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针对晚期(复发)喉癌常用的治疗方法包括:放疗、化疗、同步放化疗、分子靶向治疗、免疫治疗及多种方法联合治疗,但是仍然效果较差,治疗有效率低。由于自噬与肿瘤免疫逃逸的相互调节是肿瘤恶性进展的内在因素之一,研究自噬与免疫检查点通路间的相互作用,通过对自噬和免疫检查点通路加以调控进而提高抗肿瘤疗效,是一个值得研究的方向。研究目的:筛选喉癌中自噬通路及免疫检查点通路中的差异基因并进行验证,初步探讨喉癌中自噬和免疫检查点通路间的作用机制。实验方法:(1)差异基因筛选:从TCGA数据库(https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/)中下载了喉癌RNA-seq原始表达谱数据,并进行Spearman相关性分析,将筛选得到的相关性>0.5的基因进行差异分析后,选择以P<0.05,|log2(foldchange)|<1为阈值,即采用DESeq2方法筛选出三组差异基因。(2)质粒的制备:构建差异基因的RNAi干扰质粒载体及过表达载体,经测序分析,质粒序列与预设序列一致,测序结果为单一峰,质粒载体构建成功。(3)差异基因的细胞学验证:质粒载体构建成功后,包装成慢病毒分别感染喉癌细胞系TU686和AMC-HN-8细胞。分别以Western Blot,selleck HPLCReal-time PCR检测STAT1、TP53INP2、EGF基因的敲低效率,CCK-8检测细胞增殖活性,流式双标检测细胞凋亡,并将得到的数据进行灰度分析后,绘制条形图,最后筛选出靶基因。(4)探究TP53INP2-TICAM1-PDL1信号轴在自噬和PD-L1中的作用构建TP53INP2敲减质粒及TICAM1的过表达质粒,感染AMC-HN-8细胞,分别使用划痕实验、Transwell迁移实验、自噬激活剂雷帕霉素、Western Blot检测TP53INP2—TICAM1—PD-L1信号轴上的关键蛋白:TP53INP2、LC3AB、TICAM1、PD-L1这四种关键蛋白的相互影响。实验结果:(1)喉癌中自噬通路与PD-L1通路的三对差异基因分别为:TP53INP2-TICAM1、STAT1-CTSL、EGF-PRKAA2。(2)敲低STAT1后,喉癌细胞增殖水平显著降低,而凋亡水平显著增高,LC3及PD-L1蛋白水平明显降低。(3)敲低EGF后,喉癌细胞增殖水平显著降低,而凋亡水平显著增高,LC3及PD-L1蛋白水平明显降低。(4)敲低TP53INP2后,LC3-II/I、PD-L1蛋白表达水平明显降低,细胞增殖活性明显增加,而对于细胞凋亡水平的检测中,敲低TP53INP2后,TU686细胞的凋亡水平明显增加,而AMC-HN-8细胞的凋亡水平明显降低。(5)只有TP53INP2敲减慢病毒在两组细胞系的敲减效率验证中得到了两个满意的双靶点,敲减效率显著。最终选择TP53INP2-TICAM1作为研究的靶基因。(6)敲低TP53INP2后,TP53INP2、LC3AB、TICAM1蛋白表达明显下调,细胞增殖水平下降,迁移水平亦明显下降,但细胞增殖水平及迁移水平在使用自噬激活剂以后明显升高;敲低TICAM1后,PD-L1和LC3AB蛋白均表达下调,但当敲低TP53INP2的同时,TICAM1过表达时,LCnecrobiosis lipoidica3AB蛋白的表达明显上调,PD-L1表达上调,TP53INP2蛋白的变化每次实验结果有所不同。结论:(1)敲低STAT1后:喉癌细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增高,LC3及PD-L1此网站蛋白水平明显降低。敲低EGF后:喉癌细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增高,LC3及PD-L1蛋白表达水平明显降低。(2)敲低TP53INP2后:喉癌细胞增殖水平活性明显增加,凋亡水平均显著降低,LC3及PD-L1蛋白水平明显降低,但需要进一步的实验证实。(3)TP53INP2—TICAM1—PD-L1信号轴可能是喉癌中自噬与PD-L1网络间的作用机制之一,TP53INP2和TICAM1对自噬和PD-L1通路均具有正向调控作用,同时,TP53INP2可通过正向调控TICAM1进一步实现对自噬和PD-L1的调控,而自噬激活剂雷帕霉素可通过促进TP53INP2出核而上调自噬。

P2Y_(12)受体介导的血小板聚集过程对我们研究血栓类疾病至关重要,P2Y_(12)受体拮抗剂作为新型抗血小板聚集药物受到了广small- and medium-sized enterprises泛研究。嘌呤核苷衍生物是一种可逆的P2Y_(12)受体拮抗剂,具有抗血栓的药效,嘌呤骨架作为药效团中心是其生物活性的关键。本文对36种嘌呤衍生物及39种腺苷衍生物进行了三维定量构效关系(3D-QSAR)分析,其中包括Co MFA、Co MSIA及SOMFA分析,建立了可靠的计算模型,并进行了验证,为后续抗血小板聚集药物分子结构设计提供了依据。通过对数据集中分子种类及数量的改变的探究,发现扩大数据集的分子数量对模型的显著性及预测能力更有利。通过分析3D-QSAR计算结果,得出如下结论:嘌呤环的C-2位置引入适当大小的基团对分子活性有利,基团过大会抑制分子活性;在嘌呤环C-6位置不能直CH-223191使用方法接连接大体积取代基团,且连接电子云密度低的基团会增加分子活性,在糖环的C-5’处连接体积较大的基团对分子活性有利,该区域有氢键受体也能增加分子活性。本文同时研究了新嘌呤核苷衍生物的合成路线,通过对三种路线的PCI-32765体内实验剂量探索,最终确定以2-氨基-6-氯嘌呤和β-D-呋喃核糖为原料的合成路线,经过Vorbruggen糖基化反应、重氮烷硫基化等四步反应成功合成了目标产物,并对其进行了结构表征。

构建共递送构象锁定蜂毒肽（Ano-3，A3）与光能转化材料氧化石墨烯（graphene oxide，GO）的纳米载药系统A3@GMH，评价SCH727965体内其对三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）的溶瘤免疫治疗作用。通过乳液模板法制备A3@GMH，并表征其理化性质。红外热成像仪考察A3@GMH的体内外光热转换能力。综合细胞增殖检测（cell counting kit-8，CCK-8）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）释放、活死细胞染色和超高分辨显微镜等实验考察A3@GMH对TNBC 4T1细胞的溶瘤活性。高内涵成像系统和流式细胞仪评价A3@GMH的4T1细胞靶向性质。体内外研究A3@GMH联合光热通过诱导4T1EPZ-6438体内细胞免疫原性quality use of medicine死亡（immunogenic cell death，ICD）发挥抗肿瘤的作用机制。结果显示，本研究所制备的A3@GMH具有明显的介孔和涂层结构，平均粒径为（308.9±7.5）nm，表面电势为（-6.79±0.58）mV，A3的包封率和载药率分别为（23.9±0.6）%和（20.5±0.5）%，并有良好的光热转换能力和生物安全性。A3@GMH可主动介导4T1细胞裂解及LDH释放等溶瘤特征与ICD效应，联合光热疗法（photothermal therapy，PTT）时具有更好的体外抗肿瘤活性。A3@GMH在体内联合两次光热治疗即可高效诱导ICD效应，激活机体的抗肿瘤免疫，有效抑制4T1荷瘤小鼠原位乳腺癌的肿瘤生长，实现88.9%的抑瘤率且无明显毒副作用。本研究提示构象锁定蜂毒肽联合PTT可显著增强TNBC的溶瘤免疫治疗，亦为中药来源抗肿瘤肽在TNBC治疗中的创新应用提供依据。

目的 从减轻阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)诱发房颤大鼠心脏氧化应激角度探讨硫化氢外源性供体硫氢化钠的作用机制，为其治疗房颤提供科学依据。方法 24只雄性SD大鼠，随机分为对照组、模型组和硫氢化钠干预组，每组8只；各组大鼠均在麻醉状态下行气管插管，模型组和硫氢化钠组采用循环selleck合成憋气法模拟OSA过程。全程记录心脏电生理过程，实验结束后采集血液及左心房组织。采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量；采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力；采用Western blotting法检测氧化应激指标还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶4和缝隙连接蛋白43的表达水平。结果 与模型组相比，硫氢化钠干预组房颤诱发率减少、房颤持续时间缩短(P均<0.05);与对照组相比，模型组左心房组织中NADPH氧化酶4表达增高，丙二醛含量增加、超氧化物歧化酶活力降低，伴随缝隙连接蛋白43的表达降低，硫Liproxstatin-1 IC50氢化钠干预后，NADPH氧化酶4表达抑制，丙二醛含量降低、Medial plating超氧化物歧化酶活力增加，缝隙连接蛋白43表达增加(P均<0.05)。结论 硫化氢可减轻阻塞性睡眠呼吸暂停诱发房颤心脏氧化应激损伤，从而降低房颤的发生维持，其作用机制与抑制NADPH氧化酶4蛋白激活，清除体内氧自由基，抑制脂质过氧化，继而上调缝隙连接蛋白43表达密切相关。

目的：探讨新型LncRNA FAR2P1在乳腺癌发生发展中的作用和影响。方法：癌症基因组图谱（The cancer genome atlas, TCGA,https://portal.gdc.cancer.Cellular immune responsegov/）数据库分析LncRNA FAR2P1差异表达量。根据169例LncRNA FAR2P1高表达的乳腺癌患者和1180例LncRNA FAR2P1低表达患者随访资料，分析LncRNA FAR2P1与乳腺癌患者预后的相关性。首先利用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA FAR2P1在乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、SKBR3）和乳腺正常上皮细胞（MCF-10A）中的表达水平；转染小干扰（si-RNA）获得低表达FAR2P1的细胞株, Cell Counting KRepSox溶解度it-8(CCK8)实验、EDU实验、克隆形成评估细胞增殖活力，Transwell实验探究FAR2P1对细胞迁移的影响；通过流式分析FAR2P1是否调节细胞凋亡；体内异种成瘤模型评估FAR2P购买Gefitinib-based PROTAC 31在体内对乳腺癌增值的调节作用。结果：LncRNA FAR2P1在MDA-MB-231、SKBR3中表达显著升高，并且与乳腺癌患者预后负相关。体外实验表明，敲低MDA-MB-231和SKBR3细胞中的FAR2P1后，细胞的增殖能力和迁移能力减弱，但是凋亡率明显升高。体内异种成瘤模型显示沉默FAR2P1相比对照，乳腺癌细胞增殖能力显著降低。结论：LncRNA FAR2P1在乳腺癌中高表达，并且参与调控乳腺癌增殖、凋亡和迁移。

目的 研究年龄≥60岁的非神经源性体位性低血压(OH)患者的血压及营养状况，分析非神经源性OH与营养状态的相关性。方法 横断面研究纳入2018年11月至2020年12月在湖北省中医院老年病科住院的年龄≥60岁患者852例，根据是否符合非神经源性OH诊断分为OH组268例和非OH组584例。观察受试者一般临床资料、合并症、功能评估及营养相关指标。结果 OH组高血压比例明显高于非OH组(73.5%vs 66.6%,P=0.044),工具性日常生活活动能力量表评分[(6.75±1.88)分vs(7.03±1.70)分，P=0.034]、NSC 127716血红蛋白[(127.94±14.01)g/L vs(130.13±14.58)extramedullary diseaseg/L,P=0.039]、血浆白蛋白[(38.91±4.05)g/L vs(39.63±3.95)g/L,P=0.015]水平明显低于非OH组。在高血压患者中，卧位状态收缩压与直立3 min收缩压差呈线性负相关(r_s=-0.079,P<0.01),卧位状态舒张压与直立3 min舒张压差呈线性负相关(r_s=-0.104,P<0.01)。体Cobimetinib半抑制浓度质量指数和血红蛋白降低，卧位收缩压和卧位舒张压升高是非神经源性OH发生的危险因素(P<0.01)。结论 在老年住院人群中，非神经源性OH的发生与卧位血压升高、营养状况低下及工具性日常生活能力下降有关。

目的 前期研究表明，追风伞影响了关节滑膜中与炎症、细胞凋亡、血小板聚集、蛋白质合成过程相关的内源性靶点的表达。这可能有助于其对骨关节炎的治疗。本研究通过这些相关机制来探讨追风伞对骨关节炎模型中关节滑膜损伤的保护作用。方法 使用碘乙酸单钠诱导大鼠骨关节炎模型。经追风伞Distal tibiofibular kinematics干预后SB203580化学结构，运用组织病理学和免疫组化分析、酶联免疫吸附分析和蛋白质印迹法进行相关指标的检测。结果碘乙酸钠可诱导骨关节炎模型的关节滑膜肿胀和显微结构的改变，并能引起关节滑膜中与炎症、凋亡、血小板聚集、蛋白质合成过程相关的靶点的表达失调。追风伞可以逆转这些病理过程以及相关靶点的异常表达。结论 追风Dorsomorphin细胞培养伞对碘乙酸钠诱导的骨关节炎模型中的关节滑膜损伤具有很好的保护作用。

目的 基于流式细胞术观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患者细胞质髓过氧化物酶(cMPO)及人类白细胞抗原B27(HLA-B27)表达情况，分Immune activation析两者与ALL发生及治疗效果的关系。方法 将2020年10月至2022年10月该院收治的45例ALL患者作为ALL组，另选取同期于该院治疗的45例非恶性血液疾病患者作为非ALL组。采用流LXH254浓度式细胞术检测两组患者于入院时cMPO、HLA-B27表达情况，统计患者基线资料。ALL患者给予常规治疗，根据临床疗效分为有效组、无效组。采用Logistics回归FG-4592说明书分析分析cMPO、HLA-B27与ALL发生及治疗效果的相关性。结果 ALL组cMPO阳性、HLA-B27阳性患者比例高于非ALL组(P<0.05)。二元Logistics回归分析显示，cMPO、HLA-B27阳性是ALL发生的危险因素(OR>1,P<0.05)。45例ALL患者经4次给药后，有效35例，无效10例，无效组骨髓幼稚细胞比例、Hb、PLT低于有效组(P<0.05),WBC高于有效组(P<0.05)。二元Logistics回归分析显示，cMPO、HLA-B27阳性是ALL患者治疗无效的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论 cMPO、HLA-27阳性表达与ALL的发生及临床疗效密切相关，临床可通过监测cMPO、HLA-27表达情况，针对性地制订治疗方案，从而提高ALL患者临床疗效。

目的：系统评价中西医结合治疗对比单纯西医治疗抗磷脂综合征（Antiphospholipid更多 Syndrome,APS）相关复发性流产的疗效。方法：计算机检索中国期刊全文数据库、维普数据库、万方数据库、中国生物医学数据库、Pub Med数据库自建库起至2022年3月，中医药治疗APS相关复发性流产的随机对照试验；用改良后Jadad评分量表评价文献质量并提取数据；最后用Rev Man 5.4软件进行Meta分析。结果：9篇文献纳入研究。中西医结合治疗APS相关复发性流产，可降低抗β2糖蛋白Ⅰ抗体水平[MD=-4.37,95%CI(-6.12,-2.62),P <0.000 01]、提高胎儿活产device infection率[RR=1.27,95%CI(1.16,1.selleck39),P <0.000 01]、降低流产率[RR=0.30,95%CI(0.20,0.44),P <0.000 01]、降低血小板聚集率[MD=-2.95,95%CI(-4.24,-1.66),P <0.000 01]、降低D-二聚体水平[MD=-0.06,95%CI(-0.07,-0.05),P <0.000 01]。结论：中西医结合治疗APS相关复发性流产疗效较单纯西医治疗更好。

目的 探更多讨高血压脑出血（HICH）患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达变化及其临床意义。方法 选择HICH患者100例（观察组），其中病情程度轻型32例、中型47例、重型21例，另选同期体检健康的志愿者52例（对照组）。采集所有研究对象空腹human respiratory microbiome外周静脉血，离心留取血浆，采用RT-qPCR法检测血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达。HICH患者出院后定期随访3个月，预后良好52例、预后不良48例。比较两组血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达以及不同病情程度HICH患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达，分析HICH患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达与病情程度的关系，采用受试者工作特征（ROC）曲线评估血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达对HICH患者预后不良的预测价值。结果 观察组血浆lncRNA FENDRR相对表达量显著高于对照组，miR-126相对表达量显著低于对照组（t分别为16.901、25.712,P均<0.05）。随着病情程度加重，HICH患者血浆lncRNA FENDRR表达逐渐升高，miR-126表达逐渐降低（F分别为62.263、21.578,P均<0.05）。HICH患者血浆lncRNA FENDRR表达与miR-126表达呈负相关关系（r=-0.562,P<0.05），与病情程度呈正相关关系（r=0.470,P<0.05），而miR-126表达与病情程度呈负相关关系（r=-3.652,P<0.05）。ROC曲线分析显示FG-4592分子式，血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达单独和联合预测HICH患者预后不良的曲线下面积分别为0.734、0.740、0.918，血浆lncRNA-FENDRR、miR-126表达联合预测HICH患者预后不良的曲线下面积显著高于二者单独（Z分别3.671、3.555,P均<0.05）。结论 HICH患者血浆lncRNA FENDRR高表达、miR-126低表达，二者表达变化与病情程度和预后不良密切相关。