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胃癌因其发病率高、恶性程度高、确诊时期晚等特点,成为世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。针对胃癌的治疗按照不同分型分期,应用手术、化疗、放疗以及辅助治疗等方案相互结合进行,其中化疗则是重要的一项治疗手段。但随着化疗药物使用次数增多以及患者的个体差异性等因素的影响,胃癌患者对化疗药物敏感性降低,产生耐药的现象逐渐增多,使得化疗耐药成为影响胃癌患者预后的重要因素之一。然而,患者是否对某一药物耐药目前还没有有效的评判标准,使得耐药判断呈现滞后性高、无法及时寻找替代药物等特点。随着化疗耐药的研究不断深入,越来越多的证据表明胃癌患者化疗耐药的发生常与癌基因或抑癌基因的表达改变、癌细胞的药物代谢和抵抗作用以及患者反复多次用药等因素相关。我们的前期研究证明,胰岛素增强子结合蛋白1(Insulin gene enhancer binding protein 1,ISL1)在胃癌中异常表达,ISL1不仅参与胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,还可以作为判断genetic interaction胃癌患者预后的重要指标,说明ISL1与胃癌的发生发展有密切的关系。但ISL1对胃癌中的化疗敏感性的影响以及具体机制目前还未见报道。【目的】本研究旨在探究ISL1对胃癌细胞化疗敏感性的影响,并尝试阐述ISL1调控化疗敏感性的具体分子机制。【方法】1.通过免疫组化检测化疗(或铂类)耐药/VX-661细胞培养敏感患者的肿瘤组织中ISL1的表达,并联系临床病理特征分析ISL1与胃癌患者化疗(或铂类)耐药的关系。2.通过Western blot、RT-q PCR实验检测胃癌细胞系MGC803、MKN45、BGC823、AGS、SGC7901和正常胃黏膜上皮细胞系GES1中ISL1的表达水平,筛选ISL1相对高表达和相对低表达的细胞系作为后续的研究体系。3.通过RT-q PCR和Western blot实验检测不同浓度顺铂(0、20、Belnacasan40、60、80、100μM)作用下ISL1的m RNA水平和蛋白水平的表达量。利用CCK8实验检测通过转染ISL1敲低或过表达的质粒后胃癌细胞的顺铂IC50的变化。此外,检测ISL1对顺铂作用下胃癌细胞增殖能力的影响,综合分析ISL1与顺铂敏感性的关系。4.对敲低ISL1的胃癌细胞CHIP-seq的差异基因数据集进行GO分析和KEGG pathway富集分析,定位ISL1参与胃癌耐药的相关机制。根据ISL1参与胃癌耐药机制的结果,进行ISL1与自噬的关系验证。利用MDC染色、m GFP-RFP-LC3荧光以及Western Blot检测自噬指标蛋白联合监测ISL1作用下胃癌细胞自噬流的变化情况,同时利用自噬调节剂进行回复。利用自噬调节剂处理ISL1敲低/过表达稳转胃癌细胞研究胃癌细胞增殖能力的变化。结合上述实验,综合分析ISL1对胃癌细胞自噬流的影响。5.对顺铂处理后的两株胃癌实验细胞进行自噬的检测,分析顺铂对胃癌细胞自噬的影响。ISL1敲低或过表达的同时联合自噬调节剂,观察此时胃癌细胞IC50的变化,以及在ISL1的改变、自噬调节剂的加持下,检测顺铂抑制胃癌细胞增殖的能力,分析是否产生差异性的改变。结合以上实验,分析ISL1是否通过促进保护性自噬抑制胃癌细胞顺铂敏感性。6.利用自噬相关基因PCR array和Chip-seq数据联合分析ISL1可能调控的下游基因,并探究ISL1能否结合到ATG9B的转录增强子区域,并寻找结合位点。同时对ISL1敲低或过表达,利用RT-q PCR、Western Blot分析ATG9B m RNA水平以及蛋白水平的表达变化。【结果】1.通过免疫组化及临床病理分析结果发现ISL1高表达的胃癌患者发生化疗(或铂类)耐药的可能性增加,同时通过RT-q PCR、Western Blot检测发现ISL1表达丰度与胃癌细胞顺铂敏感性呈负相关。此外,通过IC50检测发现ISL1的高表达可以降低胃癌细胞对顺铂的敏感性,从而提高胃癌细胞对于顺铂的抵抗效应。2.通过GO分析和KEGG pathway富集分析,我们分析ISL1的表达与细胞对外界的刺激反应有关,该数据集内自噬相关基因占半数,同时ISL1还与自噬前驱通路PI3K/AKT相关。因此我们将研究机制定位至胃癌细胞的自噬过程。通过MDC染色、m GFP-RFP-LC3荧光以及Western Blot检测自噬指标蛋白联合检测,发现ISL1表达升高使自噬小体、自噬指标蛋白表达增加;而ISL1表达降低,使自噬小体、自噬指标蛋白表达随之降低,同时自噬调节剂在ISL1表达改变的影响下无法有效发挥原本的作用。3.通过IC50检测发现,过表达ISL1可以降低胃癌细胞的顺铂敏感性,联用自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)后可以使敏感性进一步降低;而联用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)细胞的敏感性被部分恢复,有所增强。相反的,敲低ISL1可以增强胃癌细胞的顺铂敏感性,联用3-MA可以进一步增强胃癌细胞顺铂敏感性,联用Rapa则降低胃癌细胞的顺铂敏感性。而CCK8增殖实验结果显示,顺铂能够有效抑制胃癌细胞的增殖。Rapa部分恢复顺铂作用下胃癌细胞的增殖能力,而过表达ISL1后,Rapa的作用得到进一步加强;敲低ISL1后,Rapa无法有效恢复顺铂作用下胃癌细胞的增殖能力。3-MA可以增强顺铂抑制胃癌细胞增殖的作用,即3-MA发挥了促敏顺铂的作用,敲低ISL1后,3-MA的顺铂促敏作用被进一步增强;过表达ISL1后,3MA的顺铂促敏作用被部分抑制,胃癌细胞的增殖能力有所恢复。4.通过RT-q PCR、Western Blot、Chip-seq结果联合分析提示,自噬相关蛋白9B(Autophagy Related 9B,ATG9B)有可能是ISL1的下游靶基因,ISL1可能直接结合在ATG9B基因的增强子区,促进其m RNA的表达,但对ATG9B蛋白水平表达调控作用不明显。【结论】1.ISL1在癌组织和细胞系中异常高表达,ISL1高表达的胃癌患者发生化疗耐药及铂类耐药可能性增加。ISL1通过促进细胞的保护性自噬来降低胃癌细胞的顺铂敏感性,从而提高胃癌细胞对顺铂的抵抗能力,且ISL1的表达与顺铂浓度呈负相关。2.ISL1促进胃癌细胞自噬的发生,主要体现在自噬的启动和激活阶段,且ISL1对自噬的调节作用可能通过ATG9B介导的。

目的：研究敲除芳香CP-690550采购烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)基因对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)代谢途径和物质的影响。方法：利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9技术构建AHR基因敲除的PLC/PRF/5肝癌细胞系，对野生型(AHR-WT)和AHR基因敲除(AHR-KO)肝癌细胞的代谢物质进行非靶向代谢组学检测，对其代谢物质差异进行分析，使用Metaboanalyst 4.0进行代谢通路富集分析，并寻找差异代谢物质。结果：将AHR-WT肝癌细胞和AHR-KO肝癌细胞分别进行正、负离子模式下的代谢物质检测，其前10位的功能富集结果包括氨基酸代谢(谷氨酸代谢、甘氨酸和丝氨MDV3100浓度酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、蛋氨酸代谢、天冬氨酸代谢、尿素循环、氨再循环)、能量代谢[谷胱甘肽代谢、沃伯格(Warburg)效应]及核苷酸代谢(嘌呤代谢)。对差异代谢物质进行通路富集分析得到8条与肿瘤作用机制密切相关的代谢通路，包括精氨酸和脯氨酸代谢，精氨酸生物合成，嘧啶代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，嘌呤代谢，赖氨酸退化，抗坏血酸和醛酸盐代谢。与AHR-WT肝癌细胞相比，AHR-KO肝癌细胞L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、尿苷和黄嘌呤明显下调，而还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)、氧化型谷胱甘肽和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dicapsule biosynthesis genenucleotide phosphate,NADPH)明显上调。结论：AHR基因在HCC代谢过程中可能发挥重要作用，以AHR基因为靶点的HCC代谢组学变化可能是新的抗肿瘤治疗方案的研究方向。

目的:临床对比和分析内镜检查和病理诊断慢性萎缩性胃炎的价值。方法:随机选择在我院接受内镜检查的56例慢性萎缩性胃炎患者,诊断金标准为病理诊断。分析病理诊断结果和内镜检查结果,对慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和异形增生符合率进行比较,总结内镜影像学特征。结果:56例患者经内镜检查有10例属于Ⅰ型,有28属于Ⅰ型+Ⅱ型,有18例属Pulmonary infection于Ⅰ型+Ⅱ型+Ⅲ型。56例患者经病理检查确诊有40例慢性萎缩性胃炎,符合率为71.43%,有20例肠上皮化生,符合率为35.71%,有12例异形增生,符合率为21.43%,在符合率指标中,相比于肠上皮化生和异形增生,慢性萎缩性胃炎的诊断符合率更高,(P<0.05)。56例患者中有52例黏膜变薄,占比为92.86%,有45例褶皱变平,占比为80.36%,有44例血管暴露,占比为78.57%,有42例黏膜可见表面结节,占比为75.00%。结论:胃镜检查在诊断慢性萎缩性胃炎方面具有较高的准确PUN30119体内实验剂量率。因此,可以将内镜检查作为诊断慢性萎缩性胃炎的一个有效手段。为了促进诊断准确性的进一步提高,加大疾病筛查力度,可以将内镜检查结合病理诊断对患者实施联合诊断,有利于患者疾病得到及selleck激酶抑制剂时准确的确诊,为患者及时得到有效治疗提供有利条件,保证患者获得良好的预后。

目的 探讨中医穴位敷贴联合手指点穴治疗血液病患者胃肠道反应的临床效果。方法 选取苏州永鼎医院2021年12月至2023年7月收治的80例血液病患者资料进行回顾性研究，根据治疗方法不同将Cobimetinib说明书患者分为观察组和对照组，每组40例。两组均给予常规生活饮食干预，对照组使用西药治疗，观察组采用穴位敷贴联合手指点穴治疗，比较两组治疗效果。结果 两组治疗前胃肠道症候积分（恶心呕吐、便秘腹泻、腹胀腹痛、纳食减少）比较差异无统计学意义（P>0.05），治疗后观察组4项指标评分均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者治疗前胃肠道症状量表（gastrointestinal symptom rating scale,GSRS）、肿瘤生活质量（quality of life,QOL）评分差异无统计学意义（P>0.05），观察组治疗后GSRS低于对照组，QOL高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者治疗前白蛋白、生长激素和转铁蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05），观察组治疗后3项指标均高于对照组，其中生长激素和转铁蛋白水平组间差异有统计学意义（P<0.05）。观察组患者对胃肠道反应干预治疗满意度为95.00%，高于对照组72.50%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 血液病患者在治疗过程中出现不同程度胃肠道反应的AZD2281小鼠可能性较高，采用中医穴位敷贴和手指点穴能够取得有效效果，并改Ascomycetes symbiotes善患者营养状况。

背景:白纹伊蚊(Aedes albopictus)是登革热、寨卡病毒病和基孔肯雅热等蚊媒传染病的重要传播媒介,给世界范围内的人类健康造成重大负担。主要依赖化学杀虫剂的媒介控制是蚊媒传染病预防控制的主要策略。然而,化学杀虫剂的滥用已经导致蚊虫广泛的抗药性问题,尤其是对最常用的拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性,Iron bioavailability阻碍了世界范围内多个地区对蚊媒的有效控制。目前,关于蚊虫抗药性的研究多是在野外监测下对杀虫剂抗性的多因素回顾性分析,从而难以阐明特定蚊虫对单一杀虫剂的抗性演化、适合度代价及其媒介能量影响。目的:1.选择作为拟除虫菊酯类杀虫剂代表性药物的溴氰菊酯单一变量因素来研究白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性演变的规律和机制,筛选抗药性产NSC 127716体内实验剂量生的分子标志物;2.对白纹伊蚊溴氰菊酯抗药性产生的分子靶标进行功能验证,阐明抗性产生的分子机制并研发精准敏感的白纹伊蚊种群抗药性监测的分子检测方法;3.研究抗性机制在白纹伊蚊对溴氰菊酯产生适合度代价的贡献,评估抗性演变、适合度代价对登革病毒(Denguevirus,DENV)媒介能量的综合影响。方法:本研究利用溴氰菊酯对实验室白纹伊蚊敏感品系进行抗性筛选,通过对抗性筛选过程中不同筛选代次的抗性水平监测以及靶标抗性和代谢抗性的检测,分析白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性演变的规律和机制。利用CRISPR/Cas9技术和遗传回交实验对抗性产生的分子靶标进行体内功能的验证,通过计算机蛋白建模和靶标基因转录水平检测阐明分子靶标对抗性产生的具体机制。通过量化对比分析不同抗性机制对适合度代价的贡献,并利用媒介能量公式系统地探讨白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性演化和适合度代价对Ⅱ型登革病毒(DENV-2)传播的综合影响。结果:利用溴氰菊酯对敏感品系加压筛选至第30代,观察到白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性的演变呈现出先缓后快的趋势,并且在白纹伊蚊体内验证了电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channel,VGSC)F1534S突变的引入可以导致敏感品系产生溴氰菊酯抗性,回复突变可以恢复杀虫剂敏感性。F1534S突变导致的抗性表型与钠通道对杀虫剂结合力的下降以及VGSC基因转录水平的下降有关。此外,在野外采集的白纹伊蚊抗性种群中也检测到F1534S突变。基于以上的结果,开发了一种基于F1534S突变应用于白纹伊蚊种群抗性监测的分子检测方法。分离鉴定出代表不同抗性机制的实验室品系,比较代表不同抗性机制的实验室品系的抗性水平和适合度代价。结果发现抗性产生初期出现的F1534S突变杂合不仅能赋予白纹伊蚊种群高水平抗性,并且无selleckchem NN2211显著的适合度代价,导致种群抗性的迅速扩散。由于F1534S突变纯合的适合度代价显著,种群演化出适合度代价较小的I1532T突变以适应筛选压力;随着抗性演化,无显著适合度代价且介导高抗表型的代谢抗性可能会发挥其优势作用。此外,我们发现抗性品系在媒介能量公式中与适合度代价相关的参数降低了其媒介能量,然而抗药性导致的杀虫剂暴露后的高媒介密度逆转了适合度代价带来的劣势,使得抗性品系对DENV-2的媒介能量高于敏感品系。其中,代谢抗性主导的抗性品系的媒介能量最高,主要由于其同时具有较高的抗性水平和最低的适合度代价。结论:我们利用代表性杀虫剂溴氰菊酯建立了敏感品系来源的白纹伊蚊抗药性演化模型。白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性产生的初期是媒介控制的关键,此时白纹伊蚊VGSC基因F1534S突变发挥重要作用。结合F1534S突变的体内功能验证以及野外抗性种群的检测结果,开发了一种基于F1534S突变应用于白纹伊蚊种群抗性监测的分子检测方法。通过对比分析代表不同抗性机制品系的适合度代价,揭示了白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性演化的分子机制。利用媒介能量综合分析抗性水平、适合度代价以及对DENV-2的易感性,发现白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性的发展会增大其对登革病毒的传播风险,并且媒介密度的控制仍然是媒介传染病的首要目标。本研究结果将对媒介蚊虫的杀虫剂使用、抗性管理和蚊媒病防控提供科学指引。

目的:通过生信分析、收集分离脓毒症患者外周血单核细胞,利用THP-1细胞构建脓毒症细胞模型,探究NEDD4L、MEKK2表达与脓毒症炎症因子释放的关系,为NEDD4L作为脓毒症治疗靶点提供依据。方法:1.通过GEO数据库的GSE28750数据集,运用R语言生信分析工具sangerbox,获取其数据库中10位脓毒症患者以及20位健康患者外周血样本所有基因表达信息。使用sangerbox3.0筛选差异基因,KEGG富集分析差异基因的相关信号通路。2.收集南昌大学第一附属医院EICU脓毒症患者20例以及健康体检者10例外周血5ML,分成正常对照和实验组,使用淋巴分离液采用密度离心法分离出单核核细胞,q-PCR检测IL-6、TNF-α、NEDD4L及MEKK2的m RNA的表达,通过spearman相关分析分析NEDD4L、MEKK2与炎症因子之间的相关性。3.取人白血病单核细胞(TH此网站P-1),接种与T25培养瓶,当细胞生长到一定量时用不同浓度的LPS刺激,构建体外细胞模型。分组(1)对照组:不做任何处理;(2)实验组:LPS浓度50ng刺激。使用q-PCR等实验方法检测6H、12H、24H的NEDD4L、MEKK2、IL-6、TNF-α的m RNA的表达。4.合成特异性干扰RNA(si-NEDD4L),下调NEDD4L在脓毒症模型中的表达,探究NEDD4L是否参与THP-1细胞炎症释放。将已经沉默NEDD4L的THP-1细胞加入50ng/ml的LPS刺激12H。q-PCR检测:IL-6、TNF-α的表达。5.利用ALCAP2上调NEDD4L。q-PCR、Western Blot检测NEDD4L、MEKK2的表达。转染si-NEDD4L于THP-1细胞中沉默NEDD4L。使用50ng/ml的LPS刺激THP-1细胞。q-PCR检测0H、6H、12H时NEDD4L、MEKK2的m RNA的表达。6.使用S20、S26蛋白酶体抑制剂处理脓毒症细胞模型,抑制泛素降解途径,Western Blot检测MEKK2蛋白的表达。结果:1.通过sangerbox3.0筛选出多个与脓毒症相关基因,NEDD4l符合差异基因的标准,在脓毒症的作用值得进一步研究。通过GO和KEGG富集分析发现,脓毒症的发病与MAPK信号通路及多条炎症及免疫通路相关。2.与健康人相比,脓毒症患者单核细胞IL-6、TNF-α、NEDD4L、MEKK2的m RNA的表达水平均升高(P<0.05)脓毒症患者中NEDD4L的m RNA的表达与MEKK2表达成负相关,NEDD4L与IL-6、TNF-α成负相关。3.脓毒症细胞模型中,与对照组相比,LPS刺激的THP-1细胞中IL-6、TNF-α、NEDD4L、MEKK2的m RNA的表达水平均升高(P<0.05),随着刺激时间延长NEDD4L表达下降,MEKK2表达上升,IL-6、TNF-α表达升高。4.使用si-NEDD4L下调NEDD4L的表达,与对照组相比,LPS+SiNEDD4L组中IL-6、TNF-α的m RNA的表达明Regorafenib小鼠显升高,有显著差异(P<0.05),表明NEDD4L可能参与THP-1细胞炎症因子的释放。5.使用ALCAP2上调NEDD4L,与对照组相比,MEKK2表达下降,IL-6、TNF-α下降,有显著差异(P<0.05)。转入干扰RNA,下调NEDD4L的表达,MEKK2表达上升,IL-6、TNF-α表达升高,有显著差异(P<0.05)。表明NEDD4L可能通过调节MEKK2影响炎症因子的释放。6.使用S20、S26蛋白酶体抑制剂处理脓毒症细胞模型,抑制泛素化降解途径。与刺激组相比,未用MG132刺激组,MEKK2下降,表明NEDD4L可能通过泛素蛋白酶体系统调节MEKK2。结论:1.在生物信息学分析中,NEDD4L是脓毒症差异基因,与脓毒症发病机制的多条炎症通路有关,其中与MAPK信号传导通路最为密切Liver infection。2.脓毒症中NEDD4L可能通过泛素化调节MEKK2影响单核细胞IL-6、TNF-α等炎症因子的释放。

目的 探讨尿液前列腺特异性抗原（u-PSA）预测老年良性前列腺增生SB203580临床试验（BPH）发生急性尿潴留（AUR）的价值。方法 选取东莞市中医院100例老年BPH患者（2020年1月—2021年4月）进行回顾性研究，均口服盐酸坦索罗辛+非那雄胺片治疗，随bio-dispersion agent访1年，记录AUR发生情况，据此分为AUR组、非AUR组。比较2组一般资料，Logistic回归模型分析老年BPH发生AUR的危险因素，受试者工作特征（ROC）分析前列腺体积（PV）、u-PSA对老年BPH发生AUR的预测价值。结果 100例老年BPH患者AUR发生率为26%;AUR组u-PSA水平高于非AUR组，PV大于非AUR组（P<0.05）;Logistic回归模型分析，u-PSA水平及PV增Enasidenib采购高是老年BPH患者发生AUR的独立危险因素（P<0.05）;ROC曲线分析，u-PSA预测AUR的AUC=0.897，高于AUC_(PV)(P<0.05)。结论 u-PSA可作为老年BPH继发AUR的量化评估指标，有利于临床早期筛查、诊断，采取针对性干预措施，改善预后。

目的 探讨瘀血痹胶囊联合托法替布治疗类风湿关节炎的临床疗效。方法 选取2021年1月—2022年12月衡水市人民医院收治的112例类风湿关节炎患者，按随机数字表法分为对照组和治疗组，每组各56例。对照组口服枸橼酸托法替布片，5 mg/确认细节次，2次/d。治疗组在对照组基础上口服瘀血痹胶囊，6粒/次，3次/d。两组疗程均为12周。观察两组的临床疗效，比较治疗前后两组主要症状和体征情况、以C反应蛋白（CRP）计算的28个关节疾病活动度（DAS28-CRP）、多维健康评估问卷（MDHAQ）评分、影像学Sharp评分，以及全血红细胞沉降率（ESR）、selleck产品血小板与淋巴细胞比值（PLR）和血清CRP、白细胞介素-8(IL-8)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)水平。结果 治疗组ACR20、ACR50达标率分别为82.14%、48.21%，较对照组的64.26%、28.57%均显著提高（P<0.05）；治疗组ACR70达标率为19.64%，高于对照组的12.5%，但差异无统计学意义。治疗后，两组关节疼痛VAS评分、压痛和肿胀关节个数均较治疗前显著降低，晨僵时间显著缩短（P<0.05）；且均以治疗组改善更显著（P<0.05）。治疗后，两组DAS28-CRP评分、MDHAQ评分均显著降低，而Sharp评分显著升高（P<0.05）；治疗后，治疗组DAS28-CRP评分、MDHAQ评分、Sharp评分低于对照组（P<0.05）。治疗后，两组全血ESR、PLR和血清CRP、IL-8、ANGPTL4水平均显著下降（P<0.05）；且治疗后，治疗组全血ESR、PLR和血清Chepatic cirrhosisRP、IL-8、ANGPTL4水平均显著低于对照组（P<0.05）。结论 瘀血痹胶囊联合托法替布治疗类风湿关节炎具有较好的临床疗效，能有效促进主要症状、体征好转及病情缓解，减轻机体炎性反应，延缓骨破坏和关节功能损害，改善整体功能状态，值得临床推广应用。

目的解析铁自噬Clinical forensic medicine在锑诱导神经元铁死亡中的作用及机制。方法建立小鼠锑体内暴露模型及PC12细胞体外暴露模型,结合铁死selleckchem亡特异性抑制剂Fer-1干预模型,通过免疫荧光、免疫组化、荧光探针及免疫印迹等方法检测铁死亡相关指标及小鼠神经损伤与细胞毒性相关指标,明确神经元铁死亡在锑诱导的神经毒性中的作用。体内外检测铁蛋白的表达和降解速率,结合自噬抑制模型,明确锑对神经元铁自噬的影响。构建腺病毒载体,特异性在小鼠神经元上过表达FTH1蛋白,体内外干预自噬,在此基础上构建锑暴露模型,检测细胞和动物模型中海马区神经元铁离子浓度,铁死亡经典生化和分子指标,明确铁自噬在锑诱导神经元铁死亡中的关键作用。最后,通过基因干扰,鉴定锑暴露后介导铁蛋白降解的自噬受体。结果锑暴露可诱导小鼠海马区神经元和Liproxstatin-1配制PC12细胞发生铁死亡,抑制铁死亡有效降低锑的神经毒性。锑暴露促进铁蛋白降解,过表达铁蛋白及抑制自噬可显著抑制锑诱导的神经元铁死亡。抑制NCOA4有效抑制锑暴露介导的铁蛋白降解和铁死亡。结论锑通过NCOA4依赖的方式激活铁自噬导致神经元细胞铁死亡。

目的:探讨子宫内膜癌相关错配修复基因突变情况、微卫星状态及二者与临床病理特征关系,发现与MMR相Pexidartinib关的高频突变基因及MMR基因新的突变位点,为子宫内膜癌的治疗寻找有效新靶点,指导临床对患者进行个性化治疗。方法:选取2014年12月-2021年3月北部战区总医院244例子宫内膜癌患者活检组织,采用芯片捕获测序方法检测子宫内膜癌相关的212个基因突变情况及MSI检测,免疫组化法对48例全子宫切除标本的错配修复蛋白进行检测。结果:244例子宫内膜癌样本中有160例发生MMR基因突变,160例样本共发生3602次基因突变,MLH1、MSH2、MSH6、PMS2突变病例占比依次为25%(40/160)、45.6%(73/160)、37.5%(60/160)、25%(40/160),MSH2突变频次最高。MMR突变伴发高频突变基因前15位分别为PTEN、BIRC5、ARID1A、PIK3CA、TSC2、BRCA2Unlinked biotic predictors、CTNNB1、PIK3R1、POLE、ATM、AXIN2、CHD4、IRS2、COL11A2、ARMCX4。单因素分析结果表明,IRS2、CHD4、CTCF基因变异在MMR突变组与MMR未突变组存在差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2发生的致病性突变位点(57)和可能致病突变位点(25)分别为1.8%(1/57)与16%(4/25)、24.6%(14/57)与28%(7/25)、68.4%(39/57)与48%(12Bafilomycin A1化学结构/25)、5.3%(3/57)与8%(2/25),MSH6发生致病性突变最多。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2共发现29个新发致病位点(11)与可能致病位点(18),分别为0与5.6%(1/18),18.2%(2/11)与33.3%(6/18),72.7%(8/11)与50%(9/18),9.1%(1/11)与11.1%(2/18)。MMR蛋白表达缺失组与MMR蛋白表达正常组,在组织学分级、淋巴结转移组间对照差异显著,具有统计学意义(P<0.05),在年龄、病理分型、肌层浸润、脉管浸润组间对照差异不明显,没有统计学意义(P>0.05);微卫星高度不稳定性在子宫内膜癌的组织学分级、淋巴结转移差异明显,具有统计学意义(P<0.05)。结论:MMR缺陷、微卫星高度不稳定与子宫内膜癌的发展和预后密切相关,且MMR蛋白表达缺失、微卫星不稳定与子宫内膜癌的组织学分级、淋巴结转移呈正相关,因此检测MMR及微卫星状态对子宫内膜癌的临床治疗具有一定意义。