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目的 探讨基于CT影像组学模型在非小细胞肺癌表皮生长medication safety因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变状态中的预测价值。方法 回归性分析2018年8月-2022年3月蚌埠医学院第一附属医院确诊的125例有EGFR基因检测结果 的肺腺癌患者临床及影像资料。其中EGFR突变型32人,野生型93人,将患者按照1:3的比例随机分为测试selleck产品集和训练集。对所有病例进行临床资料及增强CT图像采集,用惠影软件对采集的CT图像进行高标准手动分割,并提取影像组学特征,应用最小绝对收缩和选择算子(least absoluSmoothened Agonist化学结构te shrink-age and selection ope rator,LASSO)算法及5折交叉验证筛选出最佳特征子集,并构建影像组学模型。通过绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC),计算ROC曲线下面积(AUC),评价影像组学特征在EGFR基因突变中的预测效能。结果 非小细胞肺癌EGFR突变预测模型共提取1409个特征,筛选后得到5个最佳影像组学特征用于构建模型,构建的影像组学模型可有效预测肺腺癌EGFR基因突变状态。测试集和训练集在上述模型中ROC曲线下面积(AUC)分别为0.75(95%CI为0.53-0.97)0.80(95%CI为0.70-0.91)。结论 基于CT影像组学模型在非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变状态中拥有较好的预测价值。

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的神经退行性疾病,临床表现主要为认知和记忆障碍。研究表明,AD发病由多种因素共同参与,病理机制十分复杂,单一治疗策略很难有效控制或治愈包括AD在内的多种复杂疾病,因此对于AD的治疗也逐渐转化为关注多环整体治疗策略。酵母β-葡聚糖是一种具有强大生物学活性的多糖,具有抗炎、抗肿瘤、抗癌、免疫调节以及调节肠道菌群等众多生物学作用。基于脑肠轴概念的提出,本研究以APP/PS1小鼠为模式动物,以WT小鼠作为对照,通过测序和代谢组学等方法探究酵母β-葡聚糖对小鼠肠道微生态和神经退行性疾病的影响。1.酵母β-葡聚糖对APP/PS1小鼠认知功能的影响为了探索酵母β-葡聚糖对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响,将SPF级6月龄雄性APP/PS1小鼠给予小分子量β-葡聚糖(S-β-Glu)和大分子量β-葡聚糖(M-β-Glu)进行治疗,具有相同遗传背景的C57BL/6L雄性小鼠(Wild Type,WT)作为对照,给药结束后进行行为学试验评估小鼠学习记忆能力,免疫组化检测海马和大脑皮质中Aβ斑块沉积,免疫荧光检测星型胶质细胞和小胶质细胞的活化情况,免疫印迹(WB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前体蛋白APP和炎症相关蛋白表达水平。结果显示,APP/PS1小鼠在水迷宫试验中每天到达逃生平台所需的时间更长(P<0.05),穿越目标象限和平台的次数减少(P<0.05);在被动回避试验中APP/PS1小鼠进入暗室的潜伏期减少(P<0.05);在新物体试验中减少了对新物体的探索(P<0.05);酵母β-葡聚糖干预可明显改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。同时,APP/PS1小鼠海马和大脑皮质中出现了大量的Aβ斑块沉积以及星型胶质细胞和小胶质细胞的活化,WB和ELISA结果显示APP/PS1小鼠海马和大脑皮质APP和炎症相关蛋白表达上调;β-葡聚糖能明显逆转Aβ斑块沉积以及星型胶质细胞和小胶质细胞的活化,同时下调前体蛋白APP和炎症相关蛋白的水平,说明酵母β-葡聚糖可以改善APP/PS1小鼠学习记忆障碍和神经炎症反应。2.酵母β-葡聚糖对APP/PS1小鼠肠道菌群及其代谢产物的影响为探索酵母β-葡聚糖对APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群及其代谢产物的影响,本研究通过16s基因测序技术分析上一章试验小鼠肠道菌群的组成;通过气相色谱串联质谱(GS-MS)技术测定小鼠结肠内容物中SCFAs和胆汁酸的含量。同时,一部分结肠内容物进行体外厌氧培养,通过GS-MS对培养物中的上清液进行非靶向代谢组学分析。与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠肠道菌群发生明显变化,肠道菌群物种多样性降低,在补充β-葡聚糖后恢复。相较于WT小鼠APP/PS1小鼠结肠内容物中乙酸、丙酸、戊酸、己酸和异戊酸的含量下降,异丁酸和丁酸的含量上升;补充S-β-Glu可增加APP/PS1小鼠丙酸、丁酸、戊酸、异丁酸和异戊酸的含量同时降低乙酸和己酸的含量;补充M-β-Glu可增加APP/PS1肠道内容物中丙酸、戊酸、己酸和异戊酸的含量,减少乙酸、丁酸和异丁酸的含量;APP/PS1小鼠结肠中的次级胆汁酸含量增加,补充β-葡聚糖后降低。这些结果提示酵母β-葡聚糖能够调节肠道菌群,维持SCFAs和胆汁酸平衡。3.小鼠结肠肠道菌群培养物对APP/PS1小鼠认知功能的影响为探索β-葡聚糖治疗后的小鼠肠道菌群培养物对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响,验证β-葡聚糖是否通过肠道菌群代谢产物干预神经炎症。本研究将第二章试验小鼠的肠道菌群培养物的上清液用于治疗6月龄雄性APP/PS1小鼠。所有小鼠给药结束后multiple infections进行行为学试验评估小鼠学习记忆能力,免疫组化检测海马和大脑皮质中Aβ斑块沉积,免疫荧光检测星型胶质细胞和小胶质细胞的活化情况,WB和ELISA检测前体蛋白APP、炎症相关蛋白表达水平。APP/PS1小鼠出现了明显的学习记忆障碍,与之前保持一致,肠道菌群培养物能明显改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。培养物干预也能明显逆转Aβ斑块沉积以及星型胶质细胞和小胶质细胞的活化,同时下调前体蛋白APP和炎症相关蛋白的水平。经酵母β-葡聚糖治疗后的APP/PS1小鼠的结肠肠道菌群培养物的上清液可以Bemcentinib molecular weight提升APP/PS1小鼠的学习记忆能力,表明酵母β-葡聚糖通过改善肠道菌群代谢产物来改善APP/PS1小鼠的神经炎症。4.肠道菌群培养物对LPS损伤的BV2小胶质细胞炎症反应的影响及其机制的研究本研究探索肠道菌群培养物对LPS诱导损伤的BV2细胞的活化和神经炎症反应的影响以及培养物干预小胶质细胞紊乱的机制。将BV2细胞经LPS处理,治疗组在LPS处理SAHA说明书后加入小鼠肠道菌群培养物,检测各组细胞神经炎症反应的相关指标。随后,进行PI3K抑制试验,验证培养物是否通过PI3K/AKT通路发挥神经保护作用。LPS处理的BV2细胞NF-κB和NLRP3的表达显著增加(P<0.05),CD 68出现活化,PI3K的表达升高,AKT出现明显的磷酸化(P<0.05);培养物治疗后,NF-κB和NLRP3的表达显著降低(P<0.05),CD 68活化减少,PI3K和P-AKT在BV2细胞的表达明显下降(P<0.05);经LY294002处理后,培养物的治疗效果减弱。酵母β-葡聚糖通过肠道菌群代谢产物来干预小胶质细胞活化,其分子机制是通过肠道菌群代谢产物调控PI3K/AKT途径实现。综上所述,本研究发现酵母β-葡聚糖通过肠道菌群代谢产物干预APP/PS1小鼠的神经炎症并改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制是肠道菌群代谢产物通过影响PI3K/AKT途径改善神经炎症反应。

TGF-β(transforming growth factor β)/Smad信号通路具有广泛的生物学活性，在调节细胞生长、粘附Gefitinib采购、分化、细胞动态平衡、免疫应答等方面起重要作用。该信号通路活性过高可促使疤痕形Z-VAD-FMK小鼠成、器官纤维化、免疫抑制和晚期癌症进展，而活性过低可导致炎症、发育异常、愈合不良和肿瘤发生。TGF-β/Smad信号通路的作用复杂，在不同情况下可表现为抑制或增强免疫、抑制或增强炎症的作用，但以抑制免疫和抑制炎症为主。在人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染过程中，TGF-β/Smad信号通路与HIV存在复杂的相互作用，HIV蛋白tat和gp120可诱导TGF-β表达；同时，该通路也可能对HIV感染和复制、潜伏病毒库、机体的免疫功能缺陷、HIV相关炎症产生影响。值得注意的是，主要表现为抗炎作用的TGF-β虽然被HIV所诱导，但较高的TGF-β似乎未能抑制HIV相关炎症。迄今有关TGF-β/Smad信号通路与HIV感染Stem Cell Culture进展的相关性尚未清楚，它在HIV感染及相关疾病中的作用及机制还需进一步探讨和验证。本综述对TGF-β/Smad信号通路与HIV感染的相关研究进展进行总结，为更全面了解HIV的致病机制以及探讨艾滋病治疗的新思路提供参考。

目的 探讨4级异柠檬酸脱氢酶（IDH）突变型星形细胞瘤的分子病理学及组织病理学特征。方法 选取2021年7月至2022年7月于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科接受手术治疗，术后病理学整合诊断为4级IDH突变型星形细胞瘤的73例患者为研究对象，分析患者的流行病学及肿瘤的组织病理学特点。采用二代测序的方法检测肿瘤分子病理学特征；采用免疫组织化学染色检测肿瘤细胞特征性的蛋白表达。结果 73例4级IDH突变型星形细胞肿瘤患者的中位发病年龄为38岁；男性占56.2%(41/73);75.3%(55/73)肿瘤位于额Caspase抑制剂叶。形态学结果显示，13.7%(10/73)的肿瘤在镜下未见微血管增生和坏死，表现为2级或3级星形细胞瘤的形态，其他86.3%(63/73)的肿瘤可见微血管增生和坏死，符合4级星形细胞瘤的特点。免疫组化染色结果显示，73例肿瘤IDH1 R132H染色Z-IETD-FMK体外均为弥漫阳性，P53蛋白表达阳性率为88.1%(59/67),α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色体相关基因（ATRX）表达缺失率为83.6%(56/67)。分子病理学检测结果显示，所有患者均为IDH1 R132H突变，76.7%(56/73)的患者O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子区发生甲基化，TP53和ATRX基因的突变率分别为96.6%(57/59)和64.3%(36/56)，细胞周期素依赖性激酶抑制因子2A/B(CDKN2A/B)发生纯合性缺失的比例为46.6%(34/73Transmission of infection)。结论 4级IDH突变型星形细胞瘤在组织病理学方面大部分有坏死和血管增生等高级别肿瘤的特点，少数病例有较低级别星形细胞瘤形态伴分子病理学CDKN2A/B纯合性缺失的特点。对于IDH突变型的星形细胞瘤，进行包括CDKN2A/B拷贝数在内的分子病理检测是有必要的。

目的 探讨外周血CD64指数联合C反应蛋白（CRP）检测对恶性血液病合并细菌感染的诊断价值。方法 选取2020年10月至2022年4月苏北人民医院收入院的恶性血液病合并细菌感染患者50例为观察组，选择同期入院的46例恶性血液病无细菌感染者为对照组，比较两组患者的CD64指数和CRP水平；寻找更多以细菌培养诊断细菌感染为金标准，计算并比较CD64指数、CRP及两者联合检测诊断恶性血液病合并细菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果 与对照组比较，观察组外周血CD64指数及CRP均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）;CD64指数联合CRP水平检测诊断恶性血液病合并细菌感染的灵敏度（88.00%）及阴性预测值（86.96%）均高于传统的CRP检测（72.00%、73.08%），差异均有统计学意义（P<0.05）；联合检测诊断的阳性预测值、特异度低于CD64指数，而灵敏度、阳性预测值及约登指数均高于CD64指数，但差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 外周血CD64指数联合Baf-A1采购CRP检测对恶性血液病合并细菌Low contrast medium感染的诊断具有重要临床价值，其优于传统的CRP检测方法。

丙烯酰胺(Acrylamide,AA)作为热加工食品美拉德反应的重要产物,具有生殖毒性、神经毒性、肝毒性和潜在的致癌性。肝脏是AA代谢的主要场所也是AA攻击的主要靶器官,热加工食品中AA的肝毒性引起广泛关注。AA诱导的肝毒性与氧化应激关系密切,线粒体ROS(mt ROS)引发的线粒体氧化应激是机体氧化应激的主要来源。氧化应激直接参与铁死亡和细胞焦亡等细胞死亡方式。铁死亡依赖铁离子,以脂质过氧化和抗氧化系统失调为特征。氧化应激通过激活炎性小体,诱导炎症因子释放,打开细胞焦亡经典通路。本研究旨在通过建立AA染毒大鼠肝星状细胞(HSC-T6细胞)模型,探究AA对HSC-T6细胞mt ROS释放以及诱导铁死亡、细胞焦亡发生的机制,进一步阐明mt ROS对铁死亡和细胞焦亡的作用,为最终揭示AA肝毒性机制奠定研究基础。本论文主要研究内容及结果如下:(1)AA损伤HSC-T6细胞线粒体功能并释放mt ROS。建立AA(0,0.5,1,2 m M)染毒HSC-T6细胞模型,通过检测LDH、ALT和AST的水平变化,HSC-T6细胞被2 m M AA处理后LDH、ALT和AST水平值分别为对照组的1.4、2.9、3.5倍,确定AA对细胞造成损伤;通过Western Blot考察HSC-T6细胞膜孔蛋白VDAC1表达水平,测定线粒体膜电位(MMP)medullary rim sign,ATP水平以及透射电镜观察线粒体结构,得出AA诱导VDAC1蛋白表达升高,MMP和ATP水平下降,线粒体结构受损,确定AA造成线粒体结构功能损伤;通过检测mt ROS释放水平,确定AA增加mt ROS释放量。(2)AA诱导的mt ROS释放致XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡,引发HSC-T6细胞铁死亡。通过Western Blot对HSC-T6细胞铁死亡关键蛋白表达水平考察,测定HSC-T6细胞GSH、MDA和Fe~(2+),得出AA影响关键蛋寻找更多白表达,提高MDA和Fe~(2+)水平含量,下调GSH水平,确定AA影响HSC-T6细胞XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路;采用5μM铁死亡抑制剂Fer-1,通过Western Blot考察HSC-T6细胞铁死亡关键蛋白表达水平,测定GSH、MDA和Fe~(2+),确定AA通过造成XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡诱导HSC-T6细胞铁死亡;通过加入50μM mt ROS清除剂Mito-TEMPO检测铁死亡关键蛋白表达,得出Mito-TEMPO恢复XCT-GSH-GPX4抗氧化系统,确定AA诱导HSC-T6细Enasidenib采购胞mt ROS释放促进铁死亡的发生。(3)AA诱导mt ROS释放激活NLRP3-caspase1-GSDMD通路致HSC-T6细胞焦亡。通过对SOD酶活性和ROS释放水平检测,得出AA诱导ROS释放量增加,SOD酶活性受到抑制,确定AA诱导氧化应激;通过Western Blot考察NLRP3-caspase1-GSDMD通路相关蛋白表达情况、通过试剂盒检测下游炎症因子水平,发现AA上调NLRP3、GSDMD、caspase1蛋白表达和IL-18、IL-1β炎症因子释放水平,确定AA激活NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路致HSC-T6细胞焦亡;通过加入mt ROS清除剂Mito-TEMPO检测细胞焦亡关键蛋白表达,得出Mito-TEMPO抑制NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路,确定AA诱导HSC-T6细胞mt ROS释放促进细胞焦亡的发生。综上所述,AA通过诱导线粒体功能障碍从而释放mt ROS。mt ROS能够诱导XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡致HSC-T6细胞铁死亡。又通过激活NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路诱导HSC-T6细胞焦亡。

4-叔丁基苯酚(4-tert-butylphenol,4-t BP)是一种广泛用于农业和工业的环境内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs)。4-t BP具有中度生物蓄积性、环境持久性和长期毒性的特点。通过食物链的生物放大效应,4-t BP在鱼类等动物体内高浓度富集,威胁水生动物的健康,如引起代谢性疾病。肝胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是一种复杂的代谢性疾病,与长期暴露于EDCs密切相关。然而,4-t BP是否能诱导肝IR尚不清楚。目前IR被发现与环境污染物诱导的多种细胞生物学途径密切相关,如自噬、细胞钙稳态、和细胞铁死亡。Micro RNA(mi RNA)是肝IR的关键调节因子,也是环境EDCs造成机体损伤的潜在中介因子。在此,本研究建立体内鲤鱼4-t BP暴露模型和体外鲤鱼原代肝细胞,鲤上皮瘤细胞系(epithelioma papulosum cyprini cell line,EPC),及草鱼肝细胞系(grass carp hepatocyte line,L8824)的4-t BP暴露模型。应用组织/细胞染色法、透射电子显微镜、转录组学检测技术、双荧光素酶报告基因检测法、细胞转染技术、实时荧光定量PCR技术、Western blot法、免疫荧光技术、及流式细胞术,检测了肝-体指数(hepatosomatic index,HSI)、血清生化指标、肝脏组织形态学变化、mi RNA和m RNA表达谱、坏死细胞数量及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,构建了mi RNA-m RNA调控网络并进行验证、筛选与检测了肝IR、自噬、钙稳态和铁死亡相关信号转导通路。本研究旨在探索mi RNA-m RNA调控网络是否参与以及调控4-t BP诱导的肝毒性,为4-t BP毒理学研究提供科学依据。同时为IR相关疾病提供可能的预防和治疗靶点,为动物健康养殖提供环境决策依据。主要研究结果如下:(1)4-t BP暴露60天后引起鲤鱼HSI显著增加,提示4-t BP暴露引起鲤鱼肝代谢异常。(2)鲤鱼血清/肝脏生化指标的检测结果显示,4-t BP暴露引起反应肝损伤的血清指标(ALT、AST、LDH和GGT)显著提高,提示4-t BP暴露诱导鲤鱼肝损伤。另外,4-t BP引起IR的血清生化指标FBG和ABT-199核磁FINS水平以及HOMA-IR和HOMA-ISI值的异常,提示4-t BP暴露诱导鲤鱼IR。并且血清和肝脏中脂质生化指标显示,暴露于4-t BP后,TC、TG和LDL-C的水平明显升高,而HDL-C显著降低,该结果进一步为4-t BP暴露诱导鲤鱼肝IR提供了证据。(3)组织病理学观察结果显示,4-t BP暴露后破坏了鲤鱼的肝脏组织形态。另外,在4-t BP暴露的肝组织PAS染色图谱及油红O染色图谱中发现了肝IR的标志性变化,即肝糖原合成减少和肝脏脂质累积。透射电子显微镜下,4-t BP暴露后的肝细胞出现了铁死亡的标志性特征,提示4-t BP诱导肝脏组织损伤,可能与肝IR和细胞铁死亡密切相关。(4)通过筛选与分析mi RNA和m RNA的表达谱,发现70个差异表达mi RNAs和1484个差异表达的m RNAs(符合|log_2fold change|>1和P<0.05)参与了4-t BP诱导的鲤鱼肝毒性的分子机理。其中mi R-363是差异表达最显著的mi RNA,且与IR密切相关。并且对这1481个差异表达的m RNAs进行GO富集分析和KEGG富集分析发现铁死亡、氧化应激、自噬、钙信号以及IR可能参与了4-t BP诱导的鲤鱼肝毒性。(5)使用mi Randa软件预测mi R-363的潜在靶m RNA,结合m RNA测序结果筛选与mi R-363表达趋势相反(即显著上调)的潜在靶m RNA。筛选结果显示PKCδ和CACNA1D可能是mi R-363的靶基因。双荧光素酶报告基因检测及体外细胞转染试验进一步验证了mi R-363/PKCδ轴和mi R-363/CACNA1D轴的存在。(6)根据KEGG富集分析结果和其他研究者的报道,PKCδ和CACNA1D与肝IR密切相关。q RT-PCR技术检测发现4-t BP引起mi R-363表达的下降伴随着PKCδ和CACNA1D表达升高,以及肝IR相关的差异表达的m RNAs(包括TNF-α、TNFR1、IL-6、m TOR、RPS6K和IRS1)的表达水平的变化,提示4-t BP诱导了鲤鱼肝IR。此外,mi R-363的抑制和4-t BP暴露均会损伤肝糖原的合成,而过表达mi R-363可缓解4-t BP诱导的肝糖原合成受损。并且4-t BP与mi R-363 mimic联合处理可以显著改善独立的4-t BP暴露引起的上述肝IR相关因子的表达变化。进一步地,PKCδ特异性抑制剂粗糠柴苦素(rottlerin,Rot)的预处理、以及si RNA PKCδ和si RNA CACNA1D的转染处理均显著逆转了mi R-363 inhibitor导致的IL-6、IRS1、m TOR和RPS6K的m RNA表达的变化。研究结果表明,mi R-363/PKCδ轴和mi R-363/CACNA1D轴参与了4-t BP诱导的肝IR。(7)q RT-PCR技术和Western blot法结果显示4-t BP暴露引起Calpain2和p62的表达显著增加,而ATG7,ATG5,和LC3b的表达显著降低,提示4-t BP诱导了鲤鱼肝脏自噬受损。自噬标志因子(LC3b和p62)的免疫荧光染色显示,mi R-363 mimic预处理后显著缓解了4-t BP刺激导致的LC3b的荧光强度降低和p62的荧光强度增加。过表达mi R-363可以显著改善4-t BP暴露引起的上述自噬相关因子的表达变化。并且,mi R-363 inhibitor显著降低了LC3b的荧光强度,增加了Calpain2和p62的m RNA表达,降低了ATG7、ATG5和LC3b的m RNA表达,这与4-t BP暴露引起的趋势一致。有趣的是,Rot的预处理、以及si RNA PKCδ和si RNA CACNA1D的转染处理均显著逆转了mi R-363 inhibitor导致的上述变化。结果表明,mi R-363/PKCδ轴和mi R-363/CACNA1D轴参与了4-t BP诱导的自噬受损。(8)暴露于4-t BP导致Ca~(2+)信号相关的DEGs(包括CALM2和CAMKII)的表达水平显著增加及Ca~(2+)的荧光强度显著升高。而mi R-363 mimic预处理显著缓解了4-t BP引起的CALM2和CAMKII表达水平的增加和Ca~(2+)的荧光强度的升高。另外,mi R-363 inhibitor显著增加了CALM2和CAMKII的表达水平,以及Ca~(2+)的荧光强度。有趣的是,Rot的预处理、以及si RNA PKCδ和si RNA CACNA1D的转染处理均显著缓解了mi R-363 inhibitor导致的上述变化。研究结果表明,mi R-363/PKCδ轴和mi R-363/CACNA1D轴参与了4-t BP诱导的Navitoclax半抑制浓度细胞钙超载。(9)自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和钙通道阻滞剂硝苯地平(nifedipine,Nif)的添加均显著逆转了4-t BP引起的IR相关基因的表达变化(TNF-α、TNFR1、IL-6、m TOR和RPS6K的表达水平的显著增加,和IRS1的表达显著下降)通过激活自噬和抑制Ca~(2+)通道,这与mi R-363 mimic的效应相一致。结果表明4-t BP通过自噬受损和Ca~(2+)超载诱导了肝IR。(10)根据获得的GO和KEGG富集分析显示,6个差异表达的m RNAs(HSPA5、ATF4、SLC7A11、GCLC、GSS和GPX4)与细胞铁死亡相关。此外,应用流式细胞术和AO/EB染色发现细胞坏死率随4-t BP浓度的升高而明显增加。透射电子显微镜观察L8824细胞发现细胞铁死亡的标志性特征,4-t BP暴露后的肝细胞的线粒体皱缩,线粒体嵴减少,线粒体膜密度增加,这与体内试验的发现一致。并且,4-t BP暴露后导致肝细胞的MMP显著降低,铁死亡相关DEGs(HSPA5、ATF4、SLC7A11、GCLC、GSS和GPX4)的表达水平显著下降。有趣的是,铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)预处理缓解了4-t BP引起的上述趋势,提示4-t BP诱导了肝细胞铁死亡。(11)KEGG和GO富集分析显示,4个差异表达的m RNAs(NCOA4、FTH1、STEAP3和SLC40A1)与铁稳态相关。暴露于4-t BP后,NCOA4和STEAP3的m RNA和蛋白水平均显著升高,而FTH1和SLC40A1的m RNA水平显著降低。另外,4-t BP暴露后,鲤鱼肝组织的总铁含量也显著提高了58.9%。在体外试验中,4-t BP组也表现出与体内试验相同的趋势,有趣的是,Fer-1预处理缓解了4-t BP引起的上述趋势。提示4-t BP诱导肝细胞铁超载,与细胞铁死亡密切相关。(12)试验发现,暴露4-t BP后鲤鱼肝组织的抗氧化酶(SOD、CAT、GPX、GSH和GST)的活性显著降低,说明4-t BP降低鲤鱼肝脏的抗氧化能力。暴露4-t BP引起H_2O_2和MDA水平显著升高,说明4-t BP导致鲤鱼肝脏组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)过度累积和脂质过氧化水平升高。并且,4-t BP诱导鲤鱼肝组织的NO和i NOS活性明显升高,说明4-t BP导致鲤鱼肝脏组织清除活性氮(reactive nitrogen species,RNS)的能力下降。此外,在鲤鱼原代肝细胞中,4-t BP组GPX1、SOD1、CAT、OXR1b和PRDX1水平较对照组显著降低,而ROS水平显著升高。有趣的是,Fer-1预处理后显著缓解了4-t BP诱导的上述变化。上述结果表明4-t BP诱导了鲤鱼肝氧化应激,且与细胞铁死亡密切相关。综上所述,长期暴露于4-t BP会导致鲤鱼HSI升高,血清生化指标异常,提示鲤鱼肝脏损伤。进一步发现4-t BP诱导肝IR、自噬受损和钙超载的发生。在体外,我们进一步证明了4-t BP诱导的上述变化与mi R-363的减少有关。首次验证了mi R-363与PKCδ以及mi R-363与CACNA1D之间的靶向关系。此外,mi R-363 mimic通过抑制PKCδ和CACNA1D缓解了4-t BP诱导的自噬受损、钙超载和肝IR。特异性抑制PKCδ和CACNA1D可缓解mi R-363inhibitor引起的自噬受损、钙超载和肝IR。自噬的激活和Ca~(2+)通道的抑制被发现可以改善4-t BP诱导的肝IR。我们的上述研究结果表明,mi R-363/PKCδ轴和mi R-363/CACNA1D轴通过自噬受损和钙超载参与了4-t BP诱导的肝IR。此Abortive phage infection外,铁死亡是肝IR的诱因之一。本研究发现细胞铁死亡也参与了4-t BP诱导的肝损伤机制,并且Fer-1缓解了诱导肝IR的相关因素(GPX4的下降、铁超载和氧化应激),提示细胞铁死亡可能也参与了4-t BP诱导的肝IR。总之,本研究结果不仅为4-t BP毒理学研究提供了科学依据,为动物健康养殖提供环境决策依据。

商陆是民间使用的传统中医药，具有抗肿瘤、抗炎、泻下、利尿、祛痰平喘、抗病毒、增强免疫力与保护造血功能等作用，常被用于治疗多种疑难杂症。商陆的主要化学活性成分中，商陆皂甙辛、商陆多糖、商陆素可通过促进脾细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞以及造血细胞的增殖分化来调节免疫Staurosporine分子式功能和保护造血功能，凝集素美洲商陆通过下调细胞HLA-DR分子及MHC-I类分子增强免疫功能。免疫性血小板减少性紫癜(Immune thrombocytopenia, ITP)与人体自身的免疫力以及血小板生成息息相关，文章通过查阅近年国内外相关文献，从增强免疫力和保护造血功能两方面分析中药商陆治疗免疫性血小板减少性紫癜的作用机制，归纳分析临床应用以商陆为君药或臣药的方剂治疗免疫性KPT-330血小板减少性紫癜的biopolymer gels经验，以便为免疫性血小板减少性紫癜的临床治疗和研究提供新的相关依据。

背景:铜死亡作为一种新颖的细胞死亡方式,它FUT-175与细胞内的能量代谢和线粒体有关,并在癌症的发生中起作用。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)与肝癌(HCC)的进展和预后有关。但是铜死亡相关的lncRNA在肝癌中的作用和预后价值尚未明确。本研究构建了肝癌中与铜死亡相关lncRNA的预后模型,并且评估该模型的预后价值。方法:我们从TCGA中下载肝癌的mRNA和lncRNA表达谱和相应的临床数据,并获得832个与铜死亡相关的lncRNA。经过单因素,least absolute shrinkage Telaglenastat小鼠and selection operator(LASSO)和多因素Cox回归构建了5个与铜死亡相关的lncRNA预后基因,并根据模型将患者分为高低风险组。采用Kaplan-Meier analysis,receiver operating characteristic(ROC)curve,,C-index,independent prognostic analysis,nomogram model和principal component analysis(PCA)等来评估预后模型的预测能力。同时还探索了该模型的免疫浸润、免疫阻断、药物敏感性、基因突变等情况。最后针对模型中的5个lncRNA,分别对其进行临床预后和单基因Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)分析。结果:高风险组肝癌患者的总体生存期(OS)、无进展生存期(PFS)、疾病特异性生存期(DSS)和无病间期(DFI)较短。风险模型在训练集,验证集和完整集中对肝癌的预测价值良好,训练集(1年:AUC=0.762,3年:ACU=0.725,5年:AUC=0.772),验证集(1年:AUC=0.732,3年:ACU=0.653,5年:AUC=0.590),完整集(1年:AUC=0.752,3年:ACU=0.701,5年:AUC=0.682)。随后我们将风险模型与肝癌临床亚组分别进行讨论,发现在大部分临床亚组分型中,该模型同biosilicate cement样具备良好的预测价值。单因素和多因素分析模型风险和肝癌临床因素对肝癌预后结局的影响,结果表明在三个数据集中,无论是单因素还是多因素分析,模型风险都能独立预测肝癌的生存结局。Nomogram和其校正曲线显示,与未纳入风险模型相比,纳入模型能够更好的评估肝癌患者的整体预后情况。不仅如此,我们还探究了该模型与肝癌免疫的联系,我们发现该模型划分的高低风险组之间存在免疫细胞(imc)和免疫功能(imf)的差异,不仅如此模型高低风险组之间还存在免疫检查点的差异,这为我们提供了该模型的免疫机制,还从侧面说明了该模型作为免疫治疗的价值。为了更好的贴近临床,我们还对高低风险组进行了药物敏感性分析,结果提示Sorafenib和Paclitaxel对高风险患者更有效。结论:构建了肝癌中与铜死亡相关的lncRNA模型,探索了该模型的预后价值和免疫浸润。与肝癌其他临床因素相比,该风险模型的临床和预后价值高于肝癌的其他临床因素,该模型不仅具备诊断价值,而且与肝癌的临床分期,生存预后,免疫浸润,药物敏感性密切相关,其构成模型的5个lncRNA(AC026412.3、AC107021.2、AL355574.1、AL031985.3、AL117336.2)也具备一定的诊断和临床价值,可以作为肝癌的潜在生物标志物,有成为治疗靶点的可能。为进一步研究肝癌患者的预后相关机制提供了一个崭新的角度。

背景:脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是严重的中枢神经系统(central nervous system,CNS)创伤性疾病~([1])。中国SCI的年发病率约为37/100万,给个人和社会带来了沉重的医疗和经济负担~([2])。然而遗憾的是,由于SCI病理机制的复杂性和CNS神经元的不可再生性,SCI的临床治疗缺乏理想的方法。因此,探寻创新有效的 SCI治疗方案仍然是神经科学的重大任务,需要对SCI的病理机制进行深入研究。神经元死亡是SCI后神经功能障碍的直接原因,除了原发性损伤之外,炎症反应、缺血缺氧等也是影响神经元存活的继发性因素~([1])。铁死亡是一种程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),以铁离子过载和活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的积聚诱导细胞发生脂质过氧化为主要特征~([3])。细胞铁死亡参与多种疾病。根据现有研究提示,SCI后组织大量出血、溶血导致损伤局部出现铁离子超载,诱发神经细胞发生铁死亡;同时应激反应激活大量ROS的产生,使用铁死亡抑制剂去铁胺等可抑制铁死亡,从而促进SCI后功能恢复~([4])。小胶质细胞介导的促炎性反应参与脊髓继发性损伤,其中损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DAMPs)与Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)结合~([5]),启动TLRs/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号级联。铁死亡发生常常伴随小胶质细胞的促炎性激活,然而小胶质细胞在SCI后神经元铁死亡过程中发挥的作用及其分子机制尚不清楚。因此,探索小胶质细胞My D88信Indirect immunofluorescence号对SCI后神经元铁死亡的调控作用及其可能的分子机制,可更好地认识SCI继发性损伤机制,并可为新的SCI治疗策略LGK-974分子式和靶点提供研究依据。研究目的:本研究旨在通过小鼠SCI模型和细胞培养实验的研究,阐明小胶质细胞My D88信号对神经元铁死亡发生发展中的调控作用及分子机制,以探寻挽救SCI过程中神经元铁死亡的新靶点。1、建立小鼠SCI模型探讨SCI后神经元铁死亡与小胶质细胞促炎性激活之间的关系。2、通过体内外实验探索促炎性激活的小胶质细胞在神经元铁死亡中发挥的作用与调控机制。研究方法:1、使用小鼠脊髓夹伤模型作为SCI的在体研究模型,使用神经元细胞系SH-SY5Y和小鼠原代神经元氧糖剥夺/复氧模型(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)作为离体实验研究模型。2、BMS(Basso Mouse Scale)评分和步态分析评估小鼠SCI后运动功能恢复情况。3、苏木精伊红染色(hematoxylin eosin,HE)检测小鼠SCI后损伤中心空洞大小。4、通过测定组织铁浓度和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量反映脊髓组织铁积累和抗氧化水平。5、通过蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)及免疫荧光染色实验观察组织和细胞各相关蛋白分子的表达改变情况。6、通过共培养小胶质细胞和神经元细胞观察两者间的互作关系。7、碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色结合流式细胞术观察神经元细胞死亡率。8、CCK8(Cell Counting Kit-8)法检测神经元细胞活力改变情况。9、通过丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4HNE)水平检测神经元内脂质过氧化情况。10、通过BODIPY C11 581/591荧光探针检测神经元内Lipid ROS产生情况。11、用透射电镜观察脊髓神经元细胞内线粒体形态。12、通过荧光探针JC-1检测神经元细胞内线粒体膜电位改变情况。13、引入My D88~(f/f);TMEM119-Cre/ERT转基因小鼠,观察特异性敲除小胶质细胞My D88对SCI后神经元铁死亡的影响。14、用荧光原位分子杂交显示条件敲除小鼠脊髓的My D88 m RNA分布。研究结果:第一部分神经元铁死亡和小胶质细胞My D88信号激活同时出现于脊髓损伤区域用野生型(wild type,WT)小鼠建立SCI模型后,检测组织铁浓度及还原型GSH水平,发现SCI后三天组织铁含量显著升高,还原型GSH明显下降。此外,免疫荧光染色结果显示邻近损伤中心的神经元长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-Co A synthetase long-chain family member 4,ACSL4)表达显示增多。通过SCI小鼠的脊髓免疫荧光染色,我们发现发生脂质过氧化的神经元旁有明显活化的小胶质细胞。Western Blot结果显示,SCI后铁死亡信号激活,同时My D88/NF-κB信号通路显著激活。第二部分促炎性激活的小胶质细胞My D88上调促进神经元铁死亡CCK8法检测细胞活力结果显示,OGD/R处理使SH-SY5Y细胞活力降低;而使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的小胶质细胞条件培养基(conditional medium,CM)可以在OGD/R基础MS-275细胞培养上进一步显著降低SH-SY5Y细胞活力。PI染色后进行流式分析结果同样表明,在OGD/R处理的基础上,LPS刺激过的小胶质细胞CM可以进一步提高SH-SY5Y细胞死亡率。相一致的,Western Blot检测表明,CM培养的SH-SY5Y细胞中铁死亡分子谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase4,GPX4)的蛋白水平显著下降。另外,被LPS刺激后,促炎性激活的小胶质细胞My D88、NF-κB p65、i NOS表达显著升高;而在My D88抑制剂ST2825作用下,LPS刺激的小胶质细胞促炎性激活被显著抑制,而且这种小胶质细胞的CM不会进一步加剧OGD/R的SH-SY5Y细胞活力下降和死亡率升高。相似的,用Transwell将OGD/R处理的神经元与LPS处理的小胶质细胞共培养后,神经元细胞活力进一步下降,死亡率进一步升高。ST2825可以明显抑制小胶质细胞因LPS刺激而升高的My D88/NF-κB表达及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)和细胞因子IL-1β的表达;将其与OGD/R处理的神经元共培养后,神经元细胞活力下降和死亡率升高的现象有所改善。细胞免疫荧光染色显示,共培养的神经元细胞Lipid ROS的表达显著降低,提示神经元脂质过氧化被抑制。检测神经元的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量进一步证明,小胶质细胞My D88信号上调促进共培养的神经元脂质过氧化。Western Blot证明,抑制小胶质细胞My D88表达后,共培养的神经元铁死亡信号被明显抑制。荧光染色检测神经元线粒体膜电位JC-1证明促炎性活化的小胶质细胞进一步损伤神经元线粒体。第三部分小胶质细胞特异性My D88缺失抑制SCI后神经元铁死亡,并促进运动功能恢复他莫昔芬灌胃诱导TMEM119-Cre ERT;My D88~(flox/flox)转基因小鼠小胶质细胞中My D88的特异性敲除(My D88 CKO),通过荧光原位分子杂交和Western Blot证明特异性敲除小胶质细胞My D88的转基因小鼠构建成功。用该小鼠建立SCI模型比对照小鼠更早出现后肢站立、运动功能恢复更快且更好;HE染色也证明My D88 CKO小鼠SCI后脊髓组织损伤空洞较My D88 f/f小鼠的空洞更小。透射电镜结果证明,My D88 CKO小鼠SCI急性期损伤周边神经元异常线粒体较少,线粒体缩小程度下降。组织Western Blot检测进一步证实,My D88 CKO SCI小鼠SCI较同窝对照组脊髓My D88/NF-κB通路明显抑制,同时铁死亡信号通路同样明显减弱,损伤中心附近神经元脂质过氧化减轻,与还原型GSH的检测结果也相一致。第四部分小胶质细胞My D88信号参与脊髓损伤后神经元铁死亡的潜在机制在小胶质细胞与OGD/R处理的神经元共培养体系中,Western Blot与细胞免疫荧光染色表明,LPS刺激使小胶质细胞中的铁调素(hepcidin)表达升高,而与LPS激活的小胶质细胞共培养的神经元铁转出蛋白(ferroportin,FPN)表达在OGD/R基础上显著下降,转铁蛋白受体(transferrin receptor,Tf R)显著升高。但是当小胶质细胞My D88受到抑制时,hepcidin的表达也显著下降,同时,神经元下降的FPN和升高的Tf R也被逆转。脊髓组织Western Blot结果同样显示,SCI后My D88 f/f组和My D88 CKO组hepcidin都明显上调,然而,与My D88 f/f SCI组相比,My D88 CKO SCI组脊髓hepcidin表达受到明显抑制。相应的,在My D88 f/f小鼠中,SCI后表现为FPN的下降和Tf R的升高。但在My D88 CKO SCI小鼠中,与My D88 f/f小鼠相比,FPN的和Tf R的改变同样被显著逆转。结论:SCI急性期神经元发生铁死亡,伴随邻近的小胶质细胞活化和My D88信号通路激活的结果提示SCI引起的小胶质细胞活化与神经元铁死亡之间的密切关系。细胞培养实验证明了小胶质细胞促炎性活化能促进神经元在OGD/R基础上进一步发生铁死亡。抑制小胶质细胞My D88表达可以明显抑制神经元铁死亡发生,证明小胶质细胞介导的My D88信号在神经元铁死亡中发挥关键作用。TMEM119-Cre ERT;My D88~(flox/flox)转基因小鼠特异性敲除小胶质细胞My D88能够显著下调SCI急性期神经元铁死亡基因,明显促进SCI后运动功能恢复,从而用在体实验证明了小胶质细胞My D88信号的上调在SCI后促进脊髓神经元铁死亡,而下调小胶质细胞My D88信号可减轻神经元铁死亡。小胶质细胞My D88信号与神经元铁死亡的互作主要由IL-1β/hepcidin/FPN轴调控。本研究为SCI中神经元铁死亡的调控机制提供了新的认识,可望为未来治疗SCI提供新的思路和靶点。