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钙调素结合转录因子(CAMTA)是广泛存在于真核生物的重要转录因子。CAMTA参与植株生长发育和胁迫应答等多种生理过程,然而其在果实风味品质形成过程中的功能尚不清楚。芳香物质是影响果实风味的重要因素,其中芳樟醇是桃等果实芳香品质形成的重要物质基础。本研究以‘湖景蜜露’(Prunus persica L.Batsch cv.Hujingmilu)桃果实为研究材料,围绕芳樟醇形成与调控,鉴别参与芳樟醇合成的CAMTA成员,并从转录调控和表观遗传层面解析其对芳樟醇合成的调控机制,主要结果如下:1、鉴定出桃的5个CAMTA基因。桃CAMTA家族成员不均匀地分布在3条染色体上,他们的基因结构具有高度保守性,Pp CAMTAs编码的蛋白存在CG-1、Ca MBD等特征结构域。Pp CAMTAs启动子区域含有大量顺式作用元件,约50%的顺式作用元件能够响应光信号。通过亚细胞定位确定了桃CAMTA蛋白定位在细胞核或质膜上,不同Pp CAMTAs在不同组织、发育阶段、非生物外界刺激中具有差异表达模式。利用拟南芥突变体的异源转基因验证了Pp CAMTA1具有参与低温响应的保守性功能。2、明确转录因子Pp CAMTA1参与桃果实芳樟醇合成。对桃果实挥发性芳香物质合成相关的结构基因RP56976核磁进行启动子分析发现,两个候选结构基因(Pp AAT1和Pp TPS3)的启动子区域存在较多数量的CAMTA结合位点,利用双荧光素酶报告实验,确定了Pp CAMTA1对负责芳樟醇合成的萜类合成酶基因Pp TPS3的启动子具有激活效应。EMSA和酵母单杂交实验证明Pp CAMTA1可以直接结合Pp TPS3的启动子。桃叶片同源瞬时过量表达结果显示,增加Pp CAMTA1表达能够促进芳樟醇合成。利用拟南芥camta2,3突变体,并以拟南芥中同源基因At CAMTA3的启动子驱动Pp CAMTA1表达获得转基因材料,芳樟醇含量显著增加。上述结果表明Pp CAMTA1通过结合并激活结构基因Pp TPS3的启动子转录调控桃果实芳樟醇合成。3、阐明转录因子Pp CAMTA1和其他调控桃果实芳樟醇合成的转录因子(Ppb HLH1、Pp ERF61、Pp MADS2)间的相互关系。利用双分子荧光互补实验(Bi FC)发现转录因子Pp CAMTA1同Ppb HLH1、Pp ERF61之间不存在相互作用关系,结合萤火虫荧光素酶互补成像(LCI)和酵母双杂交实验结果,确定Pp CAMTA1和Pp MADS2存在蛋白互作关系。双荧光素酶报告实验(DLR)表明Pp CAMTA1同Ppb HLH1、Pp ERF61之间也不存在上下游的调控关系,而转录因子Pp MADS2可以激活Pp CAMTA1的启动子活性。EMSA实验进一步显示Pp MADS2可以直接结合Pp CAMTA1启动子。上述结果显示转录因子Pp MADS2与Pp CAMTA1既存在蛋白互作关系,又存在转录调控关系,Pp MADS2通过结合并激活Pp CAMTA1启动子,进而参与调控桃果实芳樟醇的合成。4、揭示Pp CAMTA1参与UV-B调控芳樟醇合成的分子机制。RNA-seq和RT-q PCR结果显示紫外UV-B照射显著抑制Pp CAMTBiotechnological applicationsA1表达,m~6A-seq结果表明UV-B照射提高Pp CAMTA1转录本的m~6A修饰水平。一方面,Bi FC和LCI实验分析表明Pp CAMTA1和光信号通路关键转录因子Pp HY5互作,并且Pp HY5抑制Pp CAMTA1启动子活性,这可能导致UV-B处理后Pp CAMTA1表达下降。另一方面,鉴别出Pp ECT5是包含YTH特征结构域的m~6A结合蛋白,它可以直接结合Pp CAMTA1在m RNA上的m~6A修饰区域,进一步研究发现Pp EC购买BucladesineT5能够促进Pp CAMTA1的m RNA稳定性。UV-B通过抑制Pp ECT5表达,促进Pp CAMTA1转录水平下降,进而造成芳樟醇合成受阻。上述结果表明,Pp CAMTA1参与UV-B调控芳樟醇的合成涉及了转录调控和表观遗传调控两个层面。

目https://www.selleck.cn/products/abt-199.html的 探究冰白含漱液(BBH)在治疗口腔炎症方面的作用机制。方法 使用TCMSP、PubChem、SwissTargetPrediction、GeneCard、Drugbank和OMIM等数据库获得BBH中主要活性成分与口腔炎症相关的潜在靶点，筛选交集靶点构建蛋白质-蛋白质互作网络、中药-成分-靶点-疾病网络，进行基因本体论和京都基因与基因组百科全书富集分析。取核心靶点与其对应化合物分子对接。采用ELISA法检测BBH对炎症因子肿瘤坏死因子α(Human papillomavirus infectionTNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的影响。结果 发现BBH有效成分和口腔炎症交集靶点99个。与其对应化合物分子Crizotinib对接结合能最小的化合物分别是槲皮素、吴茱萸次碱、β-谷甾醇、小檗碱、黄连碱、珊瑚菜素、白屈菜赤碱、右旋龙脑。BBH各浓度IL-6水平均有显著影响，1.500μg/mL、3.125μg/mL浓度组可降低TNF-α水平。结论 BBH通过多靶点和多通路降低口腔炎症的多种指标。

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,以下简写 M.tuberculosis)是人畜共患结核病的病原菌,给食品安全和人类健康带来持续威胁。红汁乳菇(L actarius hatsudake Tanaka)是一种食药同源的乳菇属大型真菌,含有多糖、甾醇、倍半萜、生物碱等功能成分,具有良好的抗炎、抑菌、抗肿瘤和促进植物生长等生物活性。乳菇紫素是红汁乳菇中一种愈创木烷型倍半萜化合物,课题组前期研究表明乳菇紫素对结核分枝杆菌尤其是耐药结核分枝杆菌具有显著的抑制作用,但其抑制机制尚不清楚。探明乳菇紫素抗结核机制可为从可食资源中CB-839体外挖掘高效抗结核功能成分提供理论依据。本文以M tuberculosis H37Ra为目标菌株,通过反向分子对接技术对红汁乳菇中乳菇紫素的抗结核机制进行预测,结合扫描电子显微镜(SEM)以及透射电子显微镜(TEM)、实时荧光定量PCR技术、label-free蛋白质组学技术以及靶向代谢组学技术对对接结果进行验证。具体研究内容如下:(1)通过分子对接预测乳菇紫素与M.tubercsulosi的82种靶点蛋白之间的结合能,选出排名前三名的蛋白酶。结果显示,排名前三的蛋白酶为环丙烷霉菌酸合酶2(CmaA2)、烯丙酰基载体蛋白还原酶(InhA)以及甲氧基霉菌酸合酶2(MmaA2),结合能大小分别为-9.6、-9.4及-9.4 kcal/mol,表明乳菇紫素可能通过与以上三种蛋白的活性位点相结合从而抑制了M.tuberculosis细胞壁的正常合成。(2)乳菇紫素处理下M tuberculosis H37Ra形貌及超微结构的变化。通过SEM和TEM观察细胞形貌及超微结构发现乳菇紫素能破坏结核分枝杆菌的细胞形态,裂解细胞壁使内容物流出。(3)乳菇紫素处理下M.tuberculosis H37Ra cmaA2、inhA、mmaA2基因的表达量和蛋白质表达的变化。采用实时荧光定量PCR技术,对反向对接结果所得三种酶的编码基因(cmaA2、inhBayesian biostatisticsA、mmaA2)表达量进行了测定。结果显示乳菇紫素能显著下调目的基因的转录水平。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术对M.tufberculosis H37Ra的蛋白质表达量进行测定,结果显示乳菇紫素可以抑制M.tuberculosis H37Ra的甲基转移酶活性并干扰S-腺苷-L-蛋氨酸的甲基化,阻碍甲基化生物过程。此外,还发现乳菇紫素可以下调CmaA2酶及MmaA2酶的表达量,上调InhA酶的表达量。(4)乳菇紫素处理下M.tuberculosis H37Ra脂肪酸代谢水平的变化。采用气相selleckchem R428色谱-质谱联用(GC-MS)技术对M tuberculosis H37Ra的脂肪酸进行测定,分析乳菇紫素处理下M tuberculosis H37Ra脂肪酸代谢水平的变化。结果显示乳菇紫素可以显著增加M tuberculosis H37Ra中C18、C20及C22脂肪酸,这表明乳菇紫素可以通过抑制CmaA2及MmaA2酶,破坏脂肪酸FAS-Ⅱ系统的进行,阻断分枝菌酸的合成,从而导致C8、C18及C20脂肪酸作为底物则不断产生并积累。

目的 分析不同药物使用及冲洗方法在儿童过敏性鼻炎的疗效差RAD001生产商异。方法 对180immune evasion例确诊为过敏性鼻炎的患儿随机分为观察组和对照组，在常规治疗即口服抗组胺药物及外喷鼻用糖皮质激素的基础上分别给予生理盐水-布地奈德混悬液负压无创鼻腔冲洗（90例）和生理海水喷鼻（90例），于治疗前及治疗后2周，对患儿的症状计分、鼻腔黏膜反应程度、睡眠质量进行评估分析。结果 治疗后患儿的症状计分、鼻腔黏膜反应程度、睡眠质量较治疗前均好转，差异有统计学意义（P<0.05）。各组间疗效比较，观察组在症状计分、鼻黏膜反应程度、睡眠质量均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 生理盐水-布地奈德混悬液负压无创鼻腔冲洗对过敏性鼻炎患儿的LGX818纯度疗效显著，能明显改善患儿的症状，降低患儿鼻黏膜反应程度，改善患儿的睡眠质量。

[目的]呕吐毒素（deoxynivalenol，DON）C3位羟基的异构化是生物脱毒的关键部位，其中DepA作为DON生物转化中第一步关键限速酶，存在催化活性低的问题，限制了其在食品及饲料加工领域中的应用。本文旨在通过定向进化技术对DOptical biometryepA进行分子改造，以期获得催化活性显著提高的突变酶，提高其工业化应用的潜力。[方法]通过易错PCR和DNA shuffling相结合的方法，构建突变文库，经高通量筛选后，对催化活性明显提高的突变体进行酶学性质表征。同时，采用分子动力学模拟和三维结构模拟分析，探究突变酶催化活性提高的分子机制。[结果]成功筛选到突变酶S2、S10和S12，与野生型相比，比活力分别提高了207%、293%和268%。动力学参数结果显示，突变酶S2、S10和S12的K_(m)值分别为56.89、27.00和40.65 μmol·L~(-1)，是野生型的91.7%、43.5%和65.5%，k_(cat)/selleck HPLCK_(m)值分别为327.30、5selleck抑制剂76.67和380.07 L·mmol~(-1)·s~(-1)，是野生型的1.25、2.20和1.45倍，相比野生型，突变酶亲和力和催化效率均显著提高。此外，采用分子动力学模拟和三维结构模拟分析，发现柔性增加、底物DON的进攻距离缩短、氢键增加、疏水性增加和远端效应是导致其催化活性提高的主要原因。[结论]本研究通过易错PCR和DNA shuffling相结合的定向进化策略有效提高了呕吐毒素解毒酶DepA的催化活性，为其工业化应用提供依据。

恶性肿瘤是危害人类健康的第一大杀手。传统的手术治疗、放疗和化疗是临床治疗的主要手段。然而,化疗对正常细胞毒副作用大以及抗癌药物在人体内非靶向病灶、生物利用率差、肿瘤中低积累等问题,导致现有临床抗癌药物的肿瘤治疗效果并不理想。针对化疗的缺陷,科学家们致力于开发各种纳米载体。尤其是刺激响应纳米载体的开发及应用受到了极大的关注。刺激响应纳米载体可以利用肿瘤特有的微环境,响应释Bafilomycin A1研究购买放所负载的药物,提高药效的同时减少对正常组织的损伤;还能在外源刺激(光、热和声等)下远程可控性、时空选择性地精准触发药物释放。因此,设计新型刺激响应载体,结合多种内源、外源刺激响应手段,用于肿瘤治疗中更具创新性和挑战性。为了进一步完善刺激响应型纳米载体的癌症治疗体系,本文设计了一系列刺激响应纳米载体用于安全高效地杀灭肿瘤细胞,主要内容包括以下几个方面:(1)以负电荷的七取代磺丁基醚β-CD(SBE_7-β-CD)与十六烷基二甲基苄基氯化铵(HDBAC)为构筑块,通过静电相互作用构筑了具有pH响应的纳米粒子(SBE_7-β-CD/HDBAC NPs)。利用UV-vis,FT-IR,XRD,TEM,DLS,Zeta电位对SBE_7-β-CD/HDBAC NPs进行表征。通过疏水相互作用human microbiome包封雷公藤红素(CSL),包封率(EE%)和负载率(DLE%)分别为～89.4%和～26.9%。CSL/SBE_7-β-CD/HDBAC NPs的释放率在pH=7.4时仅为30.1%,而在pH=5.4时可达86.9%。通过动力学方程研究了CSL的持续释放机STM2457使用方法制。溶血实验揭示了CSL/SBE_7-β-CD/HDBAC NPs具有良好的生物相容性。值得注意的是,CSL/SBE_7-β-CD/HDBAC NPs与游离CSL相比,对正常细胞(BEAS-2B)的细胞毒活性减少2倍。对五株肿瘤细胞的细胞毒性明显强于阳性对照组顺铂。对肝癌细胞(SMMC-7721)的细胞凋亡率与游离CSL相似(5μg/m L)。所制备的纳米粒子可以用作持续递送抗肿瘤药物的新型载体。(2)通过阳离子五乙烯六胺β-CD接枝叶酸(PEHA-β-CD-FA)和阴离子十二烷基硫酸钠(SDS)之间的静电相互作用,制备了pH/温度双响应PEHA-β-CD-FA/SDS NPs并进行表征。以抗肿瘤药物羟基喜树碱(HCPT)作为模型药物,EE%和DLE%分别为90.6%和29.5%。在pH=1.2和T=45°C时,HCPT的释放率仅为12.4%,在pH=8.5(模拟肠道微环境)和T=45°C时,HCPT的释放率高达93.6%。负载HCPT的NPs由于接枝FA,导致NPs具有更精确的靶向能力,使其在结肠癌细胞(SW480)中HCPT的累积浓度更高,具有更高的细胞毒活性,而对BEAS-2B毒活性较小。与游离HCPT相比,负载HCPT的NPs对SW480细胞具有较好的促凋亡效果。所制备的NPs将为进一步增强抗结肠癌药物临床疗效提供了新思路。(3)以七取代的6-氨基-6去氧β-CD(AβCD)和透明质酸钠(HA)为构筑块,通过静电相互作用构筑了具有pH/温度/酶三重刺激响应AβCD/HA NPs并进行表征。以盐酸阿霉素(DOX)为药物模型,EE%和DLE%分别为94.6%和32.4%。在模拟肿瘤细胞微环境(pH=8.5,T=45°C,添加HAase)中,DOX的释放率高达96.8%。由于HA在肿瘤细胞中有CD44受体,使得DOX/AβCD/HA NPs具有更精确的靶向能力,从而对肝癌细胞(SMMC-7721)的细胞毒活性高于游离DOX,而对BEAS-2B的细胞毒活性仅为游离DOX的十分之一。这项工作为开发安全、高效的多刺激响应肝癌靶向治疗具有潜在的应用前景。(4)通过结合环糊精衍生物和金属-有机骨架的优势,设计并制备了五乙烯六胺β-CD接枝叶酸(PEHA-β-CD-FA)和磷酸聚乙二醇修饰金刚烷(ADA-PEG(2000)-PA)进行改性的金属有机框架(MIL-101(Fe)-NH_2)刺激响应纳米载体(FACDMOFs)以实现高效的药物负载和可控释放。以甲氨嘌呤(MTX)为药物模型进行吸附,EE%和DLE%分别为46.48%和62.32%。当pH=7.4,T=45℃时,MTX的释放量仅为10.7%。当pH=5.4,T=45℃时,MTX的释放量高达94.2%。与游离MTX相比,FACDMOFs对正常细胞(BEAS-2B)几乎没有毒性。由于FACDMOFs接枝了FA,具有更精确的靶向能力,与游离MTX相比,MTX@FACDMOFs对肝癌细胞(SMMC-7721)的细胞毒活性增强2.6倍。所制备的功能化MOFs对肿瘤治疗提供了潜在的应用价值。

目的观察鸡血藤水提物外用对糖尿病慢性创面脂肪间充质干细胞增殖的影响。方法实验分组:db/m空白组、db/db模型组、鸡血藤水提物高、中、低剂量组(2.0、1.0、0.5 g/ml)、阳性对照组(bFGF)。于小鼠后背制备直径6mm的圆形创面Oncology Care Model后予以药物治疗干预。空白组、模型组外用50μl生理盐水的明胶海绵敷料;鸡血藤水提物组外用50μl鸡血藤水提物的明胶海绵敷料;阳性对照组外用含50μl bFGF(3.6μg/ml)的明胶海绵敷料。检测7天创面愈合率及创面脂肪间充质干细胞数量。结果创面愈合7天,模型组创面愈合率低于空白组,有统计学差异(P <0.01);鸡血藤水提物各组与bFGF组创面愈合率均高于模型组,有统计学差异(P <0.01)。与空白组比较,模型组小鼠脂肪间充质干细胞Ipatasertib生产商CD29表达降低,有统计学差异(P <0.05);与模型组相比,鸡血藤水提物各组与bFGF组小鼠创面皮肤中CD29表达升高,有统计学差异(P <0.05)。结论鸡血藤水提物外用可Smoothened Agonist试剂促进糖尿病小鼠慢性创面愈合,增加创周间充质干细胞数量。

目的 探究抗性糊精对慢性不可预知温和应激大鼠肠道菌群的Y-27632半抑制浓度影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和抗性糊精组，大鼠基于慢性不可预知温和应激(CUMS)建立抑郁模型，3周后进行糖水偏好实验和旷场实验检测。模型组筛选应激敏感大鼠，其他两组随机选择等数量大鼠利用16S rRNACellular mechano-biology测序技术检测其肠道菌群的组成和结构变化。结果 与对照组相比，模型组大鼠肠道菌群厚壁菌门[(0.92251±0.02838)vs.(0.82572±0.00761)]、阿克曼菌属[(0.01327±0.00076)vs.(0.00000±0.00000)]、乳球菌属[(0.00029±0.00010)vs.(0.00000±0.00000)]相对丰度显著降低(P<0.05);拟杆菌门[(0.046Enasidenib71±0.00263)vs.(0.12341±0.03576)]、粪杆菌属[(0.00011±0.00004)vs.(0.00057±0.00005)]、Ruminococcaceae＿UCG＿014[(0.01003±0.00384)vs.(0.10976±0.04364)]相对丰度显著升高(P<0.05)。与模型组相比，抗性糊精可对丰度发生变化的菌群显著回调(P<0.05)。结论 抗性糊精能够调节CUMS大鼠的肠道菌群，通过改善益生菌的相对丰度、降低致病菌的相对丰度促使肠道恢复动态平衡，为抑郁症的治疗提供实验基础研究。

目的：观察齐拉西酮合并阿米替林对难治性抑郁症的疗效及对睡眠质量影响。方法：选取2020年1月至2022年12月莆田市涵江区精神病医院收治的GSI-IX试剂难治性抑郁症患者80例作为研究MLN4924对象，按照随机数字表法分为观察组和对照组，每组40例。对照组给予阿米替林治疗，观察组给予齐拉西酮合并阿米替林治疗，比较2组患者治疗效果，血清指标变化，不良反应发生率，并采用匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)比较2组患者干预前后睡眠质量的变化，采用汉密尔顿抑郁量表(HSpectroscopyAMD)比较2组患者干预前后抑郁状况的改善效果。结果：治疗后，观察组治疗疗效显著高于对照组，观察组HAMD评分、PSQI评分均显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);治疗后，观察组BDNF、NE高于对照组，5-HT低于对照组，观察组不良反应发生率显著低于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：齐拉西酮合并阿米替林治疗难治性抑郁症，能更好地调控机体激素指标，改善睡眠质量，降低不良反应发生率，值得临床推广应用。

聚氯乙烯(PVC)常被应用于气管插管和中心静脉导管等植介入医疗器械表面,在使用过程中极易发生细菌感染school medical checkup,并威胁患者的生命安全。导致细菌感染的原因主要是PVC是一种惰性材料,不具备主动抗菌功能,因此在植入人体过程中细菌容易在其表面定植,严重时可在表面形成细菌生物被膜。为了解决植介入PVC基医用高分子材料表面引发的细菌感染问题,本论文提出了基于天然高分子及其衍生物负载噬菌体和天然多酚功能化修饰PVC表面构建抗菌涂层的新思路。在本论文第二章,由于噬菌体无毒且特异性高的优点,可以有效靶Imidazole ketone erastin IC50向致病菌而对体内正常菌群没有影响,所以将其选为抗菌材料。壳聚糖具有良好的生物可降解性,其降解产物可被人体吸收。首先合成了四种不同季铵化度的壳聚糖季铵盐(QCS),通过水溶性筛选出QCS1-4,季铵化程度为89.98%,随后利用静电组装的方法负载噬菌体,将QCS1-4与噬菌体共同作用后,发现噬菌体活性下降远超过100倍以上。因发生细菌感染部位,细菌新陈代谢会分泌明胶酶,所以接着又选择明胶为响应性载体,采用乳化交联的方法制备明胶微球负载噬菌体。实验发现噬菌体最佳感染复数(MOI)为0.01,并在该MOI下具有99.99%的抗菌率。因噬菌体容易失活,在应用中具有一定的局限性,本论文的第三章,采用具有抗菌、抗炎和抗氧化功能的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为抗菌材料,并分别利用明胶微球和明胶纳米颗粒负载EGCG,通过醛化海藻酸钠作为交联剂将微球或纳米颗粒修饰到PVC表面。通过粒度电位分析筛选出最佳纳米粒子GE_(46),EGCG负载率约为68%,XPS实验证明材料成功修饰到PVC表面,体外抗菌实验表明改性后的PVCAY-22989配制表面对金黄色葡萄球菌具有99.99%的抗菌率,并且具有细菌酶响应性,安全性测试证明涂层具有很好的生物相容性,体内动物实验同样证明材料具有良好的抗菌效果。本论文选用噬菌体和EGCG两种抗菌材料构建良好生物安全性的抗菌表面,能够按需给药,消除细菌感染,这为医疗器械抗菌表面的设计提供了新的策略。