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目的:近年来,随着纳米科学技术的发展,涌现出多种新型纳米材料,如碳基纳米材料,层状纳米材料,有机小分子纳米材料等。这些纳米材料因具有尺寸可调节、力学性能独特、表面易于功能化等特点而受到研究者密切关注,被广泛应用于光催化、生物传感、药物递送和肿瘤诊疗等领域。其中,石墨相氮化碳量子点(C_3N_4QDs)具有尺寸小、稳定好和水溶性高等特性,在光学传感方面取得显著成效。硫-氧共掺杂的石墨相氮化碳量子点(S,O-C_3N_4QDs)因合成简单、活性位点丰富和可见光吸收能力强等特点,成为近些年来备受关注的荧光传感材料。金属有机框架(MOFs)因其比表面积大、灵活的可设计性和丰富的多样性等优势在生物医学方面有很大的应用潜力。铁基-金属有机框架(MIL-101(Fe))具有毒性低、多孔结构丰富、药物负载效率高和可生物降解等特性,在肿瘤治疗方面应用广泛。本文用S,O-C_3N_4QDs和镧系金属铕离子(Eu~(3+))共同构建比率荧光传感器,用于四环素(TC)的灵敏及可视化检测;以MIL-101为载体构建纳米Panobinostat IC50复合物,用于恶性肿瘤的联合治疗。方法:本文制备了硫-氧共掺杂氮化碳量子点(S,O-C_3N_4QDs)和叶酸修饰的铁基金属有机框架负载吲哚菁绿(ICG)纳米复合物(MIL-101@ICG@FA),采用透射电子显微镜(TEM)、X射线光电子能谱(XPS)、X射线衍射光谱(XRD)、傅里叶红外光谱(FT-IR)、荧光光谱(FL)、紫外吸收光谱(UV-Vis)等手段对S,O-C_3N_4QDs和MIL-101@ICG@FA的形貌结构、元素组成、表面官能团和光学性质进行表征。基于TC可有效猝灭S,O-C_3N_4QDs的荧光并增强Eu~(3+)的荧光,利用S,O-C_3N_4QDs、Eu~(3+)和柠檬酸钠(Cit Na)构建了比率荧光传感器用于检测TC;评估了纳米传感器的稳定性、选择性以及抗干扰能力;测定了S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na检测TC的线性范围和检出限;分别探讨了TC导致S,O-C_3N_4QDs荧光猝灭和Eu~(3+)荧光增强的机理,研究了Cit Na使Eu~(3+)荧光进一步增强的机制;采用MCF-7和L-02细胞研究了S,O-C_3N_4QDs的生物相容性;将S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na应用于湖水、自来水、血样和尿液中TC的检测,评估其在实际样品中的应用能力;TC可使S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na的颜色从蓝色变为红色,用S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na浸润滤纸,探究S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na用于TC的可视化和即时视觉检测的可行性;用智能手机App可将颜色转化为R/B值,评估S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na用于TC的便捷式半定量检测的能力。采用单线态氧(~1O_2)检测探针(DPBF)和羟基自由基(·OH)检测探针(TMB)测试了MIL-101@ICG@FA在体外生成活性氧(ROS)的能力;使用808 nm激光器和热电偶考察了MIL-101@ICG@FA在体外的升温情况和光热稳定性能;细胞实验中,以人乳腺癌细胞(MCF-7)为模型研究了其对MIL-101@ICG@FA的摄取情况,采用噻唑蓝法(MTT法)、活/死细胞染色法Recurrent urinary tract infection和流式细胞术评估了MIL-101@ICG@FA对肿瘤细胞的杀伤效果,用DCFH-DA探针研究了MIL-101@ICG@FA在细胞内产生ROS的情况;建立了MCF-7小鼠模型,探究了MIL-101@ICG@FA对荷瘤小鼠的治疗效果及体内生物安全性。结果:TEM、XPS、XRD、FT-IR等表征结果证实了S,O-C_3N_4QDs和MIL-101@ICG@FA成功制备。S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na作为一种比率荧光传感器,检测TC的线性范围为0.25～120μM,检出限为1.3 n M;稳定性实验说明S,O-C_3N_4QDs和S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na的荧光强度不易受到其他条件的影响;选择性和干扰性实验分别表明其他共存物质对S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na和S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na-TC的荧光强度无明显影响;将S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na用于湖水、自来水、尿样和血样中TC的检测,加标回收率在96.0～104.0%之间;不同浓度TC导致S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na溶液和S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na试纸的颜色由蓝色变为红色。体外DPBF探针检测结果表明MIL-101@ICG@FA在808 nm激光辐照下能够产生大量~1O_2;体外TMB探针检测结果表明在p H=5.5条件下有利于MIL-101@ICG@FA催化H_2O_2产生·OH;在808 nm激光辐照下,MIL-101@ICG@FA温度可升至61℃;用MIL-101@ICG@FA孵育MCF-7细胞和L-02细胞,MCF-7细胞呈现明亮的红色荧光,而L-02细胞仅具有微弱的荧光;用200μg/m L的MIL-101@ICG@FA孵育MCF-7细胞24 h,细胞的存活率低于20%;经AM/PI染色后,对照组均出现绿色荧光,MIL-101@ICG@FA出现大面积红色荧光;流式细胞术结果显示MIL-101@ICG@FA组的细胞凋亡率达到82.58%;采用DCFH-DA探针检测发现酸性条件下MIL-101@ICG@FA组呈现出较强的绿色荧光;用MIL-101@ICG@FA治疗荷瘤小鼠14 d后,MIL-101@ICG@FA组小鼠肿瘤体积和重量变化最大,治疗期间小鼠的体重没有发生明显的变化,H&E染色结果显示各组小鼠的各个器官组织形态均没有明显的改变,肿瘤组织发生明显的消融,小鼠血液指标和肝肾指标均在正常范围内。结论:本文成功构建了S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na荧光传感器和MIL-101@ICG@FA纳米复合物,成功用于TC荧光传感和肿瘤联合治疗。S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na可通过双荧光信号反向变化实现TC的比率荧光检测,实验结果表明S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na具有良好的稳定性,检测TC具有优异的选择性和抗干扰能力;检测范围为0.25～120μM,检出限为1.3 n M,说明S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na检测TC具有高灵敏度和宽的线性范围;在血液、尿液、自来水和湖水中检测TC也取得了满意的加标回收率,表明S,O-C_3N_4QDs-JQ1临床试验Eu~(3+)-Cit Na可用于实际样品中TC的检测;S,O-C_3N_4QDs-Eu~(3+)-Cit Na检测TC的机制为静态猝灭、内滤光效应和天线效应;基于试纸和智能手机App的检测方法实现了TC的可视化检测和实时半定量检测。在808nm激光辐照下,MIL-101@ICG@FA在体外具有良好的光热、光动力和化学动力效应。MCF-7细胞能有效摄取MIL-101@ICG@FA,具有良好的细胞成像能力;MIL-101@ICG@FA孵育MCF-7细胞后,在808 nm激光照射下可通过PDT/PTT/CDT联合作用引起细胞大量凋亡;MIL-101@ICG@FA能够有效的抑制小鼠肿瘤生长,具有良好的生物安全性。

研究背景:乙型病毒性肝炎是一种由乙型肝炎病毒感染引起肝实质病变的一种全身性传染病,全球慢性HBV感染人数已到达约2.96亿人。未经抗病毒治疗的患者可能更容易发展为肝硬化、肝癌,生活质量及生存时间均受到影响。目前对于ALT正常(即ALT≤ULN,以下内容均用“ALT≤ULN”进行描述)的人群何时启动抗病毒治疗以及启动治疗的ALT阈值仍存在争议,需进一步探讨。目的selleck IACS-010759:了解ALT≤ULN的慢性HBV感染者在不同肝纤维化分期的临床特征,探讨F2-F3期ALT≤ULN的慢性HBV感染者使用核苷(酸)类似物进行抗病毒治疗的临床疗效,为临床医生更好地进行抗病毒治疗决策提供参考。方法:选择2019年在清远市人民医院进行二维实时剪切波弹性成像检测肝脏硬度且ALT≤ULN的患者作为研究对象,收集其性别、年龄,以及2019年至2022年的肝功能、乙肝两对半定量、乙肝病毒DNA、LSM、肝脏超声及影像学检查报告等资料。对2D-SWE检测值提示处于F2-F3期的ALT≤ULN的慢性HBV感染者,按其抗病毒治疗意愿分为抗病毒治疗组和未抗病毒治疗组,观察其近3年各项临床指标的变化。结果:1.2D-SWbinding immunoglobulin protein (BiP)E的应用开展及基线情况:2019年我院2D-SWE总检测次数为2503人次,获得检测结果2405人次,检测成功率96.1%。进行2D-SWE检测的患者年龄跨度为5～85岁,各年龄段的分布比例显示以30～50岁的患者居多,其中(31～40岁)32.92%、(41～50岁)27.77%。2D-SWE检测值提示肝纤维化分级处于F0-F4期的ALT≤ULN的慢性HBV感染者有1343例,其在各纤维化分期中的构成比(备注:是以纤维化Canagliflozin浓度分期为小组的组内构成比,不是在整个总体中的构成比,故相加不等于100%,本研究后续的构成比也使用同种方法)分别为:F0-F1期87.2%、F2-F3期73.9%、F4期55.7%,随纤维化分期增加而呈递减趋势(?~2=129.885,P<0.001)。各期男性患者的组内构成比为F0-F1 57.9%、F2-F3 75.2%、F4 80.9%,随纤维化分期增加而呈递增趋势(?~2=53.336,P<0.001)。在年龄差异方面,大于30岁的患者占有较高的比例(?~2=24.120,P<0.001),组内构成比为F0-F1期87.5%,F2-F3期92.5%,F4期99.4%。ALT≤ULN的慢性HBV感染者中有HBe Ag阳性者200例(F0-F1期20.5%、F2-F3期4.9%、F4期13.4%),HBe Ag阴性者1143例(F0-F1期79.5%、F2-F3期95.1%、F4期86.6%),?~2=52.222,P<0.001。其中HBV DNA>20 IU/ml的患者在各期内的构成比是F0-F1期64.0%、F2-F3期56.9%、F4期59.9%,差异无统计学意义(?~2=5.820,P<0.001)。2.各纤维化分期ALT≤ULN患者的临床特征:本研究对HBVDNA>20 IU/ml、ALT≤ULN的F0-F3期患者(n=632),以男性30 U/L、女性19 U/L为ALT阈值分组,结果发现男性和女性的ALT正常高值组均较组ALT正常低值组具有更高的LSM和HBV DNA(P<0.001)。本次研究对上述人群中的572例HBe Ag阴性患者,以20 U/L为界值分组得到相似的研究结果,ALT>20 U/L组较ALT≤20 U/L组具有更高的LSM、HBV DNA和男性患者比例(均为P<0.001)。本次研究纳入观察了91例F0-F1期ALT≤ULN且连续3年未启动抗病毒治疗的患者,结果显示第3年的ALT、LSM较基线水平无显著性变化(P>0.05),第3年的HBV DNA较基线水平下降(P<0.001),2019年和2022年HBV DNA(log10IU/ml)的中位数分别为3.5和3.2;观察周期内无患者发生肝硬化及肝癌。3.F2-F3期ALT≤ULN的慢性HBV感染者的队列研究:(本次研究抗病毒治疗组患者口服ETV或TDF 1片,每天1次)(1)在ALT变化方面,抗病毒治疗组在第1、2、3年均表现为ALT下降,与基线ALT水平比较,差异具有统计学意义,P<0.001。未抗病毒治疗组在第1、2、3年表现为较基线ALT水平的差异无统计学意义,P>0.05。(2)在HBV DNA变化方面,抗病毒治疗组和未抗病毒治疗组HBV DNA(log10IU/ml)的基线中位数水平分别是5.1和4.1,P=0.110。以20 IU/ml为HBV DNA检测下限,抗病毒治疗组2020年、2021年、2022年的病毒学应答率分别是75%、82%、87.5%。(3)在LSM(k Pa)变化方面,观察周期为1年时,抗病毒治疗组的LSM前后变化是(8.17±1.66)VS(7.42±1.67),t=4.223,P<0.001,LSM下降幅度为9.2%。未抗病毒治疗组的LSM前后变化是(7.71±1.51)VS(7.04±1.61),t=4.034,P<0.001,LSM降幅为8.6%。观察周期为2年时,抗病毒治疗组的LSM前后变化为(8.53±1.65)VS(7.19±1.54),t=6.259,P<0.001,LSM降幅为15.7%。未抗病毒治疗组的LSM前后变化为(7.85±1.25)VS(6.73±1.59),t=5.027,P<0.001,LSM降幅为14.3%。观察周期为3年时,抗病毒治疗组的LSM前后变化分别(8.89±1.20)VS(7.02±1.21),t=7.451,P<0.001,LSM降幅为21.0%。未抗病毒治疗组的LSM前后变化为(8.29±0.91)VS(7.22±1.66),t=3.828,P<0.001;LSM降幅为12.9%。整体来看,两组均表现出LSM下降,抗病毒治疗组降幅逐年增大,未抗病毒治疗组则呈现波动。进一步分析发现,到第3年时抗病毒治疗组有70%(28/40)的患者LSM由F2-F3期下降到F0-F1期,未抗病毒治疗组则有54.5%(18/33),但差异无统计学意义(?~2=1.853,P=0.173)。(4)在观察终点(2022年)的结局差异上,抗病毒治疗组有4例(6.6%)患者发生肝硬化改变,未抗病毒治疗组为3例,?~2=0.972,P=0.324,差异无统计学意义;两组均无患者发生肝癌,且抗病毒治疗组未出现抗病毒药物相关的严重不良反应。结论:1.随着肝纤维化程度由F0至F4增高,ALT≤ULN的慢性HBV感染者比例呈递减趋势,而男性患者比例呈递增趋势;2.在ALT≤ULN且HBe Ag阴性的慢性HBV感染者中,ALT>20 U/L的患者具有更高的LSM、HBV DNA和男性比例,是潜在的抗病毒适应症人群,应给予更多的关注和长期管理。3.ALT≤ULN的慢性HBV感染者进行抗病毒治疗可以出现ALT水平下降和病毒抑制。

水稻作为全球三大主要粮食作物之一,是全球一半以上人口的主粮。杂交育种为水稻的产量做出了重要的贡献,水稻雄性不育的研究为我国杂交水稻的发展奠定了基础。其中以光温敏不育系为主的两系杂交水稻的种植面积已达到杂交水稻总种植面积的一半。与三系法相比,两系杂交水稻具有不受恢复系和保持系的限制,配组相对自由等优点,更有利于杂交优势的利Dolutegravir用。光温敏雄性不育系作为两系杂交水稻的核心具有重要的研究价值。但目前生产中水稻两系杂交育种所用的遗传位点相对单一,而且温度与光照作为不可控因素,使得现有的两系不育系在极端气候条件下不育性的不稳定性极大地限制了其在生产中的应用,因此发掘新型的光温敏核不育遗传资源具有重要的生物学意义。在课题组的前期工作中,解析了拟南芥光温敏雄性不育及育性恢复机制。本文通过school medical checkupEMS诱变粳稻中花11(ZH11)获得一个新的温敏雄性不育系ostms18-1。在2021年上海地区偶发的夏季低温潮的影响下,ostms18-1与同样为中花11背景的tms5不育系相比,其高温不育性状显著好于tms5。将该位点引入不同背景的水稻品种后仍表现为雄性不育。因此该遗传位点在两系杂交水稻育种中具有较好的应用潜力。集群分离分析(BSA,Bulked segregant analysis)高通量测序表明ostms18-1中葡萄糖-甲醇-胆碱(GMC)氧化还原酶(LOC＿Os10g38050)基因第二个外显子存在一个甘氨酸Gly到丝氨酸Ser的突变。互补实验证明ostms18-1的温敏表型确由该基因的突变所导致。细胞学分析表明,ostms18-1突变体在高温下花粉外壁第二层的结构发生异常,导致花粉破裂,但低温下外壁第二层的结构虽然变薄但较为完整。基于以上结果可推测,在低温环境下,有缺陷的花粉壁足以保护小孢子发育成为成熟的花粉粒,从而恢复育性。通过序列分析和表达分析获得了OsTMS18在拟南芥中的直系同源基因At TMS18。基因敲除突变体attms18在正常条件下(24℃)可育,但在高温条件下(28℃)可育性显著降低,同样表现为温敏性RepSox半抑制浓度状。电泳迁移率实验(EMSA)和体外原生质体转化实验结果表明,OsTMS18以及At TMS18基因在水稻和拟南芥中受花粉壁形成关键调控因子Os MS188和MS188的直接调控,进一步表明该基因的水稻和拟南芥温敏表型都与花粉壁直接相关。这些研究结果揭示了不同植物存在共同的光温敏雄性不育细胞学机制。

目的 以网络药理学方法分析蓝莲清瘟败毒饮方药(蓝莲方药)抗人类免疫缺陷病毒(HIV)的分子机制，并通过体外实验验证其抗病毒活性，为抗HIV的基础研究和新药研发提供参考。方法 采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取蓝莲方药各中药组分的化学成分及其靶点，进行药物动力学(ADME)筛选后将活性靶点导入Uniprot进行规范化；利用GeneCards、OMIM、TTD以及MK-1775体内实验剂量DrugBank数据库筛选HIV相关基因；将蓝莲方药调控HIV的关键基因输入Metascape平台分析其参与的主要生物学过程和信号通路；利用STRING平台以及Cytoscape 3.8.0软件构建蓝莲方药调控HIV的“成分-靶点-通路网络图”以及蛋白互作网络(PPISmoothened Agonist使用方法);选取主要成分与核心靶点通过AutoDock Vina 1.2.3软件进行分子对接验证；通过体外实验测定蓝莲方药对TZM-bl的细胞毒性，同时检测蓝莲方药抑制HIV假病毒感染细胞的活性；利用实时荧光定量PCR技术检测主要通路信号分子mRNA的表达水平。结果 蓝莲方药抗HIV病毒的主要活性成分为槲皮素、木犀草素、山柰酚、黄芩素等，核心靶点有AKT1、TNF和CASP3等，关键生物学通路为PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路和IL-17信号通路。分子对接结果显示主要成分与核心靶点具有良好immunogenic cancer cell phenotype的结合活性。细胞实验得出蓝莲方药和对照组唐草片的CC_(50)分别为3.16、2.01 mg·mL~(-1);对HIV病毒的IC_(50)分别为17.10μg·mL~(-1),94.42μg·mL~(-1);蓝莲方药与唐草片相比具有更好的抗HIV作用(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示蓝莲方药能够显著提高IL-17的mRNA表达水平。结论 蓝莲方药可抑制HIV在TZM-bl细胞内的增殖，其中发挥主要作用的机制可能是对IL-17信号通路的调控。

脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是一种具有高发病率和死亡率的破坏性脑部疾病。全球范围内,脑出血患者人数接近两千万人,占所有脑卒中患者的10-15%,波及范围巨大,年死亡率超过50%。近年来,发病人群呈现年轻化趋势。脑出血后的继发性脑损伤,会引起患者神经功能障碍,进而导致患者生活无法自理,加重患者家庭和社会负担。因此,有必要对脑出血及其继发性脑损伤展开深入的研究探索,为临床脑出血的治疗提供新的思路。脑出血发生后,血细胞进入脑实质,被分解成为铁离子、血红素和凝血酶等可诱发自由基产生的物质,导致神经损伤;这些Canagliflozin临床试验分解产物还能诱发炎症,募集免疫细胞清除血块或加剧炎症反应,进一步造成脑损伤。氧化应激在脑出血后的继发性脑损伤中起重要作用,这主要由于氧化应激在脑出血病理过程及其病理生理反应阶段皆发挥一定的作用。免疫细胞(巨噬细胞、中性粒细胞等)参与脑出血后的炎症反应,其中,巨噬细胞是在脑出血发生后,首先被募集的细胞之一。巨噬细胞通过不同的极化倾向,发挥促炎或者抑炎的作用。ITGB1(integrinbeta 1)是整合素家族的一员,在脑组织中具有广泛的表达。脑出血后,ITGB1会在脑组织中被高度表达,并在神经元凋亡、血管损伤、神经炎症反应和脑水肿发生中发挥重要作用;除此之外,ITGBI还与血脑屏障的破坏有关。另外,ITGB1对于调节血管的形成和稳定性、细胞粘附等方面发挥着关键作用。ITGB1对包括巨噬细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞具有重要的调控作用,并通过与其他蛋白结合来参与炎症反应、氧化应激、细胞凋亡等生理过程。在内皮细胞中,ITGB1作为细胞外基质和细胞内信号转导中的重要组分发挥着重要作用,并可对内皮细胞的粘附和生长等生物学功能发挥调控作用。阿托伐他汀是一种适用于心脑血管疾病(如冠心病)的他汀类药物,许多研究证明它能够抑制氧化应激、保护心血管功能、抑制炎症等。然而,在脑出血的治疗中,阿托伐他汀的作用是否确切仍存在争议。因此,本研究旨在通过体内、体外实验,证实阿托伐他汀在脑出血中的治疗作用,并阐明其可能的治疗机制:通过调控ITGB1抑制脑出血后内皮细胞凋亡、炎症反应、氧化应激及屏障功能损伤。本研究内容验证了阿托伐他汀在脑出血中的治疗价值,完善了脑出血后脑损伤及他汀干预有效的分子机制,为进一步可能的药物靶点的开发提供了基础和线索。第一部分:脑出血后动物ITGB1的表达特征、氧化应激、炎症反应水平的研究1)研究目的:本实验旨在探究大鼠脑出血后24h和72h的脑组织中炎性反应、氧化应激、血脑屏障功能及ITGB1表达水平的特征。2)研究方法:采用胶原酶VII法,建立SD大鼠脑出血模型,并在24 h和72 h时,收集脑组织和血清样本,采用H&E染色对脑组织病理情况进行观察,采用TUNEL染色对脑组织凋亡情况进行观察;采用伊文思蓝渗透法,并结合qRT-PCR方法检测MMP2、MMP9及Occludin和Claudin-5表达水平,评估动物血脑屏障功能;ELISA方法检测动物血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平,采用qRT-PCR和Western blot方法检测脑组织中ITGB1表达水平;根据试剂盒方法检测脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和 8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)水平;3)研究结果:随着时间的推移,在脑出血模型组中,神经元损伤逐渐加剧,72h时达到最高水平,同时凋亡水平也随之增加。72h时,伊文思蓝渗透水平达到最高值,并伴随着Occludin、Claudin-5的表达水平下调和MMP2、MMP9的表达水平上调。在模型组中,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平明显上调,尤以72h时表现最为明显。SOD水平在模型组中呈现下调趋势,同时伴随ITGB1表达的上调,MDA和8-OHdG水Nirogacestat体外平也呈现出上调趋势。4)小结:胶原酶VII成功诱导大鼠脑出血模型,该脑出血动物模型随时间推移,表现出氧化应激加剧、炎性因子增加、血脑屏障功能受损,并伴随着逐渐升高的ITGB1表达。因此,ITGB1的上调可能与脑出血后的继发性损伤存在相关性。第二部分:阿托伐他汀通过ITGB1干预脑微血管内皮细胞参与下的脑出血继发性脑损伤1)研究目的:本部分实验旨在研究阿托伐他汀是否通过调节ITGB1的表达来进一步影响脑微血管内皮细胞的屏障功能、凋亡程度、炎症反应和氧化应激。2)研究方法:a.通过培养脑微血管内皮细胞,并采用血红素(hemin)处理细胞,诱导脑出血体外模型。在使用阿托伐他汀处理后,检测内皮细胞中ITGB1的表达水平。随后,将内皮细胞与巨噬细胞共培养,并对内皮细胞的屏障功能、凋亡水平、炎症反应及氧化应激进行检测。b.设计并合成针对ITGB1的siRNA,并利用qRT-PCR和Western blot方法对siRNA的干扰效率进行检测。c.在基于Hemin诱导的脑出血体外模型中,使用siRNA对ITGB1进行表达干扰。之后将内皮细胞与巨噬细胞进行共培养,对内皮细胞的屏障功能、凋亡水平、炎性反应及氧化应激进行检测。d.在脑出血体外模型中,经过阿托伐他汀处理后,进行ITGB1过表达处理。然后将内皮细胞与巨噬细胞共培养,进一步分析内皮细胞的屏障功能、凋亡水平、炎性反应及氧化应激。3)研究结果:a.在经过血红素处理的内皮细胞中,ITGB1的表达显著升高;与此同时,在与巨噬细胞共培养之后,内皮细胞的屏障功能明显受损,伴随着炎症反应和氧化应激的加剧以及凋亡水平的提高。然而,在使用阿托伐他汀进行处理之后,内皮细胞的屏障功能改善,且炎症反应和氧化应激以及凋亡水平都得到了缓解,并且ITGB1的表达水平受到了抑制。b.在实验中,siRNA#2表现出最高的敲除效率。c.在血红素诱导的脑出血体外模型中,ITGB1 siRNA可以显著地抑制ITGB1的表达水平,同时能够逆转模型组细胞中内皮细胞屏障功能的损伤、过度的炎症反应和氧化应激,以及凋qPCR Assays亡水平的上升。d.在血红素诱导的模型组细胞中,ITGB1的过表达能够显著逆转阿托伐他汀对内皮细胞屏障功能的保护作用,并再次上调了内皮细胞的炎症反应、氧化应激和凋亡水平。4)小结:a.经血红素处理后,脑微血管内皮细胞产生在巨噬细胞参与下的细胞屏障功能受损,并伴随氧化应激、炎症反应和凋亡水平加剧;b.对内皮细胞中ITGB1进行敲降后,可对巨噬细胞参与下的内皮细胞屏障功能损伤、氧化应激和炎症反应过激、凋亡水平上调发挥抑制作用;c.阿托伐他汀主要通过调控ITGB1表达发挥对内皮细胞的保护作用。第三部分:阿托伐他汀通过调控ITGB1对脑出血血脑屏障损伤的保护机制1)研究目的:体内实验证实,阿托伐他汀通过调节ITGB1可以抑制脑组织内血脑屏障功能的损伤,并降低组织内氧化应激、凋亡水平和炎症反应。2)研究方法:采用胶原酶VII诱导大鼠动物模型,使用阿托伐他汀作为治疗药物,并利用腺相关病毒对动物脑组织ITGB1进行过表达;检测各组动物脑组织血脑屏障功能(伊文思蓝渗透情况、MMP2、MMP9、Occludin和Claudin-5表达水平)、炎症反应水平(IL-1β、IL-6和TNF-α)、氧化应激水平(SOD、MDA和8-OHdG)、凋亡水平;并采用免疫组化方法,检测动物脑组织中巨噬细胞(IBA1)、M1型巨噬细胞(CD86)、M2型巨噬细胞(CD163)的分布情况。3)研究结果:a.在模型组中,阿托伐他汀具有抑制ITGB1表达,下调脑组织氧化应激、炎症反应、血脑屏障损伤及细胞凋亡的作用,且对M1型、M2型巨噬细胞极化分别表现出抑制、促进作用;b.ITGB1过表达逆转了阿托伐他汀对氧化应激、炎症反应、血脑屏障损伤及细胞凋亡的抑制作用,并对M1型、M2型巨噬细胞极化分别表现出促进、抑制作用。4)小结:在脑出血动物模型中,阿托伐他汀具有通过调控ITGB1表达,抑制氧化应激、炎症反应、血脑屏障损伤和细胞凋亡的作用,并对M1型、M2型巨噬细胞极化分别表现出抑制、促进作用。结论:阿托伐他汀在脑出血模型中可通过调控ITGB1表达,抑制脑出血后组织中的氧化应激和炎症反应引发的继发性脑损伤,起到脑保护作用。

目的 探讨卡贝缩宫素联合传统缩宫素预防高危妊娠剖宫产产后出血及对产妇血浆纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D-D）、凝血酶时间（TT）、部分凝血活酶时间（APTT）的selleck合成影更多响，为临床治疗提供参考依据。方法 依据随机数字表法将昆山市中医医院2020年7月至2022年3月收治的行剖宫产的高危妊娠孕妇80例分为PPAR gamma hepatic stellate cell对照组（40例，胎儿娩出后进行宫体注射缩宫素）与观察组（40例，在对照组基础上静脉滴注卡贝缩宫素），静脉滴注至产后2 h，术后观察48 h。比较两组产妇术中及术后2、24 h出血量，产后24 h出血率，术前与术后24 h心率、血压，术前与术后48 h血红蛋白、血浆FIB、D-D、TT、APTT水平，以及子宫收缩良好率、治疗期间不良反应发生情况。结果 与对照组比，术中及术后2、24 h观察组产妇出血量均显著降低；产后24 h出血率显著低于对照组；术后48 h两组产妇血红蛋白水平均显著低于术前，而血浆FIB、D-D水平均显著高于术前，观察组产妇血红蛋白、血浆FIB、D-D水平显著高于对照组，TT、APTT均显著短于术前，观察组显著短于对照组；两组产妇子宫收缩良好率比较，观察组显著高于对照组（均P <0.05）。但两组产妇术前、术后24 h组内及组间心率、收缩压、舒张压及两组产妇治疗期间恶心、头痛、面部潮红、心动过速总发生率经比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 在传统缩宫素的基础上加用卡贝缩宫素可降低行剖宫产的高危妊娠产妇的出血量与出血率，增加子宫收缩频率，改善凝血功能，不会增加产妇心血管系统负荷，安全性良好。

白僵菌素(beauvericin,BEA)是一种新兴的真菌毒素,是由镰刀菌、球孢白僵菌等产毒真菌产生的次级代谢产物,广泛存在于各种大麦、小麦、大米、玉米和谷物制品中。有研究报道BEA具有强烈的肝毒性,肝脏是机体重要的代谢调控和解毒中心,因此有必要深入研究BEA肝毒性的具https://www.selleck.cn/products/ag-221-enasidenib.html体作用机制。活性氧(ROS)介导的氧化应激参与了 BEA诱导的细胞毒性,核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)是维持氧化还原稳态的重要核转录因子。研究显示氧化应激产生的ROS以及Nrf2信号通路均能影响自噬的发生。ROS-Nrf2信号通路介导的细胞自噬是否参与BEA诱导的肝细胞毒性损伤有待研究。本试验以BRL3A细胞(大鼠肝细胞系)为研究对象,探究了 BEA对细胞氧化应激、Nrf2信号通路的影响,以及ROS-Nrf2与自噬信号之间的关系在BEA诱导的肝细胞毒性损伤中的作用。1 BEA致BRL3A细胞氧化损伤为探究BEA对大鼠肝细胞毒性损伤的影响,本试验将不同浓度BEA(0、0.5、1、1.5、2、3和4μmol/L)作用于BRL3A细胞12 h,通过CCK-8法和LDH释放法检测细胞活率;倒置显微镜观察细胞形态变化以及透射电镜观察细胞超微结构改变;荧光显微镜和流式细胞术测量细胞内ROS和超氧化物阴离子水平,试剂盒检测氧化损伤相关指标。结果显示,随着BEA剂量增加,细胞活率下降,LDH释放增多,细胞呈现皱缩状态,最终选用0、1、1.5和2μmol/LBEA作用于BRL3A细胞12 h。透射电镜图像显示,BEA破坏细胞核和线粒体结构。此外,BEA显著升高细胞内ROS和MDA含量(P<0.05),超氧化物阴离子水平也升高;BEA剂量依赖性增高GSH-Px活性,而CAT、T-SOD活性和GSH含量呈现先上升后下降趋势。结果表明,BEA诱导细胞氧化应激,发生氧化性损伤,降低细胞活力。2 BEA致BRL3A细胞自噬为探究细胞自噬是否参与BEA诱导的BRL3A细胞毒性损伤,首先将不同浓度BEA(0、1、1.5和2μmol/L)作用于BRL3A细胞12h,采用qRT-PCR检测自噬相关基因转录;Western blot检测自噬相关蛋白表达;免疫荧光检测LC3聚点;透射电镜观察自噬小体生成;BEA分别联合自噬抑制剂CQ、促进剂RAPA以及ROS清除剂NAC探究其对细胞自噬的作用。结果显示,BEA显著激活自噬相关基因Beclin1、SQSTM1的转录(P<0.05);自噬标记蛋白Beclin1、LC3 Ⅱ/Ⅰ、ATG5的表达均显著升高(P<0.05);LC3呈点状聚集分布在细胞核周围;BEA促进自噬小体生成增多。BEA分别联合CQ和RAPA,与BEA单独组相比,BEA+CQ处理组LC3 Ⅱ/Ⅰ、ATG5和p62的表达水平显著下降(P<0.05),细胞活率上升;BEA与RAPA共处理组LC3 Ⅱ/Ⅰ、p62和Beclin1蛋白的表达量明显升高(P<0.05),细胞活率降低,提示CQ和RAPA分别抑制或促进BEA诱导的细胞自噬。与单独BEA组相比,NAC与BESerratia symbioticaA共孵育后有效降低细胞内ROS水平,在此基础上检测NAC对细胞自噬的影响,发现与BEA组相比,加入NAC后显著抑制自噬相关蛋白的表达(P<0.05),LC3聚点数量也减少,呈弥散分布。以上结果表明,BEA诱导BRL3A细胞自噬发生,且这一过程是由ROS介导的。3 ROS-Nrf2通路在BEA致BRL3A细胞自噬中的作用为阐明ROS介导的氧化应激、Nrf2信号通路和自噬之间的关系在BEA诱导的肝细胞毒性损伤中的作用,首先探究了 BEA对BRL3A细胞Nrf2信号通路的影响,将不同浓度BEA(0、1、1.5和2μmol/L)处理细胞12 h,Western blot检测Nrf2信号通路相关蛋白表达变化,qRT-PCR检测Nrf2下游抗氧化基因的转录水平,免疫荧光监测Nrf2核转位,再联合NAC检测ROS在BEA诱导Nrf2信号通路变化中的作用;其次,BEA联合Nrf2抑制剂ML385和激活剂CDDO探究Nrf2信号通路对细胞自噬的影响。结果显示,不同浓度BEA显著降低Keap1表达量(P<0.05),促进NQO1和HO-1蛋白表达,细胞核内Nrf2蛋白表达升高,Nrf2入核明显。BEA联合NAC处理细胞,与单独BEA组相比,NAC显著抑制NQO1和核蛋白Nrf2的表达(P<0.05),HO-1表达也下降,Nrf2入核减少。上述结果表明BEA通过ROS介导激活Nrf2信号通路。BEA与ML385联合处理寻找更多后,与单独BEA组相比,细胞活力显著升高(P<0.05),减弱了 BEA对Nrf2信号通路的活化效应,降低自噬水平;然而,BEA联合CDDO处理后呈现相反趋势,表明BEA诱导的自噬激活是由Nrf2介导的。以上结果表明,ROS介导的Nrf2信号通路正向调节BEA诱导的细胞自噬,BEA通过ROS-Nrf2-自噬轴参与诱导肝细胞毒性损伤。结论:BEA诱导大鼠肝细胞氧化应激,引起氧化性损伤,ROS介导的氧化应激在BEA激活的细胞防御反应中起作用。BEA激活细胞Nrf2信号通路和自噬,且自噬激活是由ROS-Nrf2通路介导的,二者的激活进一步加剧BEA诱导的肝细胞毒性损伤。

目的:探讨宫颈上皮内瘤变患者血清鳞状细胞癌抗原(SCC)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、趋化素(Chemrin)的变化及其诊断学价值。方法:选取我院2019年4月至2022年4月经病理学检查确诊的101例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组、同期经病理学检查证实为早期宫颈癌患者50例作为宫颈癌组，对比两组患者实施治疗之前的血清SCC、M-CSF、Chemerin测定值，并根据CIN分期、高危人乳头状瘤病毒(HR-HPV)病毒载量检查结果进行分层对比分析，并对比CIN患者在手术前、手术后3个月血清SCC、M-CSF、Chemerin水平；采用受试者工作特征曲线(ROC)分析SCC、M-CSF、Chemerin在鉴别诊断CIN及早期宫颈癌中的应用价值。结果:宫颈癌组患者的血清SCC、M-CSF、Chemerin测定值高于CIN组患者，差异具有统计学意义(P<0.05);SCC、M-CSF、Chemerin鉴别诊断CIN患者的ROC曲线下面积分别为0.906、0.846、0.791;101例CIN患者中有Ⅰ期患者21例、Ⅱ期患者46例、Ⅲ期患者34例，随着CIN分期的增高，患者的SCC、M-CSF、Chemerin水平逐渐增高，各组之间差异具有统计学意义(P<0.05);HRwww.selleck.cn/products/dorsomorphin-2hcl-HPV DNA阳性CIlocal immunotherapyN患者的SCC、M-CSF测定值高于阴性组患者，各组之间差异具有统计学意义(P<0.05);在手术后3个月，CIN患者的SCC、M-CSF、Chemerin测定值均呈的降LY294002小鼠低趋势，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:与宫颈癌患者相比，CIN患者的SCC、M-CSF、Chemerin测定值更低，但是随着CIN分级增高、HR-HPV DNA阳性表达患者的SCC、M-CSF、Chemerin水平更高，检查SCC、M-CSF、Chemerin水平能鉴别诊断CIN与宫颈癌。

三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen,是我国传统的名贵中草药之一,已有600多年的使用历史,具有散瘀止血、消肿定痛、益气活血的功效,目前常用于防治心脑血管类疾病。皂苷是三七的主要活性成分,也是用于临床使用的三七相关制剂的主要成分。现代药理研究表明,三七皂苷类成分具有抗血栓、扩张血管、抗炎、抗衰老、抗肿瘤及抗氧化等药效活性。如何对其进行高效、安全的提取一直是该领域研究的热点。目前,提取此类成分的方法仍然主要采用传统的加热回流、水煎醇沉、渗漉等方法,并且主要使用乙醇、水作为提取溶剂。然而,这些溶剂存在一些缺陷,如乙醇易燃、低浓度的醇在提取时容易产生糊化现象,水的提取效率相对较低等。因此,若能找到一种新型、绿色、有效的溶剂对三七皂苷类成分进行提取,不仅对优化三七提取工艺具有重要价值,也为未来三七及其他含皂苷类成分中药的开发应用提供重要的借鉴和思路。天然低共熔溶剂(nature deep eutectic solvents,NADES),指由一定化学计量比的氢键受体(如季铵盐、两性离子等)和氢键供体(如羧酸,多元醇、糖等)组合而成的两组分或三组分低共熔混合物,在室温条件为均一稳定的液体。NADES因其原料都为天然产物,价格低,可回收,是一种新型环境友好型溶剂,符合绿色化学的理念。此外,NADES还具有良好的生物相容性,具有生物降解性、可接受的生物毒性和可持续性等优势。近年来,NADES在药用植物活性成分的提取及分离纯化领域备受关注。由于某些NADES与目标活性成分之间能形成较多的氢键相互作用力,因此NADES常表现出优于传统溶剂的提取能力。因此,本研究拟将NADES应用于三七皂苷类成分提取工艺的优化过程中,并对NADES的细胞毒性及三七皂苷类成分NADES提取液的相关生物活性进行考察,主要研究结果如下:1.NADES初筛:首先通过文献检索,筛选出了24种适用于皂苷类成分extramedullary disease提取的NADES组分及配比。之后通过制备共获取了14种在室温下为均一稳定液体的NADES溶剂。2.NADES种类、组分配比、含水量的确定:通过测定三七皂苷类成分在上述NADES溶剂中的溶解度,并考察NADES组分配比、含水量对三七皂苷类成分提取率的影响,以三七皂苷类成分的溶解度及提取率作为工艺的评价指标,确定了含水为45%(v/v)的1:2的氯化胆碱/尿素为适用于三七皂苷类成分提取的NADES溶剂。3.超声辅助NADES提取三七皂苷类成分及提取工艺的优化:以三七皂苷类成分的提取率为指标,采用超声辅助NADES提取三七中皂苷类成分,并结合单因素和响应面实验设计优化出最佳提取工艺条件,即在提取温度为47℃、提取时间为36 min、液固比为40 m L/g条件下,可实现三七皂苷类成分提取率为71.97 mg/g,与70%(v/v)甲醇的提取效果(70.89 mg/g)相当,优于水(65.60mg/g)的提取效果。4.NADES可回收性的初步考察:采用HPD101型大孔吸附树脂对三七皂苷类成分NADES提取液中的皂苷类成分进行初步的回收,皂苷类成分的回收率达84.57%,并且NADES体积回收率为75.76%。随后,根据优化的提取方法,回收的NADES对三七皂苷类成分的二次提取率为70.22 mg/g,与第一次提取(71.97mg/m L)效果相当。5.NADES的细胞毒性研究:使用噻唑蓝比色法和苏木素-伊红染色法考察了NADES对RAW264.7、HEK293及A549细胞的细胞毒性。与已发表的相关ILs的细胞毒性的研究结果相比,NADES具有相对较大的IC_(50)值,即表现出相对较小的细胞毒性。6.三七皂苷类成分NADES提取液的生物活性研究:(1)三七皂苷类成分NADECP-456773临床试验S提取液的抗炎活性研究表明,三七皂苷类成分NADES提取液对肿瘤坏死因子α和白介素1βm RNA表达的抑制作用优于水提液,且呈剂量依赖关系。(2)三七皂苷类成分NADES提取液的抗氧化活性研究表明,相比于水提液,三七皂苷类成分NADES提取液具有较强的OH自由基和ABTS自由基清除能力。(3)三七皂苷类成点击此处分NADES提取液的抗凝血活性研究表明,在考察的生药浓度范围内(1.5625-25 mg/m L),与空白组(生理盐水)相比,仅浓度为25 mg/m L的三七皂苷类成分NADES提取液能显著延长活化部分凝血酶时间(P<0.05);12.5和25 mg/m L的三七皂苷类成分NADES提取液能显著延长凝血酶原时间(P<0.05),其他剂量组无统计学意义,说明一定浓度的三七皂苷类成分NADES提取液具有较强的抗凝血活性。综上所述,通过对超声辅助NADES提取三七皂苷类成分工艺条件的优化,表明NADES可作为传统有机溶剂的有效的、绿色的和可持续的替代品,用于从三七中提取皂苷类活性成分。此外,NADES不仅具有相对较小的细胞毒性,而且其三七皂苷类成分NADES提取液整体上表现出较强的抗炎、抗氧化和抗凝血活性。这为今后NADES在中药制药领域中应用与创新发展提供了思路和有价值的参考。

Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)是宿主细胞响应病原体感染时合成和释放的一种细胞因子,它能诱导干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)表达从而抑制病毒复制。抗病毒固有免疫在宿主抵御病毒感染中发挥重要作用,主要通过模式识别受体(Pattern recognition receptors,PR寻找更多Rs)识别病毒来源的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),激活下游信号级联反应,启动IFN-Ⅰ免疫应答从而阻止病毒的入侵。然而,过度炎症激活会造成细胞因子风暴,导致机体损伤。因此,抗病毒天然免疫信号通路受到严格调控,泛素化修饰在其中扮演重要角色。TRIM蛋白家族作为E3泛素连接酶家族,能够以不同类型的连接方式对靶蛋白进行多聚泛素化修饰。鱼类TRIM家族既包括与哺乳动物同源的TRIM,也包括鱼类特有的TRIM(Fish novel tripartite motif,FTR)。目前,FTR在抗病毒天然免疫调控中的作用机制研究相对匮乏。本论文从鲤鱼中鉴定得到了一种鱼类特有的fin TRIM85(命名为CcFTR85),并对其调控IFN-Ⅰ表达的分子机制进行深入探究。我们从鲤鱼中克隆得到了CcFTR85基因的ORF(Open reading frame,ORF)区,其全长为1422 bp,编码474个氨基酸,预测蛋白分子量为54.2 k Da。系统进化分析显示,CcFTR85与FTR家族成员聚为一支,且与红鳍鲫(Carassius gibelio)FTR85的亲缘关系最近。首先,我们对CcFTR85在SVCV(Spring viremia of carp virus,SVCV)病毒感染和病毒类似物poly(I:C)、poly(d A:d T)selleck NMR刺激后的表达模式进行分析。q RT-PCR结果表明,SVCV刺激后CcFTR85在鲤鱼各免疫组织中的表达均上调;在外周血白细胞中,poly(I:C)和SVCV刺激后,CcFTR85的表达显著上调,而poly(d A:d T)刺激后,其表达没有显著性变化。表明CcFTR85参与RNA病毒感染免疫应答。病毒蚀斑实验和q RT-PCR表明,EPC细胞中过表达CcFTR85显著增强SVCV病毒复制。随后,我们对CcFTR85参与病毒感染促进病毒复制的机制进行了探讨。q RT-PCR及荧光素酶报告基因实验结果显示,CcFTR85可显著抑制poly(I:C)诱导的IFN-Ⅰ及其干扰素刺激基因(ISG15、PKR、Viperin)的表达,且呈现剂量依赖性。q RT-PCR与荧光素酶报告基因实验进一步表明,CcFTR85可以抑制RIG1、MDA5、c GAS、STING、TBK1、MAVS、IRF3及IRF7介导的IFN-Ⅰ、ISG15、PKR和Viperin的表达。为了确定CcFTR85的靶蛋白,我们进行了免疫共沉淀实验。结果显示,CcFTR85只与IRF3相互作用,而不与RIG1、MDA5、c GAS、STING、TBK1、MAVS和IRF7互作;随后,我们通过激光共聚焦显微镜观察发现,CcFTR85与IRF3共定位。病毒蚀斑实验和q RT-PCR实验进一步证明,CcFTR85减弱IRF3对SVCV病毒复制的抑制。我们又探究了CcFTR85调控IRF3的方式和机制。Western Blot实验表明,CcFTR85过表达能显著降解IRF3,且呈现剂量依赖性。放线菌酮追逐实验证明,CcFTR85加剧了IRF3及p-IRF3的不稳定性。Western Blot结果显示CcFTR85可显著抑制内源性IRF3及pIRF3的表达。非变性聚丙酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)结果表明,CcFTR85抑制IRF3二聚化。免疫荧光实验和Western Blot实验进一步证明,CcFTR85抑制p-IRF3入核。为了探究CcFTR85通过何种方式降解IRF3,我们进行了免疫共沉淀实验分析。结果表明,MG132处理后可以逆转CcFTR85对IRF3的降解,且CcFTR85显著增强IRFForensic Toxicology3的多聚泛素化修饰。为了确定CcFTR85对IRF3的泛素化修饰类型,将CcFTR85、IRF3与一组泛素突变体(K6、K11、K27和K48)共转染293T细胞,发现CcFTR85显著增强IRF3 K48位连接的泛素化。而将K48Ub突变为K48RUb时,CcFTR85对IRF3泛素化减弱。最后,我们对CcFTR85与IRF3互作的结构域进行了分析。我们分别构建了CcFTR85和IRF3不同结构域的缺失突变体,并进行了免疫共沉淀实验。结果表明CcFTR85通过其PRY-SPRY结构域与IRF3相互作用,IRF3通过其IAD结构域与CcFTR85相互作用。我们通过q RT-PCR和免疫共沉淀实验探究CcFTR85发挥负调控功能的结构域。结果表明,与全长CcFTR85相比,缺失RING结构域的CcFTR85对IRF3介导的IFN-Ⅰ表达的抑制作用消失,且显著削弱对IRF3的多聚泛素化修饰。本论文揭示了CcFTR85通过K48位泛素化修饰靶向降解IRF3负调控IFN-Ⅰ的抗病毒天然免疫反应的机制,为鱼类FTR在天然免疫调控中的作用机制提供新的见解。