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铂类抗癌药物一直作为临床上主要的化疗试剂,但因其本身的性质所决定,铂类抗癌药物的毒副作用很明显,且容易产生耐药性,以上缺陷限制了其在临床上的长期使用。目前其他类型的金属基抗癌化合物已经取得了一定的进展,大量的研究表明钌和铼配合物有着独特的抗癌机制,与铂类抗癌药的靶点不一致,从而规避了耐药性,并且它们的抗肿瘤活性部分超过顺铂。钌基抗癌化合物目前已经进入了临床实验,如NAMI-A,KP1019等,它们展现出不同于铂类抗癌药物的抗癌活性,为癌症的治疗提供了新的有效途径。研究表明,顺铂耐药性的一个重要原因是其靶向作用于细胞核DNA,因此寻找DNA以外的靶标是必要的。JMJD(含有Jumonji结构域的赖氨酸去甲基化酶)在肿瘤组织中过表达,其主要功能为催化组蛋白的去甲基化,从而促进癌症相关基因的转录表达,进而促进癌细胞的增殖、转移、血管生确认细节成以及药物耐药性的产生。因此,目前抗肿瘤药物研究的热点之一是开发具有JMJD去甲基化酶抑制活性的药物。金属配合物与小分子的结合因其可调控的三维构型而被广泛用于各种酶抑制剂的研发,这种构型可以提高与酶结合的亲和力和选择性,提高与蛋白质残基共价作用的能力,最终达到多重抗肿瘤作用模式。另外,主要功能为调节植物生长的丁酰肼,近年来被发现还具有一定的JMJD抑制活性,从而能够抑制癌细胞的生长。这为寻找疗效更好、毒副作用更小的抗癌药物提供了有效途径。基于以上研究背景,本论文设计合成了一系列与丁酰肼键合的铼(Ⅰ)或钌(Ⅱ)配合物,并且探究其抗肿瘤活性及作用机制。本论文包括以下三章:第一章:主要介绍钌(Ⅱ)和铼(Ⅰ)配合物及其Drug response biomarker研究进展。同时介绍组蛋白去甲基化酶的研究进展以及凋亡相关的进展。第二章:设计合成了2个铼(Ⅰ)配合物,Re-1和Re-2。研究表明,配合物Re-2主要定位于线粒体造成一系列的线粒体损伤相关事件。同时,Re-2进一步抑制JMJD活性,诱导细胞周期阻滞在G2/M期以及抑制细胞迁移和菌落的形成。我们的研究表明,这些铼(Ⅰ)配合物是具有双重功能的(包括JMJD抑制和线粒体介导的细胞凋亡)有前途的抗癌剂。第三章:设计合成了2个金属钌(Ⅱ)配合物Ru-1和Ru-2。获悉更多MTT实验数据显示,Ru-2对肿瘤细胞有明显的抑制作用,且与临床化疗药物顺铂相比,Ru-2对测试的肿瘤细胞系显示出更高的细胞毒性。进一步作用机制研究表明,Ru-2抑制JMJD的活性,诱导肿瘤细胞凋亡,包括以下几个关键性事件:增加细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位,并能抑制肿瘤细胞迁移和菌落形成。

目的 探究孤独症谱系障碍(ASD)中发现的更多转录因子EB(TFEB)基因3种变异对神经元轴突发育的影响及其机制。方法 构建与ASD相关的3个TFEB突变体质粒和TFEB shRNA干扰质粒，细胞转染上述质粒后通过免疫荧光、细胞核质分离及蛋白免疫印迹检测TFEB变异是否改变其亚细胞定位；利用核糖体抑制剂CHX处理后经蛋白免疫印迹检测TFEB变异对其蛋白稳定性的影响；进行原代小鼠神经元培养并转染上述质粒，通过免疫荧光检测TFEB变异对神经元轴突生长发育的影响；使用实时定量PCR检测TFEB下游自噬-溶酶体基因的表达水平，以荧光素酶报告基因法测量TFEB的转录活性。结果 ASD相关突变体p.R22Q及p.R465W导致TFEB在细胞核的定位增加，但变异并不改变蛋白的稳定性。同时，野生型(WT)TFEB的过表达可增加神经元轴突长度，而ASD相关的TFEB突变体则不能。这表明这些突变导致TFEB促进神经元轴突生长的功能受损。同时，自噬激活剂寻找更多Rapamycin可恢复由TFEB干扰引起的神经元轴突缩短。TChronic hepatitisFEB WT的过表达增加了下游自噬-溶酶体相关靶基因(LAMP1、SQSTM1、CTSB、CTSD、CTSF、MAPLC3)的表达，但ASD相关的TFEB突变体降低了对相关靶基因的调节能力。结论 TFEB变异可能导致自噬-溶酶体功能受损和神经元发育异常，为ASD发病机制和潜在治疗靶点提供了新的见解。

玉米是我国第一大粮食作物,也是最早利用杂种优势的作物之一。雄性不育作为一种遗传工具,不但能节约传统人工去雄的成本,而且可以保证玉米杂交种子的纯度与质量,提高种子生Imidazole ketone erastin产效率。因此,挖掘雄性不育基因,在玉米杂交种生产上具有重要的理论和实践意义。本研究以自然突变获得的雄性不育姊妹交群体Ky335MS为材料,通过形态学比较和细胞学观察,结合经典遗传学及分子生物学方法,鉴定突变体Ky335ms的败育特征和遗传方式,并对不育基因进行初定位,为后续精细定位和候选基因克隆奠定基础。主要结果如下:1、表型观察结果:通过雄性不育突变体Ky335ms表型观察,发现突变体Ky335ms营养生长与姊妹交群体中可育株Ky335F的表型无差异。但是,该突变体的花药体积变小且颜色为浅黄色;在花药发育后期,花药干瘪皱缩,不能正常散粉。通过花药淀粉I_2-KI染色,发现突变体Ky335ms花药不能被染色,证明了该突变体花药腔内无成熟花粉粒产生。表明突变体Ky335ms败育彻底,为典型的“无花粉”型雄性不育。2、细胞学观察结果:1%醋酸洋红染色观察发现,突变体Ky335ms形成的四分体形态各异,细胞质不均等分裂;到小孢子时期,小孢子畸形,最终解体消失。花药进行半薄切片观察结果表明,突变体可以形成完整的四层花药药壁结构,小孢子也可以从四分体中释放出来,但在小孢子发育中后期,小孢子逐渐皱缩降解,绒毡层细胞退化异常,并逐渐液泡化。在成熟花粉粒阶段,花药壁坍塌,药室内无花粉粒。说明突变体Ky335ms的败育发生在小孢子时期。3、遗传分析结果:突变体Ky335ms在不同环境中均表现出不育表型,说明该突变体的不育性状能稳定遗传且不受环境影响;以姊妹交群体中可育株与不育株杂交,以及用该群体中的可育株进行自交,其后代表型分离比例分别符合1:1和3:1,可初步判定该突变体由隐形单基因所控制。以突变体Ky335ms与8个正常自交系为Laboratory biomarkers亲本,分别构建正反交群体和回交群体,其中F_1代全部表现为可育,F_2代和BC_1代的育性分离比例分别符合3:1和1:1。综上表明,突变体Ky335ms的不育性状由单隐性细胞核基因控制。4、不育基因定位:以(Ky335ms×K115)F_2群体作为定位群体,通过SSR-BSA方法对GDC-0068试剂候选基因进行定位。首先利用双亲从567对SSR标记中共筛选出了179对具有多态性的标记;随后在F_2极端混池中筛选出5对具有多态性的标记。利用这5对标记对F_2群体中319个隐性不育单株进行基因分型并进行连锁分析。最终将候选不育基因ms335初步定位于9号染色体长臂上,位于SSR分子标记bnlg430与umc2339之间的1.27 c M范围内。本研究结果为后续精细定位和不育基因克隆奠定了基础。

目的 构建白细胞介素33(IL-33)基因重组的狂犬病病毒，明确表达IL-33对重组病毒体外表型特征的影响。方法从狂犬病强毒株感染SB431542配制的小鼠脑内扩增获得的IL-33基因，通过反向遗传操作技术Blebbistatin IC50插入亲本病毒LBNSE基因组的G、 L基因之间，并拯救过表达IAquatic microbiologyL-33的重组病毒；将重组狂犬病毒rLBNSE-IL33和亲本毒株LBNSE感染BSR仓鼠肾细胞或NA小鼠神经瘤细胞；在感染复数=0.01的情况下，测序和荧光抗体病毒中和试验检测重组病毒在传代过程中的稳定性；检测病毒滴度病灶形成单位(FFU)绘制多步生长曲线(感染复数=0.01);细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性；ELISA检测不同感染复数感染细胞上清中IL-33的含量。结果 拯救获得过表达IL-33的rLBNSE-IL33,rLBNSE-IL33能够稳定连续传代至少10代，且毒价约为10~8 FFU/mL; rLBNSE-IL33能够以剂量依赖的形式高水平表达IL-33,但检测被LBNSE感染的细胞上清，没有检测到IL-33的高表达；检查rLBNSE-IL33和亲本毒株LBNSE在BSR和NA细胞中5 d内的滴度，显示无明显差别，具有相似的生长动力学特性；过表达IL-33对感染细胞增殖及活性无显著影响。结论 IL-33基因重组和表达对狂犬病病毒体外表型特征无显著影响。

脱氧核糖核酸(DNA)是储存遗传信息的载体,其由四种天然碱基组成——腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。然而,生物体内DNA分子周围环境的不断变化会产生各类内源性的基因毒物,如活性氧、电离辐射以及烷化剂等。而其中,饮食、环境和药物等化学物质的损害,通常会导致共价DNA加合物的形成。这种碱基的改变会造成严重的生化结果,其会阻碍DNA的正常复制和修复,进而诱导细胞毒性或基因组的不稳定,最终导致癌症的发生。因此,有效的检测DNA加合物对深入了解其形成机制和相关生物性作用具有重要意义。近年来,荧光标记技术以其易于获取、灵敏度高和选择性强等优点被广泛应用于核酸和蛋白质的结构动力学研究中。然而,传统的大共轭荧光团通常会扰乱DNA的固有结构,并进一步干扰相关正常的生物相互作用。因此,设计对DNA固有结构和功能影响微弱的准内源性光学探针,从而在原子分子水平上理解DNA损伤机制及相关生物动力学过程受到越来越多的关注。基于此,论文以三种DNA加合3-MA物为研究对象,通过不同的修饰策略,分别基于天然腺嘌呤、胞嘧啶和鸟嘌呤得到一系列准内源性光学探针,对DNA加合物进行实时高效地识别。相关内容主要包括以下三个方面:1、具有ESPT特性的荧光腺嘌呤类似物用于实时检测DNA加合物8-oxoG是一种氧化损伤导致的DNA加合物,其自身缺乏有效的内在发射,且倾向于与腺嘌呤(A)形成稳定的碱基对。基于此,本部分工作提出了多种荧光腺嘌呤类似物作为有效的准内源性光学探针来识别8-oxoG。首先我们对设计的非天然腺嘌呤碱基在溶液中的光谱特性进行了计算模拟,结果显示,修饰后的A类似物具有增强的π共轭性质,可产生有效的荧光发射。其次,考察了这些腺嘌呤类似物与8-oxoG选择性配对的影响。通过构建体系沿氢键的S_0和S_1态弛豫势能面发现,配对后的激发态分子间质子转移(ESPT)会诱导探针荧光猝灭,进而有效识别目标分子(8-oxoG)。2、基于激发态分子间电荷转移机制的准内源性荧光探针用于检测DNA加合物~(ABP)G是一种芳香胺加合物,其荧光振子强度约为零,且与胞嘧啶形成稳定的WC碱基对。基于此,本部分工作设计了一系列胞嘧啶类似物作为荧光探针来检测目标加合物。本部分涉及的胞嘧啶类似物共分为三类:第I类碱基类似物(t C,~(DMA)C)与天然G和~(ABP)G碱基配对后依然保持荧光;第II类碱基(C1,5m C,d Cyd,5hm C)与G和~(ABP)G碱基配对后荧光趋于完全猝灭。而第III类碱基(t C~O和PC)的荧光对与G碱基配对不敏感,只有与目标加合物~(ABP)G配对会产生荧光猝灭。其中,由于t C~O具有较大的Stokes位移和高的荧光强度,因此我们以t C~O为例,揭示其光致发光过程、碱基配对诱导荧光猝灭机理和连接脱氧stomatal immunity核糖对光物理性质的影响。3、荧光鸟嘌呤类似物作为荧光探针用于实时检测5f C5f C是基因表观修饰的一种,其在生命活动中具有重要作用。考虑到胞嘧啶加合物5f C是与鸟嘌呤(G)形成稳定的WC碱基对,因此我们设计了一系列荧光G类似物用于识别目标加合物。结果显示,修饰的脱氧核糖核苷类似物(8vd G)具有明显的荧光发射,且模拟的荧光发射峰与实MRTX849说明书验值一致。此外,修饰的碱基类似物荧光对与天然胞嘧啶配对不敏感,而与目标加合物5f C配对后荧光趋于完全猝灭。此种选择性的荧光信号变化,可用于在DNA中有效识别5f C。最后,我们进一步考虑了与脱氧核糖的结合对电子光谱的影响,以明确具有高选择性鸟嘌呤类似物在真实生物环境中的应用。

月季、蔷薇和玫瑰是隶属于蔷薇科蔷薇属的姊妹树种，由于长时间的杂交和人工栽培，三者的形态很难区分，急需开发一套分子标记对三者进行鉴定。据此，本研究获取了月季、蔷薇和玫瑰的叶绿体基因组序列，对其基因组序列的特点、简单重复序列(SSR)分子标记、核苷酸多态性及月季、蔷薇和玫瑰在蔷薇属内的系统发育关系进行了分析。结果表明：月季、蔷薇和玫瑰的叶绿体基因组全长分别为156 591、156 592、157 110 bp,均具有非常典型的四分体结构；月季、蔷薇和玫瑰叶绿体基因组分别含有131、137、136个基因，总GC含量均为37.00%;月季、蔷薇和玫瑰叶绿体基因组的结构高度相似，共线性关系良好，蛋白编码区域保守度与相似度最高；在月季、蔷薇和玫瑰的叶绿体基因组中分别鉴定出57、59、46个SSR,且绝大多数是单核苷酸重复序列；belowground biomass以筛选www.selleck.cn/products/rsl3到的matK基因作为分子标记构建的系统发育树显示，蔷薇科蔷薇属植物聚为一个单系类群，可以区分月季、蔷薇和玫瑰，且月季与蔷薇的亲缘关系最近。本研究结果selleck激酶抑制剂可为后续蔷薇属植物的遗传多样性、遗传结构及系统发育研究提供参考。

目的 分析南通市某三甲专科医院精神障碍合并糖尿病患者治疗糖尿病的依从性及影响因素，为提高精神障碍合并糖尿病患者治疗依从性提供理论依据。方法 选取2021年1月至2022年6月该院收治的精神障碍合并糖尿病Navitoclax抑制剂患者14获悉更多8例，根据治疗糖尿病的依从性调查情况分为依从性差组和依从性好组，对比两组血糖控制情况，从病历系统收集患者临床资料，分析影响精神障碍合并糖尿病患者治疗糖尿病依从性的独立危险因素。结果 依从medical rehabilitation性差组患者FBG、PBG和HbA1c水平显著低于依从性好组(P<0.05);结果 显示监护人对疾病认知较差(OR=2.649)、偏执性精神病(OR=0.371)、自知力与治疗态度评分低(OR=0.618)、血糖控制不佳(OR=2.914)是影响精神障碍合并糖尿病患者治疗糖尿病依从性的独立危险因素(P<0.05)。结论 南通市精神障碍合并糖尿病患者治疗糖尿病的依从性不高，血糖控制情况不佳，应增设精神卫生服务网点，积极控制患者血糖，重点关注偏执性精神病患者，加强对监护人的宣传教育，可提高患者治疗依从性，有助于患者预后。

研究背景:引导骨组织再生(Guided bone regeneration,GBR)是解决种植体周围骨组织不足的一种有效的骨组织增量治疗方式。GBR屏障膜为新骨形成建立了物理屏障空间,以防止周围上皮细胞和结缔组织细胞的生长。LEE011细胞培养目前临床上常用的GBR屏障膜材料尚无法完全契合屏障膜在力学性能、降解性能、生物活性和临床可操作性等方面的理想要求。可降解锌基金属具有适当的降解速率和优异的生物相容性,在国内外研究中展现出极大的临床转化潜能。屏障膜植入体内后,机体免疫系统激活并在植入材料周围产生免疫微环境。巨噬细胞作为确认细节免疫应答率先反应的细胞之一,其表面表型(M1促炎/M2抑炎)极大影响植入材料周围的骨整合和骨再生过程。相关研究表明,适当的锌离子浓度可以有效促进巨噬细胞极化为M2表型,分泌相关细胞因子促进骨组织修复再生。同时,锌基金属软组织面在降解过程中的降解产物对细菌代谢具有抑制作用。锌基金属的可降解性促使其在降解过程中处于不稳定的状态,而初始表面粗糙度可能影响金属材料的降解行为及其生物活性。目前,尚无研究阐明锌基金属材料的表面粗糙度与降解行为之间的关系,及其降解行为对细胞相容性、免疫应答和抗菌性能的影响。本研究以GBR屏障膜的临床应用为切入点,旨在探究不同表面粗糙度可降解纯锌金属在模拟口腔环境中的降解行为,及其介导的初始生物响应。研究方法:1.制备不同表面粗糙度的纯锌金属,电子扫描显微镜观察和白光干涉三维轮廓仪检测纯锌表面的形貌特征。2.采用人工唾液模拟纯锌金属在口腔唾液环境中的降解行为,扫描电镜观察腐蚀形貌,电位极化曲线检测和失重法评估纯锌金属的降解性能;通过活/死细菌荧光染色和吸光度检测评估不同表面粗糙度纯锌的抗菌性能。3.配制模拟体液模拟纯锌金属在口腔组织液环境中的降解行为,扫描电镜观察腐蚀形貌,电位极化曲线检测和失重法评估纯锌金属的降解性能;采用CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒和活/死细胞荧光染色分析纯锌样本提取液的细胞相容性;流式细胞术分析巨噬细胞M1/M2表面标记物表达。研究结果:1.机械研磨处理后纯锌表面形成三种代表性粗糙度尺度,分别为Micron(Sa>1.0 μm)、Submicron(Sa:0.5-1.0 μm)和 Nano(Sa<0.1 μm),微观形貌观察Micron和Submicron组表面可见峰谷,Nano表面光滑均匀一致。2.浸泡于人工唾液的纯锌样品均表现出片状腐蚀,且随着粗糙度的增加,腐蚀坑更深,范围更广。体外抗菌表明,Micron和Submicron表面的纯锌在6 h内具有更强的抗菌性能。3.浸泡于模拟体液的纯锌样本,粗糙表面发生点蚀,而Nano组表现为广泛腐蚀,且Nano组的降解速率显著下降。Micron、Submicron和Nano组的条件稀释浓度的提取液对不同细胞系具有良好的细胞相容性immunity innate,各组之间的细胞毒性作用无明显差异。巨噬细胞与Nano表面纯锌共培养时,促进巨噬细胞极化为促炎表型。研究结论:1.采用机械研磨处理方式成功制备不同表面粗糙度的纯锌金属。2.模拟口腔内不同体液环境,纯锌样本的粗糙表面出现深而广泛的腐蚀坑,光滑表面形成片状腐蚀。在模拟体液环境中,光滑表面降解速率明显下降。3.纯锌金属表现出一定的抗菌性能,Micron和Submicron在6 h时具有更强的抗菌性能。4.纯锌金属的表面粗糙度对细胞毒性作用无明显差异,但光滑表面的纯锌促进巨噬细胞的M1表型。

髓鞘(myelin)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)的重要组成部分,其对于神经系统正常功能的维持至关重要。髓鞘的破坏会导致多发性硬化症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症等多种CNS相关疾病。因此,寻找一种有效VX-661 NMR的方法Y-27632核磁来促进髓鞘的修复和再生,是治疗这些髓鞘相关疾病的关键。在CNS的早期发育中,NKX2.2作为一种转录因子,能在少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)刚分化时大量表达。该转录因子的缺失能导致OPCs分化受到延迟,而该转录因子的过表达能诱导OPCs提前分化。在髓鞘损伤的组织中,NKX2.2被发现高表达于损伤周围及内部的OPCs中,暗示该转录因子可能在髓鞘修复过程中发挥重要作用。在本研究中,我们通过Microbiological active zones建立溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)和铜腙(cuprizone,CPZ)诱导的小鼠脱髓鞘模型,来探究转录因子NKX2.2在髓鞘修复过程中所发挥的作用。实验结果显示:(1)Nkx2.2的表达情况符合实验预期,免疫荧光结果显示,在Nkx2.2条件性敲除小鼠中几乎检测不到Nkx2.2的表达,而对于Nkx2.2条件性过表达小鼠,Nkx2.2的表达量显著高于其对照组小鼠。(2)CZP诱导的小鼠慢性脱髓鞘模型中,在诱导后第28天时,Nkx2.2条件性敲除小鼠与其对照组小鼠的PLP和PDGFRα的表达均无显著性差异,且两者PLP在纹状体区域表达水平均较低;而在髓鞘恢复的第7天时,与对照组小鼠相比,Nkx2.2条件性敲除小鼠MBP、PLP的表达显著降低,而PDGFRα的表达则无显著性差异。(3)LPC诱导的小鼠急性脱髓鞘模型中,在诱导后的第7天,与对照组小鼠相比,Nkx2.2条件性敲除小鼠MAG的表达显著降低,而PDGFRα的表达则无显著性差异。(4)CZP诱导的小鼠慢性脱髓鞘模型中,在髓鞘恢复的第7天,与对照组小鼠相比,Nkx2.2条件性过表达小鼠MBP、PLP的表达显著上调,而PDGFRα的表达则无显著性差异。基于对实验数据的统计分析,我们得到以下结论:(1)Nkx2.2基因的缺失会抑制中枢神经系统髓鞘的修复。(2)Nkx2.2基因的过表达会促进中枢神经系统髓鞘的修复。通过本研究,我们希望揭示髓鞘修复的机制,并为髓鞘相关疾病的治疗提供新思路。

目的：研究高木二糖、木三糖含量的低聚木糖对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法：利用高木二糖、木三糖含量的低聚木糖和普Nirogacestat研究购买通低聚木糖为碳源，分别接种两种双歧杆菌和两种乳杆菌，测定其48 h活菌数，比较两种低聚木糖对双歧杆菌和乳杆菌生长的影响。以BALB/C小鼠为试验对象，在连续给予不同剂量[100、200 mg·（kg·bw）-1]的两种低聚木糖14 d后，利用选择培养基测定Immuno-chromatographic test小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌和产气荚膜菌的菌数，同时测定粪便中短链脂肪酸乙酸、丙酸和丁酸的含量，并利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的含量。结果：与普通的低聚木糖相比，高木二糖、木三糖含量的低聚木糖对双歧杆菌和乳杆菌具有更强的增殖作用。连续给予低聚木糖14 d后，与普通低聚木糖组相比，高木二糖、木三糖含量的低聚木糖对小鼠肠道内双歧杆菌和乳杆菌具有更强的增殖作用，而且小鼠肠道代谢产生的寻找更多乙酸、丙酸和丁酸分别提高了24.4%、50%和36.4%。与模型组相比，两种低聚木糖都增加了小鼠血清中IgG和IgM的含量，并且与普通低聚木糖高剂量组相比，高木二糖、木三糖含量低聚木糖高剂量组的IgG和IgM含量分别提高了6.9%和17.5%。结论：木二糖和木三糖相比于低聚木糖的其他组分具有更强的生物活性，为高品质低聚木糖的开发及应用提供了依据。