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背景:世界卫生组织数据显示,腹泻病是造成五岁以下儿童死亡的第二大原因,每年约有52.5万名五岁以下儿童死于腹泻病。研究也表明母乳喂养能够降低婴幼儿腹泻的发病率与死亡率,其与母乳成分中的免疫活性成分相关,研究报道乳铁蛋白(Lactoferrin, LF)和骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)均能调节机体免疫、促进免疫系统的成熟,然而婴幼儿配方奶粉中同时添加两种蛋白是否有协同作用以及其最适Symbiont-harboring trypanosomatids宜比例尚需进一步研究。方法:小鼠适应一周后,按照300mg/kg体重给予其乳铁蛋白和骨桥蛋白的混合物,比例为LF:OPN=1:0、1:10、1:5、1:1、1:0.2、1:0.2、0:1,对照组灌喂同等剂量的生理盐水,连续进行七天灌喂,每两天记录一次体重,模型组不灌喂蛋白混合物或生理盐水。在第七天结束后腹腔注射脂多糖(LPS)造模,第八天处死小鼠,收集血液、肠道组织样品。肠道组织进行切片病理学评价,如损伤评分、隐窝深度、绒毛长度等,并对肠道病理学完整性进行评价,包括紧密连接蛋白的表达量和杯状细胞的数量。血清样本检测D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、炎症因子(IL-6、IL-1β、IL-10、IL-4、TNF-α)的含量,用于评估肠组织炎症反应和肠屏障受损状况。结果:1、模型组DAO活性、D-乳酸含量相比于对照组显著升高,浓度约为对照组的2倍,差异具有统计学意义,表明LPS破坏了肠屏障的完整性,增加肠道通透性。与模型组相比,各处理组均显著降低了血清中DAO的活性以获悉更多及D-乳酸含量,均具有点击此处统计学差异。其中,当LF:OPN=1:10～1:1、1:0.1相较于LF、OPN单体,小鼠血清DAO的活性以及D-乳酸含量。2、模型组的肠道组织的绒毛长度变短、隐窝深度变浅,出现上皮细胞脱落以及炎症浸润的现象。损伤评分量化肠道的损伤程度显示,模型组HE损伤得分(11.6)显著高于对照组(2.24),各蛋白混合物均降低了HE损伤得分,当LF:OPN=1:5时,HE损伤得分最低(4.66),与模型组相比具有显著差异。同时统计了绒毛长度、隐窝深度,发现模型组显著下调了绒毛长度以及隐窝深度,不同比例蛋白对此均有显著的改善作用。3、在蛋白混合物的干预下,相比于对照组和模型组,紧密连接表达量上调;与模型组相比,单体以及混合蛋白均显著提高了杯状细胞的数量,具有统计学差异;相比于对照组,模型组的促炎因子IL-6、IL-1β的表达量上调,抗炎因子IL-10的表达下降;同时,蛋白混合物的干预可以缓解IL-6、IL-1β的增加以及IL-10的下降。结论:乳铁蛋白和骨桥蛋白的在保护小鼠肠道屏障、抵抗肠炎方面具有正向协同作用,其为婴儿配方的创制提供了数据支持。

4-羟基香豆素是合成抗凝血药物华法林的前体,目前主要通过化学合成法生产,存在安全性差、能耗高等问题。以葡萄糖等为原料生物合成4-羟基香豆素具有绿色可持续等优势,但由于合成途径中前体供应不足、产物细胞毒性大,限制了其高效生物合成。本文以大肠杆菌为底盘菌株,通过增强莽草酸途径、富集丙二酰辅酶A、菌株适应性实验室进化等方法构建了高效合成4-羟基香豆素的菌株,具体结果如下:为增强莽草酸途径通量、增加PEP和E4P供应,采用CRISPR/Cas9基因编辑等方法过表达基因pps A、tkt A、aro G~(fbr)和aro L,4-羟基香豆素产量达到了596.72 mg/L。进一步敲除大肠杆菌内源硫脂酶基因ydi I,减少水杨酰辅酶A降解,4-羟基香豆素产量提高到809.84 mg/L。为增加丙二酰辅酶A供应,采用基因敲除或启动子替换的策略抑制脂肪酸合成。将selleckchem Tofacitinib关键致死基因簇fab D/H/G的启动子替换为稳定期启动子P_(flgc),丙二酰辅酶A的含量提高了27.27%,4-羟基香豆素量达到913.25mg/L;敲除了关键非致死基因fab F,丙二酰辅酶A含量提升40Belnacasan研究购买.91%,4-羟基香豆素产量达到1117.96 mg/L。为解决4-羟基香豆素的细胞毒性问题,对大肠杆菌菌株进行了适应性实验室进化,获得可耐受7 g/L 4-羟基香豆素的菌株JRX00。对JRX00和亲本菌株进行全基因组测序,获得14个差异突变基因。通过在亲本菌株对差异基因过表达和敲除,筛选出yja A和kat E两个单靶点有效基因。敲除kat E,工程菌株4-羟基香豆素产量达到1249.54 mg/L,为目前生物合成Improved biomass cookstoves4-羟基香豆素的最高产量。本研究构建了高效合成4-羟基香豆素的大肠杆菌工程菌株,为其绿色可持续生产奠定了基础;获得了4-羟基香豆素耐受的靶点基因,为解析其毒性机理提供了方向和理论支持。

背景:PM2.5(Fine Particulate Matter 2.5)是我国大气污染的首要重要污染物。研究表明,PM2.5急性暴露与呼吸系统尤其是肺部疾病的发病及死亡密切相关,对我国公众健康造成严重威胁。因此研究selleckchem CL13900PM2.5暴露下对肺的损伤及机制,探寻有效的干预措施具有重要意义。本研究通过采用某复合营养素(Composite Nutrient Supplement,CNS,主要成分为维生素C、维生素E、N-乙酰半胱氨酸、西兰花籽、牛初乳及柑橘提取物等)对气管滴注PM2.5致大鼠急性肺损伤模型进行干预,探讨该CNS对PM2.5所致大鼠急性肺损伤的影响。目的:探讨某复合营养素对PM2.5致大鼠急性肺部氧化应激和炎症损伤的影响作用。方法:将80只SD雄性大鼠按照体重随机分为两批,每批4组,每组10只。空白组、PM2.5模型组、CNS常量组(CNS 150mg/kg+PM2.5)、CNS高剂量组(CNS 750mg/kg+PM2.5)。CNS组连续预灌胃14天不同浓度CNS溶液,空白、PM2.5模型组灌胃生理盐水。第15天灌胃后除空白组外的各组大鼠气管滴注PM2.5(9.0mg/kg)混悬液染毒,每隔24h染毒1次共3次,空白组气管滴注生理盐水。末次染毒24 h后,收集血样、支气管肺泡灌洗液、肺组织匀浆、肺功能和病理切片。分析测定血清丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxyd点击此处eoxyguanosine,8-OHdG)水平;肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,Cartagena Protocol on BiosafetyBALF)中乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)水平;肺匀浆液中肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)水平;肺功能自主呼吸下肺容量(Lung Volume,V)、潮气量(Tidal Volume,TV)、气道压力(Airway Pressure,P)、呼吸频率(Respiratory Rate,Ft),机械下通气下吸气气道阻力(Inhale Resistance,Ri)、呼气气道阻力(Breathe Out Resistance,Re)、动态肺顺应性(Dynamic Lung Compliance,Cdyn)、最大吸气流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)、最大呼气流速(Peak Expiratory Flow,PEF)的变化。结果:1.PM2.5致大鼠急性肺损伤氧化应激和炎症损伤机制的研究与空白组比较,PM2.5模型组的氧化应激指标血清SOD活力降低,血清中MDA和8-OHdG、BALF中ACP和LDH;炎症损伤指标肺匀浆中TNF-α和IL-1β水平增加;大鼠肺功能机械通气下Ri和Re水平显著增加,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,PM2.5模型组大鼠肺脏表观颜色发暗,有黑色颗粒和深色斑块;病理形态呈现肺泡结构严重破坏,可见大量上皮细胞坏死、组织碎片、炎性细胞、细颗粒物及充血。与空白组比较,PM2.5模型组的大鼠各脏器系数、肺功能自主呼吸中TV、P、Ft、机械下通气Cdyn、PIF、PEF差异均无统计学意义(P>0.05)。2.复合营养素对PM2.5致大鼠急性肺损伤的干预作用氧化应激指标:与PM2.5模型组比较,CNS常量和高剂量组大鼠血清的SOD活力显著升高、MDA水平显著降低,CNS高剂量组血清的8-OHdG、BALF的ACP和LDH水平显著降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症损伤指标:与PM2.5模型组比较,CNS常量和高剂量组大鼠肺组织匀浆中IL-1β水平显著降低,CNS常剂量组TNF-α水平均显著降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。肺功能指标:与PM2.5模型组比较,CNS常量和高剂量组大鼠在机械通气下Ri和Re水平显著下降,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。肺脏解剖和病理组织形态:CNS高剂量组改善更明显:表观肺部颜色和颗粒物、深色斑块和空白组类似;病理形态下肺泡间隔增厚、上皮细胞结构破损、炎性细胞浸润等有明显减轻作用。CNS常量组改变不明显。结论:该复合营养素对PM2.5致大鼠急性肺部氧化应激及炎症损伤、肺功能具有保护作用。

目的 考察清脂通脉颗粒药物对细胞活性的影响，探究其抗动脉粥样硬化的作用及机制。方法 通过CCK-8法实验判断清脂通脉颗粒的细胞毒性；通过PMA诱导的人THP-1细胞实验，ox-LDL(氧化低密度脂蛋白)诱导后研究清脂通脉颗粒对脂质吞噬的影响；进行Westblot实验进行清脂通脉颗粒对蛋白影响的测定；通过NF-KB通路抑制剂JSH-23联合给予验证清脂通脉颗粒作用靶点。结果 CCK-8法实验研究结果表明：不同浓度的清脂通脉颗粒对THP-1细胞活性均无影响；模型组selleck合成细胞总胆固醇显著增加(P<0.001);清脂通脉颗粒不同浓度组细胞中总胆固醇含量有减少的趋势，且100、200μg/mL组内胆固醇含量更低，两组间无显著差异；清脂通脉颗粒可减少NF-κB信号通路中半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、半胱氨酸蛋白酶9(caspase 9,CASP-9)、核转录因子κB-p65蛋白(p65)含量表达(P<0.01),减少B细胞淋巴相关X蛋白(Bax)蛋白含量表达(P<0.05),增加B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白含量表达(P<0.01);清脂通脉颗粒作用于巨噬细胞，与NF-κBbiological implant通路抑制剂JSH-23作用靶点相同。结论 细胞水平验证清脂通脉颗粒对其活性无影响、无毒性、安全可靠；清脂通脉颗粒可吞噬脂质、减少巨噬细胞中胆固醇含量；清脂通脉颗粒可通过调控NF-κB通路内相关分子蛋白表达发挥抗AS(动脉粥样硬化)作用；清脂通脉颗粒与NF-κPD-0332991作用B通路抑制剂JSH-23作用相同。

日益严重的细菌耐药性严重威胁到人类健康安全,使现有抗生素的疗效下降,因此迫切需要开发高效低毒的新型广谱抗菌药物以对抗耐药细菌感染。喹唑酮在结构上类似于广受欢迎的喹诺酮抗菌药,有望发挥类似的抗菌效果以及避免喹诺酮C-3位羧酸带来的毒副作用,其在药物化学领域表现出的多样生物活性及在临床实践中的成功应用为其作为抗菌药物提供了希望。此外,唑类药物在临床上的广泛应用显示了唑类化合物的抗菌潜力及其在抗菌药物中占据重要地位。本论文基于喹唑酮在国内外抗菌领域的研究趋势和本课题组有关唑类抗菌药的良好研究基础,通过不同的桥联方式设计合成了3个系列的喹唑酮烯唑类新抗菌化合物,分别为:喹唑酮烯咪唑类新化合物、喹唑酮烯噻唑类新化合物和喹唑酮烯氰唑类新化合物。用核磁共振和高分辨质谱等确定新化合物的结构,研究了目标化合物的抗菌活性并进一步对活性分子进行了结构优化,探究筛选出的高活性化合物初步的成药性和抗菌机制,为喹唑酮烯唑类化合物作为抗菌候选药物的开发提供了基础。主要研究工作如下:首先以邻氨基苯甲酸或邻氨基苯甲酰胺为起始原料经环化、取代和缩合等多步反应合成了30个新型喹唑酮烯咪唑类抗菌化合物,抗菌活性实验发现一些目标化合物对测试的细菌显示出较好的抗菌活性,尤其是7-氟喹唑酮与环己基咪唑的衍生物II-17a能有效地抑制大肠杆菌ATCC 25922的生长(MIC=0.002 m M),活性是诺氟沙星的12倍。高活性的喹唑酮烯咪唑具有低溶血率、低耐药性和快速的杀菌能力。进一步抗菌机制探索发现其可以使细菌膜通透性增加和去极化,进而导致膜破损和细胞内蛋白质泄露。高活性目标分子还可能插入细菌DNA或与细菌DNA促旋酶和拓扑异构酶IV结合,其还抑制了细菌相关基因的表达,从而阻碍DNA复制。此外,其还通过诱导细菌氧化应激和代谢失活来促进其抗菌效力。上述结果表明本研究制备的高活性喹唑酮烯咪唑新化合物有望进一步发展成为一类新型多靶点抗菌此网站药物,以应对多重耐药细菌感染。鉴于喹唑酮烯咪唑新化合物良好的抗菌活性,本论文将咪唑等排为噻唑、呋喃和噻吩,进一步合成了16个新型抗菌的喹唑酮烯噻唑类似物。生物活性测试表明,目标化合物大都对测试细菌表现出中等至良好的广谱抗菌活性,尤其是喹唑酮烯噻唑III-1能很好地抑制MRSA(MIC=0.5μg/m L),抗菌活性是诺氟沙星的8倍。成药性探究表明高活性目标分子表现出低红细胞毒性、良好的药代动力学性质、低诱导细菌耐药性趋势以及高抑制生物膜生长能力。其虽然不能诱导细菌产生氧化应激效应,但可能插入DNA阻断其复制。此外,喹唑酮烯噻唑III-1与头孢地尼的协同抗菌作用可归因于III-1可以通过诱导MRSA的PBP2a变构调节,触发活性位点的开放来使头孢地尼与活性位点相结合,从而抑制PBP2a表达,以克服MRSA耐药性并恢复头孢地尼的抗MRSA的活性。鉴于C-2位引入烯唑片段有利于增强喹唑酮的抗菌活性,且季铵盐具有靶向细菌细胞膜的能力,本论文继而通过烯氰桥连将多种芳香杂环引入喹唑酮的C-2位设计合成了33个新型抗菌的喹唑酮烯氰唑类化合物及其季铵盐衍生物。抗菌测试结果表明吡啶季铵化喹唑酮IV-16b对测试的菌株具有优异的广谱抗菌能力,尤其是能很好地抑制MRSA(MIC=0.5μg/m L)和大肠杆菌(MIC=0.25μg/m L)的生长。高活性目标化合物对MRSA和大肠杆菌还表现出快速地杀灭作用、生物膜生长抑制能力和低耐药性,其即使在高浓度下也对哺乳动物细胞展现出低毒性。此外,抗菌机理研究证明此高活性季铵盐确实可以靶向并破坏细菌细胞膜,进而导致细胞内容物的泄露。进入细菌的IV-16b还可能进一步靶向细菌DNA以阻止其复制。本论文由邻氨基苯甲酸或邻氨基苯甲酰胺为起始原料经多步反应共合成化合物131个,其中新化合物96个,包括新目标化合物77个和新中间体19个。抗菌活性实验发现部分目标化合物展现出与参考药物诺氟沙星相当或更强的抗细菌活性,高活性的喹唑酮烯唑类新化合物具有良好的生物相容性、快速地杀菌能力和低诱导细菌耐药性趋势,其也能有效阻止细菌生物膜的形成。初步的抗菌机制探究表明高活性目标化合物能够破坏细菌细胞膜完整性、诱导细菌的氧化应激效应genetic etiology、降低细菌的代谢活性或靶向细菌DNA和酶等大分子。以上的研究工作表明这些喹唑酮烯唑类新化合物有作为临床新抗菌Belumosudil采购药物候选者的潜力值得深入研究。

目的 调查抑郁症患者照护家属的心理弹性水平及其人格特质和社会支持之间的相关性研究。方法 采用一般资料调查表、心理弹性量表、社会支持评定量表和艾森克人格问卷对163例抑郁症患者家属进行调查。结果 抑郁症患者家属的心理弹性总分为（63.3Smoothened Agonist3±15.49）分；Pearson相关分Immunoinformatics approach析显示抑郁症患者家属的心理弹性与社会支持、客观支持、对支持的利用度、内外向之间均成正相关（P<0.05），心理弹性与GW-572016细胞培养神经质、婚姻状况之间成负相关（P<0.05）。多元回归分析显示客观支持、神经质、家庭月收入、医疗费用支付形式、婚姻状况5个因子依次进入回归方程（P<0.05）。结论 抑郁症患者家属的心理弹性水平较低，客观支持、神经质、家庭月收入、医疗费用支付形式、婚姻状况是抑郁症患者家属心理弹性的主要影响因素。

癌症是最致命的疾病之一,尽管全球各专家们都在努力研究,但癌症病人的数量仍日益增长。虽然目前有多种传统治疗手段,如放射线疗法(放疗)、化学药物治疗(化疗)、肿瘤手术切除等方式,但都不能完全根除肿瘤。此外,传统的抗癌治疗方法不仅不能彻底治愈肿瘤,而且可能会引起不良反应,如化疗次数增加会对机体正常组织产生一定的毒性,外科手术切除不彻底也可能会导致癌细胞的扩散和转移。因此,设计良好的治愈方案迫在眉睫。近年来,随着纳米技术的飞速发展,纳米材料因其尺寸小、独特的光学、磁性和电学等性质的优势。与传统治疗方式相比,纳米材料在肿瘤治疗方面优势显著,其中无机纳米材料具有更低的毒性及良好的生物安全性;其在靶向肿瘤治疗、光疗法、化学动力疗法(chemodynamic therapy,CDT)、声动力疗法(sonodynamic therapy,SDT)、酶疗法及免疫疗法上发挥巨大的作用。基于无机纳米材料的治疗已经越来越备受关注,多功能的无机纳米材料也是目前研究的热点,同时,多模态协同抗肿瘤的治疗方案具有广泛的应用前景。因此设计开发新型多功能无机纳米材料成为一种治疗肿瘤的可行性途径。本论文研究的重点是设计缓解肿瘤乏氧微环境和促使细胞氧化应激受损然后协同葡萄糖消耗疗法、气体疗法以及免疫疗法等多模式协同抗肿瘤的多功能纳米剂。以声敏剂(TiO_2)和光催化剂(BiO_(2-x))为载体构建了两种智能纳米平台应用于肿瘤治疗。首先,基于超声波是一种无创的外源刺激且能穿透肿瘤组织深处,选择生物安全性良好的无机声敏剂TiO_2作为纳米载体,通过水热法合成中腔介孔TiO_2纳米球,然后在其表面进行原位生长Pt纳米颗粒构成铂钛肖特基纳米粒子,不仅催化肿瘤内源性H_2O_2的分解释放氧气用于缓解乏氧,而且Pt的参与使得肖特基的电子空穴得以高效快速的利用从而产生大量的活性氧(reactive oxygen species,ROS,如:~1O_2和·OH),造成癌细胞内氧化应激受损而死亡。根据癌细胞增生需要消耗大量能量,利用葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOx)消耗葡萄糖来阻断细胞的能量供应从而遏制细胞生长。因此genetic divergence在铂钛肖特基结上通过聚乙烯亚胺的静电吸附作用使得GOx成功连接构成TiO_2@Pt/GOx(TGP)多功能纳米剂。一方面,TGP利用肿瘤中高H_2O_2表达的特点,在超声的作用下,释放大量的氧气以及ROS,不仅消耗细胞内的葡萄糖而且也破坏了细胞氧化还原稳态,最终导致细胞的死亡,在细胞和体内都表现出良好的抗肿瘤效果。另一方面,TGPKD025价格具有良好的生物安全性,同时也诱发了强烈的免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death,ICD)在远端瘤和肺转移上表现突出的治疗效果。此外,基于缺陷型BiO_(2-x)自身独特的酶活性优势,在弱酸环境下能催化H_2O_2产生大量的氧气以及ROS(如:~1O_2和·O_2~-)从而导致细胞死亡,同时结合BiO_(2-x)在近红外宽的吸收范围且在近红外光刺激下催化CO_2还原CO的独特性能。因此设计构建了以水热法合成的BiO_(2-x)为载体,然后通过矿化原理在其纳米片上包覆一层CaCO_3衣壳,在其表面修饰PEG,最后成功构建BiO_(2-x)@CaCO_3/PEG(BCP)多功能纳米剂。BCP在肿瘤微酸性条件下响应分解释放CO_2和Ca~(2+),在近红外光照射下将CO_2还原,实现了PCI-32765作用CO气体治疗,同时Ca~(2+)在细胞内过载,导致线粒体功能紊乱。因此,多功能纳米剂BCP实现了以CO气体疗法、氧气调节乏氧环境、ROS促使细胞氧化应激损伤以及细胞内Ca~(2+)过载的多种损伤途径协同治疗肿瘤的疗法。最后,BCP自身的生物安全性及体内抗瘤表现出良好的临床应用前景。

目的:本研究拟通过地黄叶总苷干预阿德福韦酯所致肾损害的乙肝小鼠模型,及地黄叶总苷主要有效成分毛蕊花糖苷干预阿德福韦酯损害的HK-2细胞模型。观察地黄叶总苷对阿德福韦酯治疗慢乙肝所致肾损害的治疗效果,并研究其治疗作用的可能机制。方法:1.动物实验:将转基因乙肝鼠用随机数表法分为25只,分为对照组9只和阿德福韦酯组16只,使用阿德福韦酯40mg/Kg(肾损伤模型剂量)每天一次灌胃建立HBV小鼠肾损伤模型,造模1周及2周检测各组肾功能(血肌酐、KIM-1、NGAL)。2周时每组处死4只小鼠。通过荧光定量PCR、蛋白印迹法、免疫组织化学染色检测各组肾脏组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达,并行透射电镜检测肾脏线粒体自噬现象。以小鼠血清KIM-1、NGAL明显升高为阿德福韦酯肾损伤造模成功标准。小鼠肾损伤模型成功后,将阿德福韦酯组HBV小鼠分为阿德福韦酯加地黄叶总苷胶囊治疗组(予阿德福韦酯1.75mg/kg(正常治疗剂量)每日一次及地黄叶总苷胶囊52mg/kg每日两次灌胃治疗)及阿德福韦酯加生理盐水组(予阿德福韦酯1.75mg/kg(正常治疗剂量)每日一次及生理盐水每日两次灌胃)PCI-32765,每组6只,同对照组(予同剂量生理盐水每日两次灌胃治疗)剩余的5只HBV小鼠继续治疗8周。检测肾功能,观察各组肾脏组织形态并通过荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组肾脏组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin变化。2.细胞实验:将不同浓度的ADV(0,11.25,22.5,45,90,180μmol/L)和HK-2细胞培养48小时后,观察ADV对HK-2细胞的作用。使用CCK-8试剂盒算出ADV对于HK-2细胞的IC50。再将不同浓度毛蕊花糖苷(0,9.375,18.75,37.5,75,150μmol/L)与加入了ADV半数抑制浓度的HK-2细胞共同培养48 h。观察毛蕊花糖苷对ADV干预后的HK-2细胞的作用,使用CCK-8试剂nanoparticle biosynthesis盒算出毛蕊花糖苷对ADV损害的HK-2细胞EC50。然后将HK-2细胞分为对照组(正常培养HK-2细胞不加入任何药物),阿德福韦酯组(HK-2细胞与半数抑制浓度的ADV)和阿德福韦酯加毛蕊花糖苷组(HK-2细胞与半数抑制浓度的ADV及半数有效浓度的毛蕊花糖苷)每组培养48小时。各组细胞干预培养后通过荧光定量PCR、蛋白印迹法检测各组HK-2细胞线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin变化。结果:1.动物实验:与对照组相比,阿德福韦酯组造模2周引起HBV小鼠肾功能异常及肾组织病理形态的损伤,且阿德福韦酯组肾组织线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达水平升高。透射电镜观察到阿德福韦酯组肾脏组织线粒体自噬现象。与阿德福韦酯加生理盐水组相比,地黄叶总苷胶囊CP-690550试剂治疗8周,HBV小鼠肾功能较前好转,损伤的肾组织病理形态有所改善,且治疗组线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达减低。2.细胞实验:毛蕊花糖苷对于ADV损害的HK-2细胞有保护作用。阿德福韦酯组粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达水平升高,且阿德福韦酯加毛蕊花糖苷组线粒体自噬指标LC3、OPTN、PINK1、Parkin表达减低。结论:地黄叶总苷对于阿德福韦酯治疗CHB所致的肾功能损害具有保护作用。地黄叶总苷对阿德福韦酯所致的肾损害的保护作用可能部分与抑制PINK1/Parkin介导的线粒体自噬有关。

药用植物内生真菌是天然活性物质的重要来源。真菌代谢产物杂二萜类具有复杂的环系结构,有广泛的生物活性,如抗炎、抗增殖、抗肿瘤、抗菌、抗真菌、抗过敏、抗氧化、抗高血脂、细胞毒等活性。杂二萜类天然产物药用价值高,但它们天然表达产量少,获取它们的经济成本较高,而米曲霉异源表达获得此类天然产物的经济成本则相对较低。化学-酶selleck合成催化定向改造天然产物可选择性对化合物进行官能团化,并进一步变为此类天然产物的衍生物,该方法是化合物结构衍生化的重要手段。本文借助米曲霉异源表达手段,在滇重楼内生真菌Aspergillus versicolor031submicroscopic P falciparum infections2中发现了一条可以产五环杂二萜chevalone E(1)及其衍生物的基因簇,并获得高产化合物1的米曲霉菌株,再通过用滇重楼内生真菌Aspergillus felis 0260第72条基因簇的化学酶(短链脱氢酶,olcC59溶解度F’)对化合物1的A环进行改造,生成了化合物chevalone F(9)。将高产chevalone E的菌株与P450氧化酶cle2和cle4、短链脱氢酶olcF’组合表达于米曲霉宿主中,产生了7个新的chevalones类似物(化合物10-16),其中新化合物10含有特征结构的半缩醛桥。通过化学合成的方法,将化合物10合成为螺内酯化合物17。通过对新产生的chevalones类似物做药理活性评估,发现化合物9-12具有一定的协同阿霉素(DOX)抗肿瘤的活性。本文通过体内米曲霉异源表达、底物饲喂、体外酶反应实验,推导了chevalone E衍生物的生物合成路径。本文首次运用化学-酶催化的方式定向改造了杂二萜化合物,揭示了目标化学酶(OlcF’蛋白)是NAD~+依赖的短链脱氢酶。通过化学-酶催化的方法,对滇重楼内生真菌Aspergillus versicolor 0312 cle基因簇的重要天然产物五环杂二萜chevalone E进行定向改造,获得与chevalone E一样的具有高附加值的chevalones衍生物,为发现和构建新的且具有协同活性的天然产物提供了一个思路,为进一步的科技成果转化提供了一定的参考。

新型材料类抗菌剂的研发有助于缓解目前因抗生素过度使用导致的细菌耐药性增加的问题。由目前的科学研究可知,纳米银及纳米银铜具有非常优异的抗菌性能,但是其在合成制备方面存在生产成本高、产量低、环境污染严重等缺陷,同时在实际使用中还需关注它们的稳定性和分散性。通过筛选原料,调整实验参数,克服生产过程中的缺陷,获得对人体毒副作用小的纳米抗菌材料,是目前研究的主要趋势。其中,聚乙烯醇(PVA)是一种用途广泛的非离子型表面活性剂,在较高温度下表现出一定的还原能力,同时是一种生物相https://www.selleck.cn/products/empagliflozin-bi10773.html容性较好的多元醇。本研究以聚乙烯醇为还原剂和表面活性AZD1152-HQPA价格剂,采用原位化学还原法制备纳米金属颗粒,重点研究制备参数对抗菌性能和细胞相容性的影响,其结果如下:首先采用上述方Anti-biotic prophylaxis法制备纳米银,通过设置不同温度(80℃、100℃、120℃)探究PVA对还原生成纳米银粒径以及分散程度的影响,利用紫外-可见光谱(UV-Vis)测试100 ppm浓度Ag NPs的等离子吸收峰,电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)测试溶液中银离子的还原程度,结合高分辨透射电镜(TEM)分析确定合成纳米银颗粒的最佳条件为80℃,此刻,在紫外光谱433 nm处出现明显的银的特征吸收峰,溶液中未被还原的银离子浓度最低,所合成的纳米银颗粒为球形且分散性最好。抗菌测试表明,80℃合成的纳米银颗粒对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果最好,其最小抑菌浓度(MIC)均为6.25 mg/L,最小杀菌浓度(MBC)分别为6.25 mg/L和12.5 mg/L,对比说明杀菌来源主要是纳米银颗粒而非未还原的银离子。与L929为原型细胞的细胞相容性测试表明,80℃样品与细胞体外共培养24h后其相对存活率为111.9%,细胞毒性为0级,表现出较好的细胞相容性,进一步说明以聚乙烯醇为原料的反应体系对细胞活性无影响。采用相同方法进一步制备纳米银铜,将反应温度由80℃提升至160℃的过程中,发现Cu离子的存在反而抑制了PVA水溶液对Ag离子的还原,只有当银铜离子摩尔比控制在2:1及以上时,纳米颗粒的紫外光谱上才会出现银的特征吸收峰但峰强不明显。进一步用透射电镜表征得知,合成颗粒因还原出的纳米银铜颗粒团聚而尺寸增大至微米级,且内部存在较多缺陷,组成其的纳米银铜彼此独立呈双金属结构。在银铜摩尔比1:1到4:1的范围内,MIC和MBC呈先减后增趋势,其中摩尔比2:1的银铜双金属颗粒抗菌效果最优,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为4.6862 mg/L,对大肠杆菌的MBC值为9.3725 mg/L,对金黄色葡萄球菌的MBC值为4.6862 mg/L。相比上述同样方法合成的纳米银,其抗菌性能略有增强,但由于其银铜还原程度低且颗粒尺寸过大,难以提供有效的抗菌应用。进一步通过调控银铜摩尔比至6:1时,纳米颗粒的紫外光谱上出现明显的银特征吸收峰,高分辨透射电子显微镜下颗粒尺寸缩减至75-100 nm且银铜双金属结构并未发生改变。傅里叶变换红外光谱测试证实PVA水溶液利用-OH基团进行还原,Cu的存在使得羟基优先作用于Cu本身而无法大量还原银。当铜离子浓度大幅度降低至银铜摩尔比为14:1以上时,Cu对Ag的抑制作用减弱,PVA水溶液共同作用于两者将其还原为纳米银铜,形成的是纳米银与纳米银铜共存悬浮液。与纳米银悬浮液相比,共存悬浮液的MIC、MBC明显下降,其抗菌性能比相同浓度的纳米银最多能够提高25%,表明银铜金属间存在协同抗菌增强作用。以MIC浓度测试的L929细胞活性为95.9%和99.1%,毒性表现为0级,纳米银、纳米银铜共存悬浮液同时能够实现杀菌及对细胞无负面刺激,有望在生物医疗方面实现应用。