者的临床表现、影像学特征及病理类型。方法：收集东南大学附属中大医院2013年11月至2020年12月经肺部活检病理确诊为肺淋巴瘤的病例，按照淋巴瘤的原发部位分为原发性肺淋巴瘤（PPL）和继发性Mind-body medicine肺淋巴瘤（SPL）两组，分析两组患者临床表现、分期、影像学特征、诊断方法及病理类型。结果：共纳入22例，PPL 10例，SPL 12例。两组患者临床表现均ABT-199细胞培养以咳嗽、呼吸困难和胸痛为主，SPL组III/IV期患者比例及国际预后指数显著高于PPL组（P<0.05）。两组患者胸部高分辨电子计算机断层扫描（HRCT）表现均以肿块、结节、实变为主，PPL组表现为单发肿块及支气管充气征的比例显著高于SPL组，表现为多发结节、纵隔/肺门淋巴结肿大以及胸腔积液的比例显著低于SPL组（P<0.05）。PPL组18F-脱氧葡萄糖（18F-FDG）正电子发射断层显像/计算机断层扫描（PET/CT）的相关参数——最大标准化摄取值（SUVmax）、标准化摄取值峰值（SUVpeak）、代谢肿瘤体积（MTV）及总病变糖酵解（TLG）低于SPL组，但比较差异无统计学意义（P>0.05）。PPL组8例经支气管肺活检（TBLB）确诊，2例经皮肺穿刺确诊。SPL组4例行TBLB确诊，7例行经皮肺穿刺确诊，1例通过外科手术确诊，所有患者中非手术方式确诊的比例为95.5%。PPL病理类型以黏膜相关淋巴组织淋巴瘤为主，而SPLPF-02341066体内以弥漫大B细胞淋巴瘤为主（P<0.05）。结论：肺淋巴瘤的症状无特异性，胸部HRCT有特征性表现，且胸部HRCT可以协助鉴别SPL和PPL,18F-FDG PET/CT也是鉴别SPL与PPL的潜在方法。TBLB及经皮肺穿刺活检是确诊肺淋巴瘤的可靠手段。PPL病理类型以黏膜相关淋巴组织淋巴瘤为主，而SPL以弥漫大B细胞淋巴瘤为主。

目的：探究前列腺素D2(Prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞（gastric cancer stem cells,GCSCs）干性的影响及机制。方法：通过无血清培养法富集7901-GCSCs；然后通过流式细胞术检测无血清培养的7901-GCSCs干性标志物CD44的阳性率；通过干细胞成球实验检测不同浓度PGD2(2.5、5、10)μg/mL刺激后的成球能力，并采用Western blot实验检测不同浓度PGD2刺激后干性相关指标（OCT4、CD44）和自噬相关蛋白（LC3、Beclin-1）的表达。采用Western blot实验检测不同浓度CQ(2.5、5、10)μmol/L刺激后自噬相关蛋白的表达。通过Western blot实验检测PGD2以及PGD2+CQ处理后自噬相关蛋白（LC3、Beclin-1）和干性相关指标（OCT4、CD44）的蛋白表达。结果：流式细胞术结果显示，与胃癌细胞SGC-7901相比，无血清培养的7901-GCSCs中CD44阳性率表达增加（P<0.05）。干细胞成球实验结果表明，与DMSO组相比，PGD2组中7901-GCSCs的成球能力明显减弱（P<0.05）。Western blot结果显示，与DMSO组相比，PGD2组中7901-GCSCs的干性相关指标（OCT4、CD44）蛋白表达下调（P<0.05），而自噬相关蛋白（LC3R428溶解度、Beclin-1）表达增加（P<0.05）。与DMSO组相比，CQ组中自噬相关蛋白（LC3、Beclin-1）表达降低（PC59作用<0.05）。Western blot结果还显示，与DMSO组相Hepatocyte growth比，PGD2+CQ组中细胞自噬相关蛋白以及干性相关指标表达并无明显变化，提示CQ可阻断PGD2对7901-GCSCs的干性抑制作用。结论：PGD2可能通过调控自噬影响7901-GCSCs的干性。

目的 观察调脉合剂对阵发性心房颤动合并稳定性冠心病气阴两虚证患者心率变异性及房颤负荷的影响。方法 采用随机平行对照临床试验，将56例阵发性心房颤动合并稳定性冠心病证属气阴两虚证的患者，随机分组，治疗组30例，对照组26例，2组患者均予常规基础治疗，在此基础上，治疗组患者联合调脉合剂S63845，2组患者均连续治疗4周。对比2组患者心率变异性、房颤负荷及中医证候疗效指标。结果 经治疗后，2组患者记录全程NN间期的标准差(standard deviation of N-N intervals, SDNN),相邻NN间期之差的均方根(mean square of successive differences, RMSSD),高频率范围内NN间期变异(high checkpoint blockade immunotherapyfrequency, HF)均非常明显升高(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。LF/HF,房颤负荷均非常明显降低，组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);中医证候疗效方面，治疗组总有效率90.0%,对照组总有效率61.5%,治疗组中医症状改善方面，明显优于对照组(P<0.05)。结论 调脉合剂可以提高selleck激酶抑制剂阵发性心房颤动合并稳定性冠心病气阴两虚证患者迷走神经功能，调节患者自主神经功能平衡，降低房颤负荷，且疗效可靠，无严重不良反应。

癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。癌症的一个特征是异常细胞快速产生,这些细胞不受控制地增殖,最终可以形成肿瘤。世界卫生组织报告,癌症是全球第二大致死疾病,并造成了全球约六分之一的死亡。面对肿瘤对人类健康造成的重大威胁,肿瘤诊疗技术也一直在推陈出新。传统成像技术具有一定程度的辐射风险,而且属于静态成像方式,只能用于术前成像。而传统三大癌症治疗手段也bacterial infection都存在一定的局限性。例如,手术切除存在易复发的风险;化疗药物的副作用大,易产生耐药性;放疗则会对癌旁的正常组织构成威胁。因此,肿瘤诊疗技术的进一步发展是亟待解决的问题。近年来,光诊疗技术包括近红外荧光成像(NIR-FLI)、光动力治疗(PDT)和光热治疗(PTT),其因非侵入性、时空可控性、低毒副作用和诊疗一体化等特点引起了科研工作者的广泛关注。光敏剂(PSs)通过辐射跃迁产生荧光或磷光用于光学成像,通过非辐射跃迁将光能转化为化学能或者热能,用于肿瘤治疗。当前,大部分报道的PSs主要包括无机纳米材料,如金纳米粒子、过渡金属化合物、碳基材料等,它们在实际应用过程中面临着不可降解性和潜在的毒性问题。另一类是卟啉类,花菁类及二氢叶酚e6等有机商业化染料,虽已被广泛用于生物领域,但仍面临稳定性不够、产生活性氧(ROS)有限、光热转化效率(PCE)低等问题。近十年来,具有螺旋桨构型和供-受体(D-A)结构的新型有机PSs被逐渐开发出来。一方面,该类PSs能有效缓解BAY 73-4506无机纳米材料倍受关注的毒性问题;另一方面,不同于商业化染料大多具有平面化的分子结构,其扭曲的分子构型能显著抑制π-π堆积导致的荧光淬灭,易光漂白和ROS生成不足等问题。此外,增强的分子内电荷转移(ICT)还有利于促进吸收和发射波长红移、降低单重态-三重态能隙(ΔE_(S-T))、促进系间穿越(ISC)并激活光动力性能。因此,含有D-π-A结构的有机光敏剂被认为是最具有潜力的生物纳米材料之一。本论文基于具有D-π-A结构的有机光敏剂,分别通过分子工程、供体工程和π桥工程策略,构建了三个系列的新型有机纳米光敏材料并探究其在NIR-FLI引导的肿瘤光诊疗中的应用。这些有机光敏剂展现出较低的暗毒性,明显的光毒性,良好的生物相容性,优异的活体成像能力及肿瘤抑制效果,为构筑新型诊疗一体化的有机光敏剂提供了独特的设计策略。本论文开展的具体研究内容如下:1、在第二章中,本论文采用分子工程策略在不改变π桥结构的基础上,通过改变电子供体的类型或受体的数量,设计并合成了一系列具有D-A、D-A-D或A-D-A结构的有机光敏剂。其中以苯基吡咯烷(PPR)为供体,氰基为受体且具有A-D-A结构的光敏剂PPR-2CN表现出最长的荧光发射和优异的I型ROS生成能力。理论计算表明,较小的ΔE_(S-T)和相对较大的自旋轨道耦合常数(SOC)促进了ISC,进而诱导了ROS的产生。此外,PPR-2CN还展现出独特的谷氨酸(Glu)和谷胱甘肽(GSH)消耗能力,可直接抑制肿瘤细胞内GSH的生物合成。随着GSH含量的下降,可进一步引起谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)失活和脂质过氧化(LPO),最终导致细胞铁死亡。在本章中,本论文首次实现了单组分有机光敏剂能够同时作为I型光IACS-10759生产商动力试剂和非金属的铁死亡诱导剂用于NIR-FLI引导的多模态协同诊疗。2、在第三章中,基于第二章对光敏剂结构与其对应性能的认识,本论文在不改变π桥和受体结构的基础上,利用供体策略逐渐提高供体的供电子能力,实现了光诊疗性能的进一步提升。其中以三苯胺(TPA)作为供电子基团,氰基作为吸电子基团的光敏剂CNTPA-TPA具有最强的D-A强度,并表现出优异的I型ROS生成能力。此外,氰基同样也能够与Glu和GSH反应,直接降低细胞内GSH的含量,进而诱发铁死亡。光动力治疗和铁死亡的协同作用会进一步导致免疫原性细胞死亡(ICD),但免疫应答仍不足。因此,为了进一步增强免疫效应,本论文通过联合抗PD-L1,不仅成功治愈了原位肿瘤,而且有效抑制了远端肿瘤的生长和肺转移。在本章中,本论文首次实现了单组分有机光敏剂能够用于NIR-FLI引导的铁死亡辅助的光动力免疫治疗用于肿瘤多模态协同诊疗。3、在第四章中,在不改变供体和受体结构的基础上,本论文通过π桥工程策略构建了一系列分别以苯环、呋喃和噻吩作为π桥的有机光敏剂,用于靶向肿瘤线粒体的I型PDT和PTT的协同治疗。通过调控π桥的给电子能力和分子内的自由运动,以噻吩为π桥的光敏剂STB在固态下荧光主峰超过790 nm,并表现出优异的超氧自由基(O_2~(·-))和羟基自由基(·OH)生成能力和可观的光热转化能力。理论计算表明,STB具有较强的D-A强度,有利于降低ΔE_(S-T),促进ISC并诱发PDT。此外,较高的摩尔消光系数和更自由的二面角旋转促进了分子内运动,使STB的PCE高达51.9%。值得一提的是,带正电荷的STB可通过静电作用主动靶向肿瘤细胞的线粒体,改善其在肿瘤区域的富集度,以提升治疗效果。体外和体内实验证明,STB纳米粒子(NPs)显著抑制了癌细胞的增殖和肿瘤的生长。在本章中,本论文实现了单组分有机光敏剂能够用于NIR-FLI和光热成像(PTI)引导的高效PDT和PTT的协同诊疗。

目的 制备共载阿霉素（DOX）与小干扰RNA(siRNA)的脂质介孔硅纳米粒（CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA），并对其进行表征及抗多药耐药肿瘤细胞研究。方法 先以介孔硅纳米粒（MSNs）为基础制备MSNs-SS-NH_2@DOX，并以阳离子脂质体（CLs）对其包覆制得CLMSNs-SS-NH_2@DOX，进一步负载siRNA即得CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA。测定该制剂粒径及Zeta电位，观察其微观形态并进行差示扫描量热分析、X射线衍射分析、红外光谱分析、物理吸附分析；测定该制剂在不同pH条件下（pH5.0、Baricitinib半抑制浓度pH7.4）及不同谷胱甘肽浓度下（0、2、5、10 mmol/L）DOX的体外释放度；考察该制剂对耐DOX型乳腺癌细胞MCF-7/ADR摄取、迁移、凋亡、周期及P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。结果 CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA结构清晰，表面脂膜层明显，粒径为（197.63±3.75）nm,Zeta电位AG-221为（20.64±0.98）m V，理化性质良好。体外释放结果显示，CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA具有良好的p H/还原双重响应释药特性。细胞实验结果显示，经CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA干预后，MCF-7/ADR细胞的药物摄取显著增强，迁移率和P-gp表达水平均显著降低，总凋亡比例和G_0/G_1期所占比例均显著升高（P<0.Intein mediated purification05）。结论 本研究成功制备同时负载DOX和siRNA的CLMSNs-SS-NH_2@DOX/siRNA；该制剂理化性质良好，具有pH/还原双重响应释药特性，且可通过下调P-gp表达逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药。

研究背景与目的:前列腺癌作为老年男性最常见的恶性肿瘤疾病,严重影响男性生命健康和生活质量。无论是在西方国家还是在我国前列腺癌的疾病负担都在增加。局限性疾病经治疗后具有较高的5年生存率,然而一旦出现转移或进展为去势抵抗性前列腺癌通常有不良的预后。因此,探索前列腺癌中新的生物标志物是必要的。环状RNA(circular RNA,circRNA)是由前体mRNA经过反向剪接环化而成,作为近十年被深入探索的“非编码”RNA已经得到充分的认识。许多研究已经证明circRNA在癌症中异常表达,参与肿瘤恶性进展的调控。在前列腺癌中许多异常表达的circRNA也被报道,circRNA具有非常大的潜力成为前列腺癌诊断、治疗及预后生物标志物。利用生物信息学分析我们发现circMAML3(hsa＿circ＿0125392)目前未见相关研究报道,在本研究中我们对circMAML3在前列腺癌中作用及其分子机制进行了探索。研究方法:(1)基于文献报道的25对前列腺癌组织与正常组织测序结果,从中筛选出差异表达的circMAML3(hsa＿circ＿0125392),进一步使用circAtlas 2.0数据库验证。(2)circMAML3的环状特性与稳定性采用sanger测序、琼脂糖凝胶电泳实验(分析circMAML3在cDNA与gDNA中扩增情况)、RNase R实验及放线菌素D实验分析;circMAML3在PC3和DU145细胞中亚细胞定位通过核质分离实验及荧光原位杂交实验确定。(3)利用CCK-8增殖实验、克隆形成增殖实验和transwell迁移及侵袭实验分析circMAML3、miR-665及MAPK8IP2对前列腺癌细胞PC3和DU145功能的影响。(4)使用circBank和circular RNA Interactome预测circRNA可能靶向的miRNA,qRT-PCR检测PC3和DU145细胞中敲减circMAML3后miRNA表达变化,及过表达circMAML3后miR-665表达变化,Spearman分析circMAML3与miR-665在20例前列腺癌组织中的相关性,通过双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫共沉淀实验及miRNA pulldown实验进一步分析circMAML3与miR-665在PC3和DU145细胞中关系。(5)使用DIANA-micro T、miRDB和ENCORI预测miRNA可能靶向的mRNA;通过UALCAN数据库分析可能靶向m RNA的表达情况及生存情况;qRT-PCR及Western blot检测转染miR-665 mimics/inhibitor后MAPK8IP2表达变化,通过双荧光素酶报告基因实验及miRNA pulldown实验进一步验证miR-665及MAPK8IP2的作用关系。(6)通过转染miR-665 mimics至过表达circMAML3的PC3细胞,及miR-665 inhibtor与circMAML3 si1共转染至DU145细胞,进行circMAML3与miR-665的回复实验,并使用Western blot检测miRNA靶基因表达变化。(7)Pearson分析circMAML3与MAPK8IP2在16例前列腺癌组织中的相关性;Western blot检测过表达和敲减circMAML3后对MAPK8IP2的影响;通过转染siMAPK8IP2至过表达circMAML3的PC3和DU145细胞进行回复实验,并使用Western blot检测MAPK8IP2表达变化。(8)将稳定敲减circMAML3的PC3细胞注射至裸鼠皮下,构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察敲减circMAML3后对PC3细胞在体内生长的影响;取瘤体组织进行qRT-PCR检测circMAML3、miR-665及MAPK8IP2表达情况,免疫组化实验分析Ki67和MAPK8IP2表达情况。研究结果:(1)从测序文件中筛选出在前列腺癌组织中高表达的circMAML3,circAtlas2.0数据库分析发现circMAML3在大多数癌组织中高表达;circMAML3在20对前列腺癌组织中的表达水平显著高于配对的正常组织;在前列腺癌细胞表达水平也明显高于正常前列腺上皮细胞。(2)PCR产物sanger测序检测到circMAML3环化位点,PCR产物琼脂糖凝胶电泳证实circMAML3在cDNA中可以检测到,而不存在于gDNA中;RNase R实验及放线菌素D实验表明circMAML3在前列腺癌细胞中稳定存在;核质分离实验及荧光原位杂交实验发现circMAML3主要分布Barasertib采购在细胞质中。(3)过表达circMAML3促进PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭能力,敲减circMAML3抑制PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭能力。通过预测结合qRT-PCR验证,circMAML3可能靶向miR-665,Spearman分析表明circMAML3与miR-665在前列腺癌组织中表达显著负相关,进一步双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫共沉淀及miRNA pulldown实验证明circMAML3与miR-665存在直接作用关系。(4)miR-665 mimics抑制PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭,miR-665inhibitor促进PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭。预测结合qRT-PCR验证,miR-665可能靶向MAPK8IP2,双荧光素酶报告基因实验及miRNA pulldown实验证明miR-665与MAPK8IP2有直接作用关系。Western blot证明过表达circMAML3上调MAPK8IP2的表达明显受到miR-665 mimics的逆转,敲减circMAML3抑制MAPK8IP2的表达效应明显受到miR-665 inhibitor的回复。(5)MAPK8IP2高表达与不良临床病理因素和预后不佳相关,敲减MAPK8IP2抑制PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭能力;Pearson分析表明circMAML3与MFerrostatin-1APK8IP2在前列腺癌组织中表达显著正相关,Western blot表明敲减和过表达circMAML3会下调或上调MAPK8IP2的表达;而敲减MAPK8IP2后可以回复过表达circMAML3导致的MAPK8IP2上调。(6)功能回复实验表明,miR-665 mimics可抑制circMAML3过表达对PC3细胞增殖、迁移及侵袭能力的促进作用,miR-665 inhibitor可回复敲减circMAML3对DU145细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。与此同时,敲减MAPK8IP2可抑制circMAML3过表达对PC3和DU145细胞增殖、迁移及侵袭能力的促进作用。(7)裸鼠皮下成瘤实验证明,敲减circMAML3会抑制前列腺癌细胞体内生长Stirred tank bioreactor。研究结论:(1)circMAML3在前列腺癌组织及癌细胞中高表达,并促进前列腺癌恶性进展;(2)miR-665在前列腺癌组织及癌细胞中低表达,在前列腺癌中发挥抑癌作用;(3)MAPK8IP2高表达与不良的临床病理因素和不佳的预后密切相关,敲减MAPK8IP2可以减弱前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力(4)miR-665通过靶向调控MAPK8IP2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭;(5)前列腺癌细胞中circMAML3大部分位于细胞质中,circMAML3通过调控miR-665/MAPK8IP2轴促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)是由冠状动脉血流量减少、心脏组织供氧不足导致心肌细胞的不可逆死亡。由于心肌细胞几乎不具有再生潜力,抑制心肌细胞死亡对心肌梗死病人的预后尤为关键。近年来发现的铁死亡(Ferroptosis)是一种新型的铁依赖性细胞死亡方式,细胞死亡的同时伴随着脂质过氧化物的过量积累。目前,铁死亡被发现与多种疾病的发生发展密切相关,而铁死亡在心血管疾病中的关键作用也陆续引起人们的重视,但其具体参与机制尚未阐明。在心肌梗死的发生中,心肌细胞的钙超载被发现参与其中。细胞内钙超载的发生可激活钙调蛋白(Calmodulin,CaM)从而调控L型电压依赖性钙通道(L-type voltage-dependent Ca~(2+)channel,LVDCC)的作用。鉴于细胞内铁超载是引发心肌细胞铁死亡的重要机制,而LVDCC是参与细胞内铁离子运输的重要阳离子通道,我们意图探究心肌梗死过程中Ca~(2+)/CaM的激活是否可以通过调控LVDCC通道造成铁过载从而加剧铁死亡的发生。方法:建立大鼠心肌细胞系H9c2缺氧(Hypoxia)模型,使用铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)和去铁胺(Deferoxamine,DFO)进行干预,Cell counting kit8(CCK-8)法和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色检测细胞活性和死亡率;分光光度法检测心肌丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测溶质载体家族7成员11(Solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化酶4(Glutathione peroxidaselleck合成se 4,GPX4)表达量变化。随后使用Fluo-4/AM荧光探针检测缺氧对细胞内Ca~(2+)水平的影响,Western blot和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测CaM蛋白和m RNA表达水平以及钙调蛋白激酶(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinases,CaMKs)包括CaMKⅡ和CaMKIV的表达。此外,通过抑制CaM检测心肌细胞活性及铁死亡相关指标。并进一步使用钙黄绿素(Calcein-AM)荧光探针和总铁离子比色法试剂盒,检测阻断LVDCC对缺氧诱导下心肌细胞内铁离子水平的影响。最后建立MI模型,测定心功能和心肌纤维化水平,以及CaM的表达变化;同时对MI术后小鼠进行CaM拮抗剂(Calmidazolium chloride,CCL)治疗,在心肌组织中检测铁死亡相关指标。结果:在细胞水平上,与对照组相比,Hypoxia组细胞存活率、GSH含量以及SLC7A11和GPX4表达下降,细胞死亡率和MDA含量增加;与Hypoxia组相比,Fer-1和DFO处理均在不同程度上抑制了缺氧给予的H9c2细胞损伤。H9c2细胞经缺氧诱导后,表现为Ca~(2+)浓度上升、CaM以及CaMKⅡ和CaMKIV表达上调。进一步通过细胞活性以及检测铁死亡相关指标发现,CaM拮抗剂CCL或敲低CaM均能缓解Gefitinib-based PROTAC 3缺氧诱导的心肌细胞铁死亡。Calcein-AM和细胞总铁检测的结果显示,LVDCC阻滞剂维拉帕米抑制缺氧导致的铁离子增多,提示CaM通过调控LVDCC打开并造成细胞内铁过载从而诱发铁死亡。在动物水平,进一步证明CaM通过调控LVDCC打开在铁死亡介导的MI中发挥重要作用。结论:本研究在细胞水平证实了铁死亡是缺氧损伤中心肌细胞重要的死亡方式,并揭示了Ca~(2+)/CaM及其调控LVDCC可能作为抑制铁死亡的新靶点,并在动物水平进行验证immune tissue,为进一步阐明其机理和扩大其应用提供参考。