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本文主CP-456773使用方法要聚焦于设计、合成发光性能良好的卟啉类配体及其非贵金属配合物,并对其进行结构和光学性能表征。主要内容可分为以下两部分:第一GSK2118436纯度部分:长链烷氧基金属卟啉的合成及其近红外发光性质研究。本文合成了两种meso-四[4-(烷氧基)苯基]-卟啉,将其分别与廉价过渡金属离子(Ni~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+))和稀土金属离子Yb~(3+)配位,并对其紫外-可见吸收光谱、荧光发射光谱、相对量子产率进行测试。由光学测试结果发现,金属配合物较相应配体的吸收和发射波长均有不同程度上的蓝移。金属配合物在不同溶剂中的紫外-可见吸收光谱几乎没有变化。配体的相对量子产率大Molecular genetic analysis于传统的四苯基卟啉,配合物的量子产率因配位金属不同表现出极大的差异。第二部分:含氧类卟啉及其金属配合物的合成及近红外发光性质研究。本文合成了用二苯并呋喃代替卟啉母核上的一个吡咯环形成的3种类卟啉配体,并与Ni~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)配位,合成了9种金属配合物,分别对其进行紫外-可见吸收光谱、荧光发射光谱、相对量子产率测试。从光学测试结果发现,配体及配合物紫外-可见吸收光谱的能量最低峰位置比结构类似的卟啉类大环有红移,荧光发射能量最低峰位置也比相似结构的大环有红移。与金属配位后,锌配合物相对量子产率比配体略有下降但仍维持在较高水平,而镍和铜的配合物则几乎没有荧光。

Argonaute(Ago)蛋白可以利用短的核苷酸单链识别与之互补的序列,是一种具有基因编辑的潜力的核酸酶,受到越来越多的关注。真核生物中的Ago蛋白是影响调节转录后基因表达的RNA干扰(RNAi)通路的关键因素。原核生物中的Ago会参与宿主的免疫防御和DNA复制等重要的过程。根据Ago蛋白结合短核苷酸的特性,很多团队已经利用Ago蛋白开发核酸检测工具或者在基因工程上进行应用。为了挖掘更多可以应用的Ago蛋白,我们发现一种来自嗜中温蓝细菌属聚球藻(Synechococcus sp.)的Ago蛋白(ScAgo)。通过构建表达质粒,获得目的蛋白,并对该蛋白性质进行研究。实验表明ScAgo是一种DNA引导的核酸酶,可以高效利用短g DNA去切割单链DNA(singlIACS-10759e-stranded DNA,ss DNA)。ScAgo性质与常规Ago类似,但是其羟基化引物切割位点在15和16位碱基之间,这个发现较为特殊。ScAgo与已知Ago相比金属离子耐受范围较为广泛,最适切割温度为65℃。GSK2118436浓度同时SMalaria immunitycAgo对于guide和target之间的错配的容忍度较高,在第9、11、12、13、14位碱基发生错配会影响其切割能力。最重要的是ScAgo蛋白85℃可以完全裂解质粒DNA,这为开发ScAgo作为一个内切酶提供了坚实的基础。综上ScAgo作为一种DNA引导的DNA内切酶,这个研究加深了我们对ScAgo的认识,并为其后续开发更多应用奠定了基础。

【研究背景】烟草是重要的经济作物,其在大田生长期对水分需求较多,易受干旱的影响,从而导致烟叶产量和品质的损失。钾是重要的渗透调节物质,能够通过调节气孔的开闭,参与植物的干旱胁迫响应。植物的TPK/KCO钾离子通道蛋白,对钾离子具有高度的选择透性。例如,拟南芥的TPK1在植物中广泛表达,可调节气孔开闭,对维持细胞内钾离子动态平衡以及种子的萌发起到重要的作用。研究还表明,该通道家族蛋白具有响应盐胁迫及低钾胁迫的功能。然而,目前尚不清楚其是否参与植物的干旱胁迫响应。本课题组前期研究发现,在模拟干旱条件下,属于烟草TPK/KCO钾离子通道家族的NtTDRE1基因的表达量显著上升,暗示其可能参与了烟草的干旱胁迫响应。因此将该基因克隆出来,并创制了NtTDRE1过表达和敲除突变体株系。然后对野生型、过表达及敲除突变体材料进行了干旱胁迫处理,开展了形态观察、生理指标测定及抗旱相关Marker基因的表达分析等,筛选并验证NtTDRE1的互作蛋白MDV3100,旨在为NtTDRE1参与烟草干旱胁迫响应的功能与调控机制研究奠定基础。【材料与方法】采用野生型、NtTDRE1过表达和敲除突变体株系为研究材料,观察不同浓度的PEG6000和ABA处理下种子的萌发率。同时,用适当浓度的PEG6000和ABA处理烟苗,分析抗旱相关基因的表达变化;再对各个材料的烟苗进行自然干旱处理,记录植株形态变化,并测定抗旱相关生理指标;制备NLGK-974体内tTDRE1的多克隆抗体,通过免疫沉淀-质谱鉴定(IP-MS)筛选其互作蛋白,并利用酵母双杂交、荧光素酶互补实验加以验证。【结果与分析】模拟干旱条件下,随着PEG6000的浓度增加,野生型、NtTDRE1过表达和Rumen microbiome composition敲除突变体的种子萌发率均呈现下降趋势,且在10%PEG6000的处理下差异较大,过表达株系的种子萌发率高于野生型和敲除突变体;随着外源ABA的处理浓度的增加,三组材料的种子萌发速度都有所减慢,且在1μM ABA处理下,过表达的种子萌发率显著低于野生型和突变体;在10%PEG6000、1μM ABA处理下,在过表达材料中抗旱相关基因的表达有所增强。将长势一致的2月龄烟草进行自然干旱30d后,过表达材料的保水力显著高于野生型,突变体材料失水最快。过表达材料的抗氧化酶活性、根冠干重、相对含水量都高于野生型和突变体,而其离体叶片失水率、气孔开度、过氧化氢和丙二醛含量则都低于野生型和突变体。为了寻找NtTDRE1的互作蛋白,在成功制作多克隆抗体的基础上,开展了免疫共沉淀试验。通过质谱分析,找到了候选蛋白Nt14-3-3。然后,分别利用酵母双杂交、荧光素酶互补试验验证了NtTDRE1与Nt14-3-3可以在体外与体内进行互作。同时,qRT-PCR的分析结果也表明,Nt14-3-3基因的表达受干旱胁迫的强烈诱导。【结论】NtTDRE1参与了烟草的干旱胁迫响应过程,并可能与Nt14-3-3蛋白协同作用,增强了烟草抵御外界干旱胁迫的能力。

背景：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)是一种肌肉因子，具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化及改善胰岛素抵抗等功能，并且具有调节多种细胞焦亡的能力。目的：探讨FNDC5对巨噬细胞焦亡的作用及潜在机制。方法：(1)构建FNDC5基因过表达medial oblique axis和沉默慢病毒载体，将慢病毒载体转染至THP-1细胞株，通过观察细胞绿色荧光表达、qPCR和Wes获悉更多tern blot验证转染效果。(2)佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，通过氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)构建巨噬细胞焦亡模型，分组：NC组、ox-LDL组、ox-LDL+MOCK1组、ox-LDL+Ov-FNDC5组、ox-LDL+MOCK2组和ox-LDL+shFNDC5组。(3)采用Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验评估细胞焦亡程度，采用qPCR和Western blot检测相关分子mRNA和蛋白表达水平，采用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β和白细胞介素18释放水平。结果与结论：与ox-LDL+MOCK1组相比，过表达FNDC5可显著降低巨噬细胞焦亡率以及乳酸脱氢酶、白细胞介素1β、白细胞介素18释放水平，显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASCPanobinostat化学结构、Caspase-1及GSDMD的mRNA表达，显著抑制NF-κB p65、NF-κB p50、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1及GSDMD-N的蛋白表达；与ox-LDL+MOCK2组相比，沉默FNDC5则出现相反结果。结果表明：FDNC5可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路缓解巨噬细胞焦亡。

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌最常见的亚型,约占肺癌总发生率的80-85%。具有并发症多、易复发和转移等特点,患者5年生存率仅为26.4%。化疗是目前治疗NSCLC的主要方式,紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是从太平洋紫衫的树皮及针叶中提取的一种三环二萜类化合物,是目前NSCLC临床的一线化疗药物。但其具有疏水性,常规注射剂通常缺乏组织和器官特异性,快速在体内清除、副作用大。研发出高效的药物递送系统是解决这一问题的有效策略。近些年来,细胞介导的药物递送系统受到诸多国内外研究者的青睐,这种新的药物递送方式利用了内源性细胞载体在体内循环时间久、形态可塑性大、受体丰富、可通过生物屏障、无免疫原性等优点,能够高效、快速的将药物传递到靶向部位,最大限度的提高治疗效果。中性粒细胞(Neutrophils,NEs)是循环系统中最丰富的白细胞。NEs能够在细胞因子的作用下通过血管和间质组织迅速的到达炎症部位,释放细胞因子,吞噬病原体,修复损伤。炎症是心血管疾病、自身免疫性疾病和癌症等的主要病理特征。基于上述背景,本文设计了一种NEs介导的紫杉醇脂质体药物递送系统(NE-LP-PTX)。首先制备脂质体(LP)对PTX进行封装,LP不仅可以解决PTX疏水性的问题,还可以避免游离PTX对NEs产生毒性。而后,提取NEs对紫杉醇脂质体(LP-PTX)进行包载后再回输,利用肿瘤部位的炎症环境,使得NEs迅速通过血管和组织间质迁移到肿瘤部位,释放出药物。对LP-PTX和NE-LP-PTX的制备方法进行了一系列的优化,并进行了体内外的药效学考察,具体内容如下:1.PTX体外分析方法学建立通过高效液相色谱建立PTX的体外分析方法。紫外可见分光光度计检测得到PTX在227 nm处有最大吸收峰,符合药典记载,PTX标准曲线R~2为0.9993,PTX浓度在15.63-500.00μg/m L范围内的线性回归方程为:y=33832x-214799。验证建立的PTX体外分析方法学,结果显示该方法专属性良好,精密度、回收率和稳定性检测的RSD值均小于3.00%,实验结果符合标准,可以用于后续的PTX含量检测分析。2.LP-PTX的制备及表征通过薄膜分散法制备LP-PTX,对其进行理化性质的表征,粒径163.6 nm左右,PDI为0.168,电位为-2.47 m V,包封率为92.10%,载药量为3.55%。扫描电镜显示脂质体成规整的球形囊状结构,空白脂质体的粒径小于载药脂质体。稳定性结果显示,72 h内脂质体的粒径和PDI并无明显变化。3.NE-LP-PTX的构建本研究选择小鼠骨髓腔内的中性粒细胞负载LP-PTX,骨髓提取得到的细胞数量可以达到7.24×10~6 cell/mouse,纯度和形态符合后期实验要求。选择细胞电穿孔法使NEs负载LWave bioreactorP-PTX,并对NEs电穿孔包载LP-PTX的条件进行优化,NEs-LP-PTX制备的最终电穿孔条件为:220 V,脉冲时间5 ms,10个脉冲循环,LP-PTX的浓度为120μg/m L。4.LP-PTX的体外评价选用A549细胞作为细胞模型,进行了细胞毒性、细胞摄取和细胞内活性氧(ROS)水平的分析。细胞毒性结果显示,在1-24μg/m L的浓度范围内,LP-PTX相较于游离药物对A549细胞的杀伤更为明显,且对A549细胞的增殖抑制效果成剂量依赖性。细胞摄取结果显示,A549细胞对LP-PTX摄取效率与时间呈正相关。ROS水平检测结果显示,PTX组只有少量的活性氧累积,LP-PTErdafitinib作用X组细胞内活性氧的累积是PTX组的4.77倍。5.NE-LP-PTX的体内评价选用A549细胞建立裸鼠异位荷瘤模型,治疗结束后与Control组相比,NE-LP-PTX能显著抑制肿瘤的增长,与Control组相比NE-LP-PTX组抑SAHA制了89.0%的肿瘤体积增长,与LP-PTX相比,NE-LP-PTX组抑制了53.66%的肿瘤体积增长,与PTX组相比,NE-LP-PTX组抑制了68.82%的肿瘤体积增长。肿瘤组织病理学结果显示,Control组肿瘤织坏死区域较少,LP-PTX和NE-LP-PTX组肿瘤组织范围内坏死较多。TUNEL肿瘤细胞凋亡检测结果显示,Control组肿瘤细胞生长旺盛,NE-LP-PTX组凋亡细胞最多,LP-PTX次之,PTX相对较弱。对主要脏器进行H&E染色分析和体重监测,NE-LP-PTX具有良好的生物安全性。综上所述,本研究制备的LP-PTX具有良好的包封率、粒径、分散性和稳定性。体外实验显示LP-PTX具有良好的抑制A549细胞增殖活性和细胞摄取效率,促进A549细胞内ROS累积。采用细胞电穿孔的方式成功制备NE-LP-PTX,处理后的NEs仍保持良好的细胞活性和细胞迁移能力,体外实验证实了NE-LP-PTX具有良好的抑瘤效果和生物安全性。

漆酶是一种多酚氧化酶,在真菌的形态建成、生长发育、色素合成和致病性中发挥重要作用。为明确不同漆酶同工酶在玉米大斑病菌中的生物学作用,本研究在前期已获得玉米大斑病菌漆酶StLAC1和StLAC6基Z-IETD-FMK细胞培养因敲除突变体的基础上,进一步创制了StLAC1和StLAC6的回补和超表达菌株,分析了它们在生长发育及biocontrol agent侵染中的功能;同时为了深入分析其发挥作用的方式,利用转录组学和代谢组学比较了StLAC1和StLAC6敲除后对玉米大斑病菌基因表达及代谢产物合成的影响,为分析比较不同漆酶同工酶的作用机制提供依据。主要研究结果如下:1.通过无缝克隆法构建回补和超表达载体,利用原生质体转化技术创制了玉米大斑病菌关键漆酶基因StLAC1和StLAC6的回补和超表达菌株。2.对玉米大斑病菌野生型菌株、敲除突变体ΔStLAC1、回补菌株C.ΔStLAC1和超表达菌株OE.StLAC1进行表型分析发现,StLA C1影响黑色素合成及真菌细胞壁结构,并通过影响附着胞萌发及侵染能力影响了病菌致病性。固态核磁检测发现,StLAC1缺失后不影响黑色素结构只影响其在细胞壁的聚合。3.对玉米大斑病菌野生型菌株、敲除突变体ΔStLAC6、回补菌株C.ΔStLAC6和超表达菌株OE.StLAC6进行表型分析,发现StLAC6基因不影响病菌生长,但负调控玉米大斑病菌的黑色素合成及致病性,敲除突变体的粗毒素使叶片产生更多的活性氧,但对化学杀菌剂敏感性增加。4.利用代谢组学分析了玉米大斑病菌野生型菌株、ΔStLAC1、ΔStLAC6胞内外差异代谢物,结果显示StLAC1基因缺失对代谢产物的影响更大,StLAC1和StLAC6差异影响了黑色素合成前体代谢物,且StLAC1基因主要影响脂类代谢物。5.为明确StLAC1对玉米大斑病菌形态及致病的作用机制点击此处,利用转录组分析StLAC1缺失对基因转录水平的影响,发现StLAC1缺失影响膜组分、细胞代谢活动和线粒体功能相关基因的表达,造成病菌膜结构及鞘脂信号紊乱、能量利用方式变化。

玉米是我国重要的粮食作物,其产量对保障国家粮食安全有着重大意义,氮肥施用是提高玉米产量的主要措施,但不合理的施用不仅造成利用率下降,也限制了产量的增长。为进一步挖掘玉米产量潜力,提高氮素利用效率,本研究于2021-2022年在吉林省长春市以玉米品种‘富民985’为试验材料进行田间试验。根据玉米氮素吸收规律,以氮肥一次施入为对照(CK:底肥100%),设4种氮肥追施比例:氮肥两次施入(T1:底肥40%+拔节期追施60%)、氮肥三次施入(T2:底肥40%+拔节期追施20%+大喇叭口追施40%)、氮肥四次施入(T3:底肥40%+拔节期追施15%+大喇叭口追施30%+灌浆期追施15%)、氮肥四次施入并提高灌浆期氮肥施用比例(T4:底肥40%+拔节期追施10%+大喇叭口追施30%+灌浆期追施20%),研究不同氮肥追施比例对土壤氮素去向、玉米氮素吸收及代谢、吐丝后光合特性、灌浆过程和产量的影响,结果表明:1.氮肥追施对土壤氮素去向的影响调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可提高玉米生育期内0-20 cm土层速效氮(铵态氮、硝态氮)含量,2021年T3处理在玉米大喇叭口期及灌浆期0-20 cm土层铵态氮含量比CK显著提高6.3%和50.1%。调整氮肥追施比例可显著降低氨气、氧化亚氮排放。T4处理氨气累积排放量和氧化亚氮累积排放量低于CK、T1和T2。调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量可提高收获后土壤脲酶活性,其中2022年T4处理土壤脲酶活性显著高于CK、T1和T2处理。2.氮肥追施对玉米植株氮素吸收量及氮代谢酶活性的影响调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可提高玉米成熟时玉米植株氮素吸收量,促进叶片氮素转运。2021年T4处理叶片氮素转运量分别比T1和T2处理显著提高63.6%和51.0%。调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可提高玉米棒三叶的硝酸还原酶活性、谷氨酸合成酶活性和谷氨酰胺合成酶活性。2021-2022年T4处理穗位叶硝酸还原酶活性、谷氨酸合成酶活性均显著高于CK,2022年TPassive immunity4处理穗位下叶硝酸还原酶活性较CK、T1和T2显著提高84.3%、78.8%和57.5%。2022年T4处理比T2、T3处理穗位叶谷氨酰胺合成酶活性显著提高74.7%、53.7%3.氮肥追施对玉米光合特性的影响调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可延缓叶面积指数降低,其中T4处理在吐丝后55 d叶面积指数比CK显著提高95.2%。提高灌浆期氮肥施用比例有利于保持SPAD值的稳定,延缓SPAD值降低。与CK相比,T3和T4处理吐丝后45 d SPAD值下降幅度减少28.0%和71.7%。调整氮肥追施比例可延缓吐丝后玉米穗位叶净光合速率降低,提高玉米穗位叶磷酸烯醇式丙Decitabine MW酮酸羧化酶活性。吐丝后45 d,T3处理比CK、T1和T2处理穗位叶净光合速率显著高36.7%、71.0%和18.4%。与CK相比,T4处理玉米灌浆期穗位叶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性显著高20.6%。4.氮肥追施对灌浆过程及籽粒淀粉合成酶关键酶活性的影响调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可延长籽粒灌浆时间,促进籽粒干物质积累。2021年T4处理与CK相比,玉米有效灌浆期延长13.7 d,到达最大灌浆速率时间延后2.4 d,玉米籽粒容重提高1.2%。selleckchem调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量可以提高玉米籽粒结合态淀粉合成酶、可溶性淀粉合成酶和蔗糖合成酶活性。2021年T4处理比CK籽粒结合态淀粉合成酶、可溶性淀粉合成酶和蔗糖合成酶活性显著提高44.7%、39.8%和14.6%。5.氮肥追施对提高玉米氮素利用效率及产量的影响调整氮肥追施比例并增加灌浆期氮肥施用量,可提高玉米氮素利用效率和产量。2021年,T1、T2、T3和T4处理氮素利用效率分别比CK高16.7%、77.1%、113.3%和114.5%,2021和2022年T4处理籽粒产量分别为13901 kg/hm~2和11918kg/hm~2,均显著高于其它处理和对照。在东北黑土半湿润春玉米种植区,将满足玉米生长发育所需氮素按照底肥40%+拔节期追施10%+大喇叭口追施30%+灌浆期追施20%方式施用可提高玉米产量及氮素利用效率。

目的 系统评价伏诺拉生（VPZ）用于幽门螺杆菌（Hp）根除治疗的有效性和安全性，为临床治疗Hp感染提供参考。方法计算机检索The Cochrane Library、Embase、PubMed、中国知网、维普网和万方数据等，检索时限为建库起至2022年7月。收集VPZ根除治疗（试验组）且以质子泵抑制剂（PPI）作为对照（对照组）的随机对照试验，提取资料并采用Cochrane系统评价手册5.1.0推荐的偏倚风险评估工具进行质量评价，使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果 共纳入9项研究、合计2 134例患者。在意向治疗（ITT）分析和符合方案（PP）分析中，试验组患者的Hp总体根除率均较对照组显著升高，分别为87.5%vs. 76.2%[RR=1.14,95%CI(1.06,1.21),P<0.001]和92.4%vs. 80.5%[RR=1.11,9此网站5%CI(1.03,1.21),P<0.01]。在初始治疗亚组的ITT和PP分析中，试验组患者的Hp总体根除率均较对照组显著升高，分别为88.4%vs. 76.5%[RR=1.15,95%CI(1.09,1.22),P<0.000 01]和92.8%vs.80.9%[RR=1.12,95%CI(1.03,1.23),P<0.05]；在补救治疗亚组的ITT和PP分析中，两组患者的Hp总体根除率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。在三联疗法亚组ITT和PP分析中，试验组患者的Hp总体根除率均较对照组显著升高，Baricitinib分别为88.3%vs.75.6%[RR=1.16,95%CI(1.08,1.25),P<0.000 1]和92.6%vs. 77.6%[RR=1.15,9physical medicine5%CI(1.04,1.28),P<0.01]；在四联疗法亚组ITT和PP分析中，两组患者的Hp总体根除率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。试验组患者的总体不良事件发生率较对照组显著降低，分别为34.2%vs. 40.9%[RR=0.84,95%CI(0.70,0.99),P<0.05]；两组患者的严重不良事件发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 与PPI疗法比较，含VPZ的三联治疗方案效果更优，尤其对于初治患者而言；但在补救治疗及含铋剂四联方案中，VPZ无显著优势。含VPZ抗Hp治疗方案的安全性及耐受性良好，甚至优于PPI。

目前研究表明产生自由基NO的一氧化氮合酶(NOS)和产生超氧阴离子(O_2~-)的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)在脊椎动物与无脊椎动物免疫中发挥重要作用,但尚无中华绒螯蟹中有关于NOS与NOX基因结构及其作用机制的研究报道。本研究主要开展了NOS与NOX基因的全长克隆、原核表达获得其重组蛋白,并通过细菌侵染、体外细菌结合与siRNA干扰等实验探究NOS与NOX基因与蛋白在中华绒螯蟹抗菌免疫中的作用机制。结果如下:1.通过RACE技术克隆得到NOS与NOX基因的全长。NOS基因全长5900 bp,包括一个3627 bp的开放阅读框(ORF),编码1208个氨基酸,蛋白理论分子量为136.7 k Da,p I为7.079。NOX基因全长4504 bp,包括3891 bp的开放阅读框(ORF),编码1296个氨基酸,蛋白理论分子量为146.1 k Da,p I为7.18。NOS氨基酸主要含有四个保守结构域,分别为NO合酶结构域,黄素氧还蛋白1结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合域,以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)结合域。NOX氨基酸含有三个保守结构域,分别为Ferric-reduct结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合域,以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)结合域,除此之外还有5个EF-hand结构,以及一个跨膜结构域。BLASTp同源性分析发现,NOS与NOX在不同物种中有高保守性。系统发育分析表明,NOS/NOX与甲壳类动物的NOS/NOX聚集在一起Colforsin核磁,但在系统发育树中与其他CL13900价格无脊椎动物或脊椎动物的NOS/NOX分开。2.构建NOS-p ET-32a~+与NOX-p ET-32a~+重组质粒,并诱导与纯化NOS-HIS与NOX-HIS重组蛋白。进一步对NOS-HIS与NOX-HIS细菌免疫功能研究发现,将NOS-HIS和NOX-HIS分别与四种不同的细菌(包括两种革兰氏阳性菌和两种革兰氏阴性菌)进行体外孵育后,两种重组蛋白分别能以不同的结合能力与细菌结合。其中,NOS-HIS蛋白与枯草芽孢杆菌的结合能力最强,其次是金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌,与副溶血弧菌的结合能力最弱;而金黄色葡萄球菌与NOX-HIS蛋白的结合能力最强,其次是枯草芽孢杆菌,与副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的结合能力较弱。说明重组蛋白NOS-HIS和NOX-HIS是具有细菌结合能力的,而且其与革兰氏阳性菌的结合能力优于革兰氏阴性菌。3.嗜水气单胞菌刺激后检测血细胞中NOS与NOX基因的表达及血清中相关酶活性和含量的变化。嗜水气单胞菌刺激后中华绒螯蟹NOS的基因表达与酶活性变化都显著上调,其中NOS表达在3 h与6 h发生极显著上调(P<0.01),酶活性在6 h显著上调(P<0.05)。中华绒螯蟹NOX的基因表达与酶活性变化都显著下调,NOX表达在24 h发生极显著下调(P<0.01),NOX酶活性在12-48 h酶活性在12 h发生显著下调(P<0.05)。细菌刺激后血清NO、H_2O_2与O_2~-都出现开始显著下降再显著增加的变化趋势。说明机体在细菌侵染后引起NOS基因表达及酶活性的上调,以及引起NOX基因表达与酶活性的下调,使其发生一系列作用产生自由基分子(NO,O_2~-与H_2O_2),进而发挥抗菌免疫。4.Peroxinectin siRNA干扰后检测血细胞中NOS与NOX基因的表达。Peroxinectin siRNA干扰后,在嗜水气单胞菌刺激的第0 h(即Peroxinectin siRNA干扰的第48 h),中华绒螯蟹血细胞中NOS与NOX基因的表达也发生极显著下调(P<0.001)。随着嗜水气单胞菌侵染时间的增加,血细胞中NOS基因的表达也增加,24 h升至最高(P<0.05)Direct genetic effects。NOX基因的表达在12 h实验组(PXN siRNA+嗜水气单胞菌组)显著高于(P<0.05)阴性对照组(NC+嗜水气单胞菌组),在24 h实验组极显著高于(P<0.01)阴性对照组。这说明NOS与NOX基因发挥抗菌功能会受到上游Peroxinectin调控。综上所述,本研究表明中华绒螯蟹NOS与NOX在进化过程中相对保守,NOS-HIS与NOX-HIS重组蛋白能与不同的细菌以不同的结合能力进行结合。在机体受病原体刺激时,可以通过Peroxinectin形成的复合物调控,引起NOS与NOX基因表达变化,从而影响其酶活性变化,使其发生一系列作用产生自由基分子(NO,O_2~-与H_2O_2),进而发挥抗菌免疫。

非小细胞肺癌(NSCLC)中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的异常激活与远端转移、耐药、肿瘤免疫逃逸和低生存率密切相关。该研究报道了白桦酸(BA)是一种有效的mTOR信号通路抑制剂，在体外和体内对NSCLC细胞表现出有效的抗肿瘤活性。CCK-8和集落形成结果表明，BA可显著抑制H1299、A549和LLC细胞的活力和克隆生成能力。BA处理可诱导线粒体介导的H1299和LLC细胞凋亡；通过VX-765分子量下调MMP-2forensic medical examination的表达和损害上皮-间质转化，明显抑制H1299和LLC细胞的移动性和侵袭能力。研究结果表明，BA处理可抑PR-171生产商制mTOR信号通路，从而抑制M2表型（CD206阳性）巨噬细胞的某些方面。随后，为了评估白桦酸在LLC体内的抗肿瘤作用，利用LLC细胞建立小鼠异种移植肿瘤模型。结果表明，BA能显著延缓肿瘤的生长，抑制肿瘤细胞的增殖。更重要的是，给药BA后，肿瘤组织中M1/M2肿瘤相关巨噬细胞的比例显著升高，表明抗肿瘤免疫能力增强。综上所述，该研究结果表明，BA可通过mTOR信号通路使肿瘤相关巨噬细胞复极化，从而对NSCLC细胞具有抗肿瘤作用。