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目的 探讨线粒体融合蛋白(Mfn)2通过细胞外信号调节激酶(Ras-Raf-ERK)1/2信号通路抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化及其机制。方法 离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),给予脂多糖(LPS)刺激建立ARDS细胞模型，构建腺病毒重组体Adv-Mfn21-264-GFP、Adv-Mfn2265-757-GFP、Adv-Mfn21-757-GFP,分别转染HELF,使其分别过表达Mfn2的N端GTP酶结构域(aa1-264)、C端跨膜区(aa265-757)及Mfn2的全长氨基酸残基(aa1-757),将细胞分为：Control组、Adv-vector组、LPS组、AdGSK126体外v-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组；噻唑蓝(MTT)法观察各组HELF细胞增殖情况，并检测细胞内胶原蛋白的表达情况，Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCRRoxadustat MW)检测Ras信号通路Ras、Raf-1及ERK1/2的表达。结果 Control组与Adv-vector组细胞增殖水平无明显差异(P>0.05);与Control组比较，LPS组第2、3、4、5、6天细胞增殖水平均明显增加(P<0.01);转染不同Mfn2基因片段后，与LPS组比较，Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组肺成纤维细胞增生受到抑制，细胞增殖水平明显下降(P<0.01);且LPS组较Control组细胞内胶原蛋白含量明显增加，Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组较LPS组细胞内胶原蛋白含量明显减少(均P<0.01);Western印迹及RT-PCR检测结果显示，与Control组比较，LPS组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显增加，而转染不同Mfn2基因片段腺病毒后，与LPS组比较，Adv-Mfn21-26bio depression score4-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显下调(均P<0.05)。结论 Mfn2可能通过N端GTP酶结构域、C端跨膜区调控Ras-Raf-ERK1/2信号通路影响成纤维细胞异常增殖抑制ARDS肺纤维化。

胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）与多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）的发生发展有关，而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱，进而影响卵泡发育及卵子质量。PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路，包括磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-acsellecktivated protein kinase,MAPK）/细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路；与炎症相关的通路包括Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等；氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关Foetal neuropathology因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途径和GTP酶免疫相关蛋白7(GTPase of immunity-associated protein 7,GIMAP7)/音猬因子（sonic hedgehog,LY-188011体内SHH）途径；与脂质代谢相关的通路如激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路等。明确PCOS患者卵巢颗粒细胞中IR相关信号转导通路，增进PCOS病理生理机制的认识，进一步为PCOS的治疗提供新思路。

指状青霉菌(Penicillium digitatum)引起的柑橘绿霉病和意大利青霉菌(Penicillium italicum)引起的柑橘青霉病是柑橘采后最为严重的两种病害。在我国,登记用于防治柑橘绿霉病和青霉病的14α-脱甲基酶抑制剂(DMI)类杀菌剂咪鲜胺和抑霉唑的抗药性越来越严重,因此研究不同作用机制的杀菌剂对指状青霉菌和意大利青霉菌的生物活性对柑橘采后病害的可持续治理具有重要的意义。本课题组前期试验发现苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈对指状青霉菌有较好的生物活性。基于此,本文研究了咯菌腈对指状青霉菌和意大利青霉菌的抑制作用,评估了指状青霉菌和意大利青霉菌对咯菌腈的抗药性风险,初步探究其抗药性机制,主要结果如下:1.2020-2021年从五个地区柑橘园采集分离到81株指状青霉菌和89株意大利青霉菌,测定咯菌腈对病原菌菌丝生长抑制的有效中浓度(EC50),建立了指状青霉菌和意大利青Sediment remediation evaluation霉菌对咯菌腈的敏感性基线。咯菌腈对81株指状青霉菌EC50值的范围为0.0052-0.0336μg/m L,EC50平均值为0.0127μg/m L±0.0066(SD);对89株意大利青霉菌的EC50值的范围为0.0075-0.0486μg/m L,EC50平均值为0.0216μg/m L±0.0084(SD)。2.200μg/m L咯菌腈对柑橘绿霉病和青霉病的保护作用防效分别为46.3%和54.1%,显著低于同等浓度下咪鲜胺对柑橘绿霉病和青霉病的防效。200μg/m L咯菌腈对咪鲜胺指状青霉菌和意大利青霉菌抗性菌株室内防效分为26.5%和51.5%,均高于咪鲜胺的防治效果,表明咯菌腈可用于防治咪鲜胺抗性菌株。3.室内药剂和紫外结合连续诱导三或四代获得了指状青霉菌和意大利青霉菌的抗性突变体,抗性倍数RF>9000。意大利青霉菌突变体的抗性能稳定遗传,但突变体的菌丝生长量、产孢量及致病力显著下Q-VD-Oph配制降。指状青霉菌抗性突变体的产孢量、致病力同样显著下降。指状青霉菌和意大利青霉菌对咯菌腈和唑类杀菌剂咪鲜胺没有交互抗性(指状青霉菌R=0.222,P=0.159),和二甲酰亚胺类杀菌剂菌核净具有交互抗性(指状青霉菌R=0.993,P<0.001)。指状青霉菌和意大利青霉菌的抗性突变体对NaCl、葡萄糖和山梨醇耐受力显著低于亲本菌株。无药剂处理时,抗性突变体的细胞内甘油含量显著高于敏感菌株。4.对指状青霉菌双组份信号系统上四个关键激酶基因双组分组氨酸蛋白激酶基因PdHK、促分裂原活化蛋白激酶基因PdHog1、促分裂原活化蛋白激酶激酶基因PdPbs2和促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶基因PdSsk2进行PCR扩增比对,与敏感菌株相比,8株指状青霉菌抗性突变体的PdHK基因发生了点突变,其中7株氨基酸突变位点(N501I、T508I、N546I、N546H和L691P)均位于HAMP(Histidine kinases Adenylyl cyclases Methyl-accepting chemotaxis proteins and Phosphatases)结构域,1株氨基酸突变位点(S955L)位于HATPase(Histidine kinase-like ATPase catalytic domain)结构域上。1株抗性突变体PdHoMK-2206小鼠g1基因发生了一处核苷酸点突变,为同义突变。8株咯菌腈抗性突变体的PdPbs2基因和PdSsk2基因均为未发生突变。因此推测指状青霉菌对咯菌腈的高水平抗性可能与双组份组氨酸蛋白激酶的氨基酸突变有关。5.利用qRT-PCR测定了咯菌腈处理前后3株指状青霉菌抗性突变体及其亲本敏感菌株四个关键激酶基因PdHK、PdHog1、PdPbs2和PdSsk2的相对表达量。与敏感菌株相比,抗性突变体20HB-WH-Pd19-BR上述四个基因表达量均升高,而其余两株突变体的表达量无显著变化。这些基因表达和突变实验结果表明不同突变体的抗性机理有所不同。

目的 观察急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后给予五参汤加减治疗对患者心功能、血液流变学的影响。方法 选取2020年4月—2022年5月我院收治的进行PCI治疗的急性心肌梗死患者88例，随机分为对照组(44例，术后常规西药治疗)、五参汤组(44例，术后常规西药+五参汤加减治疗),测量比较两组患者治疗前后血液流变学、心功能、血清炎性因子、氧化应激指标，记录心血管不良事件及不良反应发生情况。结果 治疗后五参汤组3项血液流变学指标均显著低于对照组(P<0.05);治疗后五参汤组C-Dromedary camels反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平显著低于对照组(P<0.05);治疗后五参汤组血清MDA水平低于对照组，SOD水平高于对照组(P<0.05);治疗后五参汤组左心VE-822分子量室射血分数(LVEF)显著高于对照组，左心室收缩末期内径(LVESD)显著低于对照组(P<0.05);五参汤组心血管不良事件发生率显著低于对照组(PMLN8237试剂<0.05);不良反应发生率对比，五参汤组与对照组无显著差异(P>0.05)。结论 五参汤加减用于急性心肌梗死PCI术后治疗可显著改善患者血液流变学及心功能，降低PCI术后MACE发生率，给药安全性高，其生效机制可能与下调炎性因子，减轻氧化应激反应有关。

目medical nutrition therapy的 构建幽门螺杆菌(Hp)感染住院学龄期儿童营养管理方案，并评价其应用效果。方法 选取2021年4—9月在河南省人民医院就诊的76例Hp感染住院的学龄期儿童作为研究对象，2021年4—6月收治的38例患儿纳入对照组，2021年7—9月收治的38例患儿纳入试验组。对照组接受常规护理，试验组接受Hp感染住院儿童营养管理方案。比较干预前、干预后1个月、干预后3个月两组学龄期儿童日常RP56976饮食提供者膳食素养问卷和荷兰儿童饮食行为量表得分。结果 两组干预后1、3个月的儿童饮食行为得分和学龄期儿童日常饮食提供者膳食素养得分比较，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Hp感染住院儿童营养管理方案的应用可帮助患儿建立正确的饮食行为习惯，提高患儿主要照顾者的膳食素养水平，强化儿童营养健康的支持性环境LGK-974纯度，促进我国学龄期儿童的健康成长。

目的RAD001 IC50 分析第三代头孢菌素类抗菌药物的药理作用及其临床合理用药情况。方法 分别抽选470例(470份处方)接受第一代头孢菌素类抗菌药物治疗、760例(760份处方)接受第二代头孢菌素类抗菌药物治疗、558例(558份处方)接受第三代头孢菌素类抗菌药物治疗患者的临床资料,分析三代(第一、二、三代)头孢菌素类药物使用方式、用药频度(DDDs)与费用,第三代头孢菌素类药物使用方式与剂量,第三代头孢菌素类抗菌药物治疗患者不良反应发生情况。结果 第一代头孢菌素类抗菌药物口服比例为38.51%,注射比例为61.49%；用药频度为5.66；费用为10.18万元。第二代头孢菌素类抗菌药物口服比例为28.95%,注射比例为71.05%；用药频度为16.37；费用为108.71万元。第三代头孢菌素类抗菌药物口服比例为39.07%,注射比例为60.93%；用药频度为12.01；费用为83.96万元。第三代头孢菌素类药物用药频度ABT-199配制高于第一代,但低于第二代；第三代头孢菌素类药物的费用远高于第一代,但低于第二代。558例患者接受第三代头孢菌素类药物治疗后不良反应发生率为5.02%,其中发生少尿患者2例(0.36Microbiome therapeutics%)、血小板和(或)白细胞下降患者1例(0.18%)、皮疹患者2例(0.36%),其余均为消化系统不良反应,包括恶心呕吐患者17例(3.05%)、食欲不振患者5例(0.90%)以及腹泻患者1例(0.18%)。结论 与第一、二代头孢菌素类抗菌药物相比,第三代头孢菌素类抗菌药物治疗感染性疾病的效果更好,不良反应发生率低,用药安全性更高。

目的：观察益气活血养阴清热方对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织损伤及单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/UNC-51样激酶1（ULK1）（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路的影响，探讨其治疗DN的可能作用机制，为临床应用益气活血养阴清热方Hedgehog/Smoothened抑制剂治疗DN提供客观的理论依据。方法：将90只SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组和造模组，分别给予普通饲料、高糖高脂饲料喂养。6 w后造模组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立DN模型，模型制备成功后随机分为模型对照组、益气活血养阴清热方7.7、15.3、30.6 g/kg组、厄贝沙坦0.017 g/kg组。给药后检测大鼠空腹血糖（FBG）、24 h尿蛋白（24 h-UTP）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量；苏木素-伊红（HE）染色、马松（MGSK1120212化学结构asson）染色、碘酸六胺银（PASM）染色观察肾组织病理变化；透射电镜观察肾组织超微结构变化；免疫组化法（IHC）检测大鼠肾组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、肌球蛋白样BCL2结合蛋白（Beclin 1）表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ULK1、p-ULK1蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达。结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠FBG、Scr、BUN、24h-UTP含量显著升高（P＜0.01）；肾小球增大，基底膜增厚，系膜基质增生，毛细血管扩张明显，足突融合；LC3Ⅱ、Beclin 1表达水平显著降低（P＜0.01）；AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1表达显著下调（P＜0.05或P＜0.01），mTOR、p-mTOR表达显著上调（P＜0.01）；AMPK、ULK1 mRNA表达显著下调（P＜0.01），mTOR mRNA表达显著上调（P＜0.01）。与模型对照组比较，益气活血养阴清热方30.6 g/kg组大鼠FBG、Scr、BUN、24h-UTP含量显著降低（P＜0.01）；肾小球增大减轻，肾组织病理变化改善，同时可见明显的自噬溶酶体；LC3Ⅱ、Beclin 1表达显著升高（P＜0.0Mining remediation1）；AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1表达显著上调（P＜0.01），mTOR、p-mTOR表达显著下调（P＜0.01）；AMPK、ULK1 mRNA表达显著上调（P＜0.01），mTOR mRNA表达显著下调（P＜0.01）。结论：益气活血养阴清热方能够缓解DN大鼠肾组织损伤，其机制可能与调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导的肾组织自噬有关。

纳米抗体作为一种新型抗体,具有更高的溶解性和抗原结合能力,更适用于基因操作手段以及更低的人工制造成本,因而被广泛用于科学研究和临床应用。越来越多的疾病被发现与蛋白质翻译后的修饰异常激活/失活有关,这导致了修饰抗体的开发研究。磷酸化抗体是其中一种,因为许多重要蛋白质的磷酸化状态对其活性health care associated infections和功能有很大影响。本研究探讨了通过全合成纳米抗体文库进行磷酸化抗体筛选的方法开发。磷酸化是一种常见的蛋白质修饰方式,它通过在蛋白质中加入磷酸基团来改变蛋白质的结构和功能。而多点磷酸化在蛋白质中的多个位点加入磷酸基团,从而www.selleck.cn/products/Rapamycin使蛋白质发生更加复杂的结构改变,甚至可以影响整个蛋白质复合物的稳定性和功能。因此,单点或多点磷酸化抗体的开发可能意味着不同的难度,以及对方法的不同要求,值得系统性的探究,从而为方法开发提供依据。此前,我们的研究发现精神压力可以激活RBM24 S181位点的磷酸化,而RBM38 S117/T132两点磷酸化能够被缺氧诱导。Tau蛋白的proline-rich domain在脯氨酸定向蛋白激酶(如GSK3β)的作用下在Ser Pro/Thr Pro基序中发生多个位点的磷酸化修饰。Tau蛋白异常磷酸化的发生与多种神经退行性疾病密切相关。本研究以磷酸化抗体开发为目标,构建了一种全合成的纳米抗体展示文库,并通过噬菌体表面展示技术,及噬菌体和酵母表面展示联合筛选方式,筛选针对RBM24 S181位点、RBM38 S117/T132位点以及TTelaglenastatAU T117/T231/S235位点磷酸化的特异性纳米抗体。我们通过噬菌体表面展示技术筛选到了靶向RBM24 S181单点磷酸化的纳米抗体;通过噬菌体和酵母表面展示联合筛选技术成功筛选到了靶向RBM38 S117/T132位点磷酸化的纳米抗体,但未筛选到靶向TAU T117/T231/S235位点磷酸化的纳米抗体。因此,通过本研究我们证明全合成的纳米抗体展示文库可以用于磷酸化纳米抗体的开发,这些纳米抗体的发现将有助于深入研究这些蛋白质的磷酸化修饰及其在疾病中的作用机制。

目的：基于中药网络药理学方法探讨五子衍宗丸治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)的潜在作用机制。方法：通过检索TCMSP中苍附导痰丸组成药物的成分数据，检索Disgenet、GeneCards、OMIM数据库中PCOS疾病相关靶点；利用Biogenet分别对药物与疾病靶点进行蛋白质相互作用网络进行构建，并提取交集网络以获得五子衍宗丸治疗SBE-β-CD浓度PCOS的关键靶点；利用Metascape对关键靶点进行GO和KEGG富集分析，得出五子衍宗丸治疗PCOS的作用机制。结论：五VX-765临床试验子衍宗丸治疗多囊卵巢综合征的主要成分可能是槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇等，涉及到的关键通路有癌症信号通路、脂质与动脉粥样硬化信号通路、化学致癌–受体激活通路、T白细胞介heterologous immunity素-17信号通路等，与激素反应、对有机物的反应、细胞对脂质的反应、对外源性刺激的反应等多个生物学过程相关。

目的·分析黏附性G蛋白偶联受体F1 (adhesion G protein-coupled receptor F1, ADGRF1)在胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC）发生及发展过程中的表达变化，探究ADGRF1对PDAC细胞增殖的影响以及促进PDAC进展的潜在分子机制。方法·基于癌症基因组图谱（The Ccardiac pathologyancer Genome Atlas,TCGA）数据库和基因表达综合（Gene ExJAK抑制剂pression Omnibus,GEO）数据库分析ADGRF1在正常胰腺组织及PDAC组织中的mRNA水平表达。利用实时荧光定量PNSC 119875分子式CR (quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法（Western blotting）检测ADGRF1在正常胰腺导管上皮细胞hTERT-HPNE及多种PDAC细胞中的表达情况。利用免疫组织化学染色（immunohistochemistry staining,IHC）检测PDAC患者的癌组织及癌旁组织中ADGRF1的表达差异。转染小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)敲低ADGRF1后，通过CCK8和平板克隆形成实验检测PDAC细胞AsPC-1、SW1990增殖能力的变化。构建稳定过表达ADGRF1的Patu8988细胞，通过CCK8实验检测过表达ADGRF1引起的PDAC细胞增殖变化。利用RNA测序（RNA-sequence,RNA-seq）、基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）和免疫浸润分析预测与ADGRF1促进PDAC癌症进展相关的信号通路。结果·TCGA数据库和GEO数据库的分析结果显示ADGRF1 mRNA在PDAC组织中的表达高于正常胰腺组织（均P=0.000）。qPCR和Western blotting结果显示，与hTERT-HPNE细胞相比，多种PDAC细胞中ADGRF1的mRNA和蛋白水平均有所上调（均P<0.05）。IHC结果显示ADGRF1在PDAC患者癌组织中的表达也高于癌旁组织。此外，下调ADGRF1能够抑制PDAC细胞AsPC-1、SW1990的增殖能力；而过表达ADGRF1则促进Patu8988细胞的增殖能力（均P<0.05）。RNAseq、GSEA富集分析和免疫浸润的结果显示，ADGRF1的表达与干扰素α (interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子κB (nuclear factorκB,NF-κB)等信号通路有关。结论·ADGRF1在PDAC细胞和组织中高表达，促进PDAC细胞的增殖，其机制可能与多个免疫相关信号通路有关。