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研究背景和目的紫外线辐射与许多皮肤疾病的发病机制和病情加重密切相关,过量的紫外线辐射诱发皮肤急性炎症反应,如日晒伤。中波紫外线(UVB)的穿透力较低,在UVB照射后,组织损伤主要集中在表皮层。作为表皮中的主要构成细胞,角质形成细胞积极参与维持皮肤组织中微环境的平衡。细胞死亡是皮肤遭受UVB辐射损伤后,角质形成细胞发生的关键事件之一。长期以来,细胞凋亡一直是暴露于UVB辐射的皮肤角质形成细胞中唯一被发现的一种调节性细胞死亡方式。近期,包括我们课题组在内的研究表明,UVB辐射可以诱导角质形成细胞发生GSDME介导的焦亡。同时,我们的前期研究观察到,局部应用二甲双胍对UVB引起皮肤损伤中的角质形成细胞死亡有保护作用。然而,二甲双胍是否对于UVB引起的不同类型的调节性细胞死亡均起到保护作用尚不清楚。已有研究显示miR-133a-3p参与炎症性皮肤病(如银屑病、特应性皮炎)的发病,同时miR-133a-3p也被发现参与了细胞凋亡、GSDMD介导的焦亡等过程。然而,目前仍不清楚miR-133a-3p是否在UVB辐照后对角质形成细胞中同时发生的凋亡和焦亡进行共同调控。本研究旨在明确miR-133a-3p在角质形成细胞暴露于UVB辐照后的差异表达,并探究miR-133a-3p调控UVB辐照后角质形成细胞发生凋亡和GSDME介导焦亡的机制及二甲双胍对该过程的调控。研究方法1.建立UVB辐照诱导小鼠皮肤发生急性光损伤的模型,同时,局部外用0.6%的二甲双胍乳膏进行治疗,观察小鼠皮肤损伤情况并评分;H&E染色检测局部皮肤组织和细胞形态,测量表皮厚度;实时荧光定量PCR检测miR-133a-3p的水平在各组间的表达差异;RNA原位杂交检测miR-133a-3p在各组间的表达及定位。并探究角质形成细胞是否发生凋亡和GSDME介导的焦亡,Western blot检测小鼠暴露皮肤的表皮中,凋亡和GSDME介导的焦亡标志性蛋白的水平;免疫荧光检测局部皮肤组织中cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平及定位。2.在UVB辐照诱导小鼠皮肤发生急性光损伤的模型中皮内注射agomir miR-133a-3p,观察小鼠皮肤损伤情况并评分;H&E染色检测局部皮肤组织和细胞形态,测量表皮厚度。进而探究角质形成细胞的死亡是否受到miR-133a-3p抑制,TUNEL染色检测局部皮肤组织中表皮细胞的总体死亡水平;Western blot检测小鼠暴露皮肤的表皮中,凋亡和GSDME介导的焦亡标志性蛋白的水平。3.建立UVB辐照诱导体外人角质形成细胞系HaCaT细胞死亡的模型,同时,设置辐照后加入二甲双胍的处理组作为抑制获悉更多HaCaT细胞死亡的对照,台盼蓝染色检测细胞的总体死亡水平;Western blot检测细胞中凋亡和GSDMPulmonary infectionE介导的焦亡标志性蛋白的水平;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-133a-3p的水平;HaCaT细胞与THP-1细胞共培养,检测THP-1细胞贴壁的水平。4.在 HaCaT 细胞中转染 miR-133a-3p mimic 或 inhibitor,探究 miR-133a-3p 对UVB辐照诱导HaCaT细胞死亡的影响;在转染miR-133a-3p inhibitor的UVB辐照HaCaT细胞中加入二甲双胍,验证miR-133a-3p是否参与二甲双胍的细胞死亡保护效应。Western blot检测上述体系中凋亡和GSDME介导的焦亡标志性蛋白的水平。5.生物信息学预测miR-133a-3p可能的目标靶分子,进行双荧光素酶Compound 3作用报告基因实验验证靶分子CYLD。在HaCaT细胞中转染miR-133a-3p mimic或inhibitor,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR-133a-3p水平改变对CYLD表达的影响。在agomir miR-133a-3p治疗的UVB辐照小鼠模型中,Western blot检测小鼠暴露皮肤的表皮中CYLD蛋白水平。在HaCaT细胞中转导含有shRNA的慢病毒敲降CYLD,以及在CYLD敲降的HaCaT细胞中转染miR-133a-3p inhibitor,验证CYLD是否参与miR-133a-3p对UVB辐照细胞死亡的保护效应,Western blot检测上述体系中凋亡和GSDME介导的焦亡标志性蛋白的水平。研究结果1.UVB辐照诱导小鼠发生急性皮肤损伤,在局部应用二甲双胍治疗后好转。表皮中miR-133a-3p的水平在UVB辐照后降低,局部应用二甲双胍治疗后恢复。UVB辐照诱导表皮角质形成细胞发生凋亡和GSDME介导的焦亡,在局部应用二甲双胍治疗后被抑制。2.皮内注射agomirmiR-133a-3p缓解了 UVB辐照小鼠引起的皮肤急性光损伤,降低了表皮角质形成细胞的总体死亡水平,并抑制了角质形成细胞发生凋亡和GSDME介导的焦亡。3.UVB辐照诱导HaCaT细胞发生凋亡和GSDME介导的焦亡,伴随HaCaT细胞中miR-133a-3p的水平下降,同时可以诱导与HaCaT细胞共培养的THP-1单核样悬浮细胞发生贴壁,这些效应在二甲双胍处理后被抑制。4.miR-133a-3p的高表达或抑制分别减少或促进UVB辐照诱导HaCaT细胞发生凋亡和GSDME介导的焦亡。在miR-133a-3p抑制的HaCaT细胞中,二甲双胍处理对UVB诱导凋亡和GSDME介导的焦亡的保护效应被抑制,提示miR-133a-3p参与二甲双胍的细胞死亡保护效应。5.miR-133a-3p与CYLD 3′-UTR区域结合。miR-133a-3p的高表达或抑制分别减少或促进HaCaT细胞中CYLD的表达。皮内注射agomir miR-133a-3p减少了表皮CYLD的表达。在CYLD敲降的HaCaT细胞中,miR-133a-3p抑制对UVB诱导凋亡和GSDME介导的焦亡的加重效应被抑制。结论1.miR-133a-3p在UVB辐照的皮肤组织表皮中降低,恢复miR-133a-3p的水平可以减轻UVB引起的皮肤损伤。2.在UVB引起的皮肤损伤中,miR-133a-3p同时抑制角质形成细胞发生凋亡和GSDME介导的焦亡,并参与二甲双胍对细胞死亡的保护作用。3.CYLD是miR-133a-3p的靶分子之一,参与miR-133a-3p抑制UVB引起的角质形成细胞凋亡和GSDME介导焦亡的效应。

目的 探讨外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 选取吉安市中心人民医院2019年1月至2022年12月收治的39例肝癌(HCC)患者癌组织及癌旁组织，采用差速离心法提取外泌体并鉴定，qRT-PCR检测肿瘤组织及外泌体中miR-150-5p和p53表达；采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与p53的互作；培养人肝癌细胞株(HCCLM3),给予癌组织及癌旁组织分离提取的外泌体处理(Exo~(Nor)和Exo~(HCC)),同时给予GW 4869抑制细胞本身分泌外泌体，激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪；同时采用脂质KPT-330研究购买体3000向HCCLM3细胞转染miR-150-5p mimicBaricitinib体外s和miR-150-5p inhibimedial geniculatetor; Transwell检测肝癌细胞迁移及侵袭能力，CCK-8检测细胞增殖，采用流式细胞术检测细胞凋亡率；qRT-PCR检测各组细胞miR-150-5p和p53表达，Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和p53蛋白表达。结果 HCC组织中提取的外泌体miR-150-5p相对表达量明显高于邻近正常癌旁组织；与癌旁组织提取的外泌体相比，HCC细胞系HCCLM3能摄取肿瘤组织提取的外泌体miR-150-5p,从而增加细胞的增殖和迁移能力。外泌体能携带miR-150-5p并靶向负调控p53蛋白；共孵育Exo~(HCC)或转染miR-150-5p mimics组HCCLM3细胞中N-cadherin表达较对照组明显降低，E-cadherin表达较对照组明显升高，而miR-150-5p inhibitor抑制了肿瘤的迁移和增殖能力，促进肿瘤细胞凋亡。结论 HCC细胞分泌的外泌体可被周围肿瘤细胞内吞；肝癌细胞分泌的外泌体及过表达肝癌细胞中的miR-150-5p可以靶向抑制周围细胞p53表达，增加细胞迁移及侵袭。

目的 探索DDX46基因与TE-1食管鳞状细胞癌（鳞癌）细胞侵袭和转移行为的相关性及可能的分子机制。方法 荧光标记shRNA慢病毒转染TE-1食管鳞癌细胞敲减DDX46基因为实验组（shDDX46组），空载体转染为对照组（shCtrl组）。镜下绿色荧光蛋白表达率评价细胞转染效率，实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法（Western blotting,WB）分别检测DDX46基因在mRNA和蛋白表达水平的敲减效率。采用划痕实验、侵袭实验、Transwell小室实验检测DDX46基因敲减前后TE-1食管鳞癌细胞侵袭和转移能力的变化。采用生物信息学方法进行经典通路分析探讨信号通路的变化，进一步通过WB检测纤连蛋白表达，探讨DDX46在食管鳞癌细胞侵袭和转移过程中可能存在的作用机制。结果 shRNA慢病毒转染TE-1食管鳞癌细胞后DDX46基因在mRNA和蛋白水平上的表达受到显著抑制。划痕实验提示shDDX46组TE-1食管鳞癌细胞在划痕后8 h细胞迁移率相比shCtrl组明显降低（P=0.001）。侵袭实验表明shDDX46组TE-1食管鳞癌细胞在培养24 h后侵袭细胞数量低于shCtrl组（P<0.001）。Transwell实验结果显示shDDX46组在24 h观察点的转移细胞数少于shCtrl组（P<0.001）。经典通路分析结果表明整合素信号通路活性被抑制，进一步探究其作用机制发现，敲Predictive medicine减DDX46基因后与细胞黏附相关的纤连蛋白表达下降11%。结论 DDX46基因与TE-1食管鳞癌细胞的侵袭和转移行为相关，敲减DGNE-140抑制剂DX46基因可能是通过下调整合素通路信号，降低细胞黏附性及细胞骨架重构，从而抑制食管鳞癌细胞侵Galunisertib体内袭和转移过程。

目的 探讨心脏瓣膜疾病患者术后住院期间发生消化道大出血对预后的影响及其危险因素。方法 纳入首都医科大学附属北京安贞医院2016年1月1日至2022年7月31日术后住院期间发生消化道大出血Coroners and medical examiners的131例心脏瓣膜疾病患者作为研究组，并按1:2选取接受相同手术方式且未发生消化道大出血的271例心脏瓣膜疾病患者作为对照组。比较两组患者基础疾病、手术相关指标、术后并发症及预后等临床资料。采用单因素和多因素logistic回归分析探讨心脏瓣膜疾病患者术后住CP-690550配制院期间发生消化道大出血的危险因素，并绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线，计算曲线下面积（area under the curve,AUC），评估患者术后住院期间发生消化道大出血对预后的影响。结果 心脏瓣膜疾病患者术后住院期间发生消化道大出血的危险因素包括重症肺炎（OR=7.293,95%CI 3.545～15.004,P<0.001）、Ⅱ期或Ⅲ期急性肾功能不全（OR=4.219,95%CI2.245～7.932,P<0.001）、术后凝血功能异常（OR=3.205,95%CI1.648～6.231,P=0.001）、应用华法林（OR=0.236,95%CI0.106～0.524,P<0.001）、既往心房颤动（OR=1.869,95%CI1.015～3.441,P=0.045）、心脏手术（OR=2.079,95%CI1.037～4.166,P=0.039）和术前射血分数降低（OR=0.964,95%CI0.934～0.995,P=0.023），联合上述指标绘制ROC曲线，其AUC为0获悉更多.870(95%CI 0.829～0.912,P<0.001)。研究组患者的死亡率（20.6%）、病重转院率（42.7%）和术后住院天数[（20.76±15.85）d]均高于对照组[分别为1.1%,5.2%,(9.47±4.86)d]，差异有显著性（P<0.001）。结论 心脏瓣膜疾病患者术后住院期间发生消化道大出血与死亡率增加和住院时间延长相关。重症肺炎、Ⅱ期或Ⅲ期急性肾功能不全、术后凝血功能异常、应用华法林、既往心房颤动、心脏手术和术前射血分数降低是心脏瓣膜疾病患者术后住院期间发生消化道大出血的危险因素。

目的：探讨P53、Myc、BCL2在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及对预后的影响。方法：选取40例弥漫大B细胞淋巴瘤患者，收集selleck产品患者的淋巴结组织制作成组织切片，按照二步法免疫组化检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的P53、Myc、BCL2表达，予以CHOP或R-CHOP方案化疗6～8个周期，观察患者P53、Myc、BCL2的阳性表达率，并分析P53、Myc、BCL2表达与临床资料及疗效之间的关系，比较双表达与三表达患者的生存时间。结果：P53、Myc、BCL2的阳性表达率分别是37.50%(15/40)、42.50%(17/40)、47.50%(19/40)。P53、Myc、BCL2表达在性别、年龄、Hans分型、分化程度、临床分期方面无显著差异(P>0.05Ferrostatin-1半抑制浓度),在疗效、风Bioactive coating险程度、2年无进展生存期(PFS)率及2年总生存(OS)率方面差异有统计学意义(P<0.05)。双表达的生存时间均短于非双表达组，三表达的生存时间均短于非三表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：P53、Myc、BCL2在弥漫大B细胞淋巴瘤中呈异常表达，初步认定其表达与疗效、预后存在一定关联。

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是以骨髓中的克隆性浆细胞异常积聚并过度分泌一种单克隆免疫球蛋白为特征的恶性血液肿瘤。第二代度胺类免疫调节剂来那INCB018424说明书度胺(Lenalidomide,LENA)为MM的临床一线用药,通过泛素-蛋白酶体途径实现对底物蛋白IKZF1和IKZF3的降解,从而抑制MM细胞增殖。度胺类药物临床使用中不仅存在原发性耐药现象,同时存在长期使用后出现的获得性耐药问题。究其原因耐药问题的出现,常伴随着度胺类化合物对肿瘤细胞增殖起关键作用的IKZF1和IKZF3等底物蛋白降解能力的下降,从而降低药物的治疗效果。因此,对度胺类化合物不敏感和耐药的MM患者来说,聚焦度胺类化合物的底物蛋白,研究开发更有效的药物十分必要。雷公藤内酯酮(Triptonide,TPN)为卫矛科植物雷公藤的主要有效成分之一,具有抗肿瘤、避孕和免疫抑制等药理活性,本实验前期发现TPN对MM细胞有较强的增殖抑制作用,进一步研究发现其可通过抑制MM细胞内IKZF1和IKZF3的基因转录来降低相关蛋白的表达,存在克服MM细胞对度胺类化合物耐药的可能。本课题从临床上实际存在的MM对度胺类化合物耐药问题的角度出发,评价TPN对原发性和获得性耐药多发性骨髓瘤细胞的增殖、周期、凋亡及蛋白表达的影响,为解决目前临床上出现的MM患者对度胺类化合物的耐药问题提供实验数据上的支撑。目的:探讨TPN对度胺类药物原发性耐药RPMI-8226细胞、获得性耐药NCI-H929R细胞增殖的作用及机制。方法:MTS比色法检测化合物对MM.1S、RPMI-8226、NCI-H929和NCI-H929R细胞增殖能力的影响;Western blot法检测化合物对MM.1S、RPMI-8226、NCI-H929和NCI-H929R细胞内IKZF1、IKZF3、Caspase3和cleaved-caspase3蛋白表达的影响;RT-q PCR法检测TPN对MM.1S细胞内IKZF1和IKZF3基因转录的影响;流式细胞术检测LENA、POMA和TPN对MM.1S、RPMI-8226、NCI-H929和NCI-H929R细胞周期与凋亡的影响。结果:1.TPN具有较强的抑制度胺类药物敏感的MM.1S细胞增殖的能力,并可通过抑制细胞内IKZF1和IKZF3的基因转录来降低蛋白的表达基于表型筛选策略对部分中药成分抗MM细胞增殖活性进行测试,并从临床使用安全性角度考虑,最后选取了TPN作为主要研究对象,结果显示TPN对MM.1S细胞具有较强的增殖抑制作用,究其原因TPN可抑制细胞内IKZF1和IKZF3的蛋白表达,这一现象与度胺类药物特点一致。而进一步的机制研究发现,TPN通过下调IKZF1和IKZF3 m RNA转录水平而抑制相关蛋白的表达,这一特点证实TPN具有不同于度胺类药物抑制IKZF1和IKZF3的蛋白表达的作用机制,提示TPN在耐药细胞株上同样具有抑制相关蛋白表达的能力。2.TPN抑制原发性耐药细胞RPMI-8226细胞增殖,促进RPMI-8226细胞凋亡LENA和POMA可通过降解度胺类化合物敏感MM细胞MM.1S细胞内IKMedial preoptic nucleusZF1和IKZF3抑制MM.1S细胞增殖,对细胞G_0/G_1期有阻滞作用,可促进MM.1S细胞凋亡;而对RPMI-8226细胞内IKZF1和IKZF3降解作用变弱且无明显增殖抑制效果,同时对细胞周期及凋亡均无明显影响。相较于度胺类药物,TPN对MM.1S和RPMI-8226细胞均有较强的增殖抑制作用,并可抑制细胞内IKZF1和IKZF3蛋白表达,促进细胞凋亡,低浓度下可阻滞MM.1S的G_Tezacaftor0/G_1期,可促进细胞内cleaved-caspase3的表达,提示TPN可通过抑制IKZF1和IKZF3蛋白表达抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,说明TPN不仅对可强效抑制度胺类药物敏感多发性骨髓瘤细胞的增殖,还可克服度胺类药物原发性耐药问题。3.TPN抑制获得性耐药细胞NCI-H929R细胞增殖,促进NCI-H929R细胞凋亡通过200 nM POMA长期给药构建NCI-H929 POMA耐药细胞株NCI-H929R,Western blot结果显示POMA耐药后细胞内CRBN表达量明显减少。在NCI-H929细胞中,POMA可通过降解细胞内IKZF1和IKZF3,促进NCI-H929细胞凋亡而抑制NCI-H929细胞增殖,;而在NCI-H929R细胞内,POMA对细胞内IKZF1和IKZF3基本无降解作用并对细胞增殖无明显影响,同时对NCI-H929R的细胞周期及凋亡皆无明显影响。TPN对NCI-H929和NCI-H929R细胞均有较强的增殖抑制作用,并均可抑制细胞内IKZF1和IKZF3蛋白表达,促进细胞凋亡,并可促进细胞内cleaved-caspase3的表达,提示TPN可通过抑制IKZF1和IKZF3蛋白表达抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,克服多发性骨髓瘤对度胺类化合物的获得性耐药问题。结论:TPN可通过抑制MM细胞内IKZF1和IKZF3基因的转录,下调相关蛋白的表达,抑制MM细胞增殖,促进MM细胞凋亡,可克服MM对度胺类化合物的原发性耐药和获得性耐药问题。

目的:本研究旨在确定老年小细胞肺癌(SCLC)患者早期死亡的危险因素,并构建全因早期死亡和癌症特异性早期死亡的列线图预测模型,以帮助有效管理这类患者。方法:老年SCLC患者的数据是从SEER数据库中提取的。这些患者被随机分配到一个训练队列和一个验证队列。在训练队列中,采用单因素和逐步多因素Logistic回归分析,以确定老年SCLC患者早期死亡的独立危险因素,并构建列线图来预测早期死亡的总体风险。采用接受者操作特征曲线(ROC)、校准曲线、决策曲线分析(DCA)、综合判别改善指数(IDI)和净重新分类指数(NRI)对列线图的效能进行验证。结果:在入组的2077名老年SCLC患者中,有773名患者在首次诊断后三个月内去世,其中713名患者死于癌症特异性原因。分析结果显示,较高的AJCC分期、脑medicare current beneficiaries survey转移、肺转移以及未采取手术、化疗或CP-690550作用放疗等因素,均与全因早期ICI 46474化学结构死亡和癌症特异性早期死亡的高风险相关(P<0.05)。这些确定的因素被用于构建两个列线图,以预测全因和癌症特异性早期死亡的风险。ROC表明,列线图在预测全因早期死亡(训练队列中的AUC=0.820,验证队列中的AUC=0.841)和癌症特异性早期死亡(训练队列中的AUC=0.814,验证队列中的AUC=0.839)方面表现出很高的辨别能力。校准曲线、DCAs、NRI和IDI的结果也显示了两组列线图具有良好的预测能力和临床实用性,且优于常用的TNM分期系统。结论:本研究所构建的列线图预测模型可以有效协助临床医生预测老年SCLC患者早期死亡风险,还可帮助医生筛选风险较高的患者并为其制订个性化的治疗方案。

对房山紫堇Corydalis fangshanenNovel coronavirus-infected pneumoniasis地上部分化学成分及其体NN2211 molecular weight外抗乳腺肿瘤细胞活性进行研究。采用各种色谱分离技术对乙酸乙酯和正丁醇两个萃取部位进行系统分离纯化，通过多种波谱数据(1D、2D NMR、MS、IR、UV)鉴定化合物结构，从房山紫堇乙酸乙酯和正丁醇两个部位中鉴定了17个化合物，分别为7-acetyl thalifoline(1)、pycnarrhine(2)、corynoxiGSK2118436临床试验dine(3)、trans-isocorypalmine N-oxide(4)、四氢巴马汀(5)、四氢药根碱(6)、liriotulipiferine(7)、异波尔定碱(8)、乌药碱(9)、脱氢甲卡维丁(10)、feruloylputrescine(11)、木黄酮(12)、二甲基咖啡酸(13)、4-羟基-3-甲氧基桂皮酰基-β-D-葡萄糖苷(14)、水仙苷(15)、丁香脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(16)、异落叶松脂醇9-O-β-D-葡萄糖苷(17)。其中化合物1作为天然产物首次报道，2～17是首次从房山紫堇中分离得到。结合体外MTT法评价单体化合物对人乳腺癌肿瘤细胞(MDA-MB-231、MCF-7)抑制作用。结果显示化合物2～10、13、15～17对MDA-MB-231细胞有一定的抑制作用，其IC_(50)值范围为8.00～79.99μmol/L,化合物2～10、16、17对MCF-7细胞有抑制作用，IC_(50)值范围为7.29～86.91μmol/L。

丙烯酰胺(Acrylamide,AA)作为热加工食品美拉德反应的重要产物,具有生殖毒性、神经毒性、肝毒性和潜在的致癌性。肝脏是AA代谢的主要场所也是AA攻击的主要靶器官,热加工食品中AA的肝毒性引起广泛关注。AA诱导的肝毒性与氧化应激关系密切,线粒体ROS(mt ROS)引发的线粒体氧化应激是机体氧化应激的主要来源。氧化应激直接参与铁死亡和细胞焦亡等细胞死亡方式。铁死亡依赖铁medicinal cannabis离子,以脂质过氧化和抗氧化系统失调为特征。氧化应激通过激活炎性小体,诱导炎症因子释放,打开细胞焦亡经典通路。本研究旨在通过建立AA染毒大鼠肝星状细胞(HSC-T6细胞)模型,探究AA对HSC-T6细胞mt ROS释放以及诱导铁死亡、细胞焦亡发生的机制,进一步阐明mt ROS对铁死亡和细胞焦亡的作用,为最终揭示AA肝毒性机制奠定研究基础。本论文主要研究内容及结果如下:(1)AA损伤HSC-T6细胞线粒体功能并释放mt ROS。建立AA(0,0.5,1,2 m M)染毒HSC-T6细胞模型,通过检测LDH、ALT和AST的水平变化,HSC-T6细胞被2 m M AA处理后LDH、ALT和AST水平值分别为对照组的1.4、2.9、3.5倍,确定AA对细胞造成损伤;通过Western Blot考察HSC-T6细胞膜孔蛋白VDAC1表达水平,测定线粒体膜电位(MMP),ATP水平以及透射电镜观察线粒体结构,得出AA诱导VDAC1蛋白表达升高,MMP和ATP水平下降,线粒体结构受损,确定AA造成线粒体结构功能损伤;通过检测mt ROS释放水平,确定AA增加mt ROS释放量。(2)AA诱导的mt ROS释放致XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡,引发HSC-T6细胞铁死亡。通过Western Blot对HSC-T6细胞铁死亡关键蛋白表达水平考察,测定HSC-T6细胞GSH、MDA和Fe~(2+),得出AA影响关键蛋白表达,提高MDA和Fe~(2+)水平含量,下调GSH水平,确定AA影响HSC-T6细胞XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路;采用5μM铁死亡抑制剂Fer-1,通过Western Blot3-Methyladenine价格考察HSC-T6细胞铁死亡关键蛋白表达水平,测定GSH、MDA和Fe~(2+),确定AA通过造成XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡诱导HSC-T6细胞铁死亡;通过加入50μM mt ROS清除剂Mito-TEMPO检测铁死亡关键蛋白表达,得出Mito-TEMPO恢复XCT-GSHTelaglenastat-GPX4抗氧化系统,确定AA诱导HSC-T6细胞mt ROS释放促进铁死亡的发生。(3)AA诱导mt ROS释放激活NLRP3-caspase1-GSDMD通路致HSC-T6细胞焦亡。通过对SOD酶活性和ROS释放水平检测,得出AA诱导ROS释放量增加,SOD酶活性受到抑制,确定AA诱导氧化应激;通过Western Blot考察NLRP3-caspase1-GSDMD通路相关蛋白表达情况、通过试剂盒检测下游炎症因子水平,发现AA上调NLRP3、GSDMD、caspase1蛋白表达和IL-18、IL-1β炎症因子释放水平,确定AA激活NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路致HSC-T6细胞焦亡;通过加入mt ROS清除剂Mito-TEMPO检测细胞焦亡关键蛋白表达,得出Mito-TEMPO抑制NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路,确定AA诱导HSC-T6细胞mt ROS释放促进细胞焦亡的发生。综上所述,AA通过诱导线粒体功能障碍从而释放mt ROS。mt ROS能够诱导XCT-GSH-GPX4抗氧化信号通路失衡致HSC-T6细胞铁死亡。又通过激活NLRP3-caspase1-GSDMD信号通路诱导HSC-T6细胞焦亡。

配位聚合物是由金属离子或者金属簇作为无机金属中心与桥连的有机配体自组装进行相互连接形成的,由于其具有多样的结构、孔径的可调性、稳定性好、有较高的比表面积及孔隙率和可进行后处理修饰等优势,在传感、气体分离与吸附、药物传递、催化、电化学储、磁性能等方面具有广阔的应用前景。发光配位聚合物又称为荧光金属有机框架(LMOFs),其作为金属有机骨架材料的一个重要分支,具有荧光寿命长、量子产率高、对周围环境敏感、成本低和检测过程简单等优点,是传感材料家族的重要成员,可作为荧光传感器检测硝基芳香族化合物、有机胺等有机小分子。在LMOFs构筑的过程中,配体的选择扮演着非常重要的角色,特别是含氮杂环羧酸配体由于其配位原子多样、配位方式丰富而被广泛应用。本文把6-巯基烟酸和5-(1,2,4-三唑-1-基)间苯二甲酸作为有机配体,Zn(Ⅱ)、Mn(Ⅱ)、Cd(Ⅱ)、Cu(Ⅰ)等过渡金属离子以及稀土金属Eu(Ⅲ)为金属中心,利用溶剂热法合成了4种新型的发光配位聚合物,并且通过多种测试手段进行了全面的表征,具体实验内容如下:1.选择6-巯基烟酸(6-mna)作为有机配体,与Cu Cl、Zn(OAc)_2·2H_2O金属盐在溶剂热的条件下合成出一种新颖的含有Cu_6S_6簇和Zn_4en_2(COO)_4的异金属配合物[Cu_6Zn_4(mna)_6(en)_2(H_2O)_4]·2H_2O_n(1);选择6-巯基烟酸(6-mna)作为有机配体,与Cu SCN和Cd(OAc)_2·2H_2O金属盐在溶剂热的条件下合成出三维发光配合物[Cd_4(mna)_4(en)_2]·4H_2O_n(2);选择6-巯基烟酸(6-mna)作为有机配体,与Cu SCN和Mn(OAc)_2·4H_2O金属盐在溶剂热的条件下合成出三维配合物[Mn_3(mna)_3]·4H_2O_n(3)。通过单晶X射线衍射、元素分析、粉末X射线衍射,红外光谱和热重分析对其三种配合物进行了充分表征。有趣的是,配合物1在紫外灯下展现出明显的红色荧光,荧光实验表明,配合物1可有效检测硝基芳香族化合物(NACs),包NSC 119875作用括2-硝基苯酚,4-硝基苯酚,2,4-二硝基氯苯,硝基苯,2-硝基甲苯,4-硝基甲苯,1,3-二硝基苯和五氯硝基苯,对应的Ksv值分别为7.20×10~3M~(-1),5.41×10~3M~(-1),5.31×10~3M~(-1),4.40×10~3M~(-1),4.01×10~3M~(-1),3.96×10~3M~(-1),3.62×10~3M~(-1)和2.33×10~3M~(-1),相应的检出限分别为9.51×10~(-7)M,1.125×10~(-6)M,1.149×10~(-6)M,1.242×10~(-6)M,1.30×10~(-6)M,1.31×10~(-6)M,1.403×10~(-6)M和1.933×10~(-6)M。同时,荧光传感实验表明,配合物2具有良好的黄色发光性能,也可通过荧光猝灭有效检测水中的硝基芳香族化合物(NACs),5个周期的循环实验证明了配合物2具有良好的重现性,可作为检测NACs优异的荧光探针。2.选择5-(1,2,4-三唑-1-基)间苯二甲酸为有机配体,与稀土金属Eu~(3+)在溶剂热条件下合成了1个新的Ln-MOF:[Eu_4(taip)_4(ox)(OH)_2(H_2O)_4]·3H_2O_n(4更多),并用单晶X射线衍射、红外光谱、热重分析和粉末X射线衍射对其结构进行了表征,展示了一个迷人的包含蝴蝶状Eu_4(OH)_2簇的3D网络consolidated bioprocessing结构。由于天线效应,它显示出强烈的红光发射。研究了其在各种有机溶剂中的荧光特性,结果表明它可以作为检测有机胺的荧光传感材料。通过研究其相应的猝灭机理,发现电子转移是其荧光猝灭的主要原因。