目的 分析探究急诊糖尿病酮症酸中毒患者于护理期间应用危机值护理对于medicare current beneficiaries survey患者生活质量产生的影响。方法 随机选取2020年6月—2021年6月该院收治的急诊糖尿病酮症酸中毒患者76例为研究对象,遵照随机数字表法将其划分为对照组和观察组,每组38例。对照组采取常规护理,观察组基于常规护理应用危机值护理,对比评估两组护理效果。结果 观察组患者各项生活质量评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组护理满意度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相较于对照组,观察组并发症发生率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。护理前,两组空腹血糖、餐后2 h血糖及糖化血红蛋白对比,差异无统计学意义(P>0.0SBE-β-CD溶解度5);护理后,观察组血糖水平控制效果优于对照组,差异有购买Bafilomycin A1统计学意义(P<0.05)。结论 急诊糖尿病酮症酸中毒在护理期间选择应用危机值护理模式有效改善血糖及纠正酸中毒,提升了整体护理满意度。
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艾滋病初筛实验室中酶联免疫吸附试验检测HIV抗体影响因素研究
目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)synthetic genetic circuit检测HIV抗体过程中的影响因素。方法 选取2010年8月至2019年12月期间,在我单位参加自愿咨询检测(VCT)人群,娱乐场所人群及其他羁押人员共有8 385例接受HIV抗体检测作为R428分子量研究对象。在其10年间,不同时间内采集他们静脉血样,共用过厦门新创,珠海丽珠和北京万泰的ELISA试剂盒进行检测HIV抗体,分析艾滋病初筛阳性结果与确证阳性结果,研究影响初筛结果准确性的相关因素。结果 在8 385例受检者中,艾滋病初筛结果为阳性47例,确证阳性32例,15例为阴性,准确率为68.09%。结论 酶联免疫吸附试验是HIV感染重要筛查方法,通过初筛检测试验,能够初步筛查检出HIV抗体。在检测的过程中,标本质量、试剂选取以RepSox作用及操作的规范性,均会对检测结果的准确性产生影响,务必严格加强实验前、中、后的质量控制。其次,由于国家HIV检测策略为了不漏检HIV抗体阳性者,酶联免疫试剂必须有较高的敏感性,使试剂的检测限度有一定的宽幅,这样HIV抗体初筛就会存在一定假阳性。所以,初筛阳性结果与确证阳性结果不相符并不存在矛盾性。
吉林省科学技术奖一等奖 牛主要细菌性疾病防控关键技术研究与应用
<正>牛主要细菌性疾病防控关键技术研究与应用成果主要依托国家自然科学基金项目和吉林省科技发展计划项目等资助。由吉林农业大学、吉林省动物疫病预防控制中心、黑龙江八一农垦大学和沈阳农业大学研究人员共同完成。吉林农业大学吉林省新兽药研发与创新重点实验室团队马红霞教授和姜秀云教授分别为第一一和第:二完成人。主要研究内容:牛细菌性呼吸及消化系统疾病的流行已给我国养牛业造成了严重经济损molecular mediator失。细菌性疾病防控失败BMS-354825的原因主要包括诊断耗时长、有效防治药物及合理用药技术缺乏,因此,项目组针对牛主要细菌性疾病防控关键selleck抑制剂技术开展了系列研究,建立了牛结核、副结核分枝杆菌ELISA检测,牛支原体、多杀性巴氏杆菌免疫磁珠富集,牛主要病原菌耐药基因Taq–man靶位突变检测以及牛主要病原菌耐药基因丰度高通量基因芯片检测等方法;研制了牛副结核分枝杆菌DNA疫苗、
负载免疫抑制剂的生物支架对糖尿病小鼠免疫作用的体外研究
研究目的1型糖尿病(T1DM)是由自身反应性T细胞介导的器官特异的慢性自身免疫性疾病。它是由T和B淋巴细胞共同引起的,最终导致胰岛β细胞功能障碍与免疫破坏引起的高血糖症。目前基本明确:T1DM发病机制中的自身免疫环节是由自身反应性T细胞应答所诱导的,是在遗传和环境因素共同作用下,胰岛细胞自身抗原经过加工呈递为MHC-II,并活化CD4+T细胞,进而激活CD8+T细胞、巨噬细胞、NK细胞并损伤胰岛β细胞,导致T1DM。自身反应性T细胞的异常活化是导致T1DM的主要免疫机制,阻断其异常活化是根本上阻止T1DM的重要手段。由锌转运体8(Zn T8)介导的胰岛β细胞损伤是其发病的重要环节。抗原肽/MHC复合物(pMHC)与T细胞抗原受体(TCR)AY-22989之间特异性结合可以更有效的封闭TCR;并且T细胞的信号传导需要T细胞抗原受体二聚化,pMHC二聚体能够有效引起T细胞抗原受体二聚化,进一步封闭T细胞。已有的研究显示,可溶性Zn T8表位/MHC二聚体通过结合、封闭抗原特异性T细胞能够具有一定的诱导T1DM的免疫抑制功能。静电纺丝纤维膜的直径可达具有微米甚至纳米级,是作为细胞粘附、生长以及分化的最适合的载体。利用新型载体负载免疫抑制因子,通过诱导T1DM的免疫抑制,实现生物支架的免疫调节治疗1型糖尿病具有广阔的前景。本研究拟通过聚多巴胺(p DA)的梁嫁接技术使Zn T8表位/HLA-A2二聚体与明胶/聚乳酸静电纺丝支架结合,并保留二聚体结构的活性。通过二聚体的释放诱导T1DM的免疫抑制,最终实现生物支架的免疫调节治疗糖尿病小鼠,为阻断T1DM的发生发展提供新希望。研究方法为了表达HLA-A2/IgG1融合蛋白,我们将携带HLA-A2/IgG1融合基因的病毒载体转染293T细胞中。使用免疫荧光显微镜观察转染后细胞的荧光强度,并利用含嘌呤霉素的选择性培养基对转染阳性细胞进行筛选。应用RT-q PCR检测HLA-A2/IgG1融合基因的表达效果。将能够在含有嘌呤霉素的培养基中稳定生长的细胞单克隆培养,提取并检测细胞上清液中HLA-A2/IgG1融合蛋白的含量,继续培养并大量扩增其中生长状态良好同时目的蛋白表达水平较高的细胞。提取稳定过表达HLA-A2/IgG1基因的人293T细胞上清液,获得HLA-A2/IgG1融合蛋白,浓缩提纯后加入Zn T8(107-115)抗原肽,加载好抗原肽的Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体于4℃保存。依靠课题组前期研究所得的聚多巴胺改性的明胶/聚乳酸静电纺丝膜(PLLA/G-p DA膜),将Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体加载到PLLA/G-p DA膜上。所得材料为负载pMHC的明胶/聚乳酸静电纺丝膜(PLLA/G-p DA-pMHC膜)。使用扫描电镜(SEM)、傅里叶红外光谱测定(FTIR)、接触角测定、力学性能测定、噻唑蓝染色等技术,对静电纺丝纤维膜进行理化性质评价。提取NOD小鼠脾淋巴细胞,将Zn T8多肽与小鼠脾淋巴细胞体外共培养,扩增表位肽特异性CTL,应用ELISpot检测小鼠脾脏CD8+T细胞产生IFN-γ水平、CFSE染色方法检测表位肽刺激下CD8+T细胞增殖反应、ELISA试剂盒检测小鼠脾脏CD8+T细胞产Imidazole ketone erastin小鼠生穿孔素(Perforin)水平,体外观察复合支架对表位肽特异性CTL的免疫作用。研究结果固相合成的多肽经中压液相色谱纯化,所得到的多肽先后用HPLC鉴定纯度和质谱测定分子量。结果表明,合成的3条多肽实际分子量与理论分子量基本相同,说明目标多肽合成准确。经中压液相色谱纯化后纯度大于97%,达到了后续实验中要求的多肽纯度要求。Zn T8(107-115)与HLA-A2.1分子亲和力分析结果表明Zn T8(107-115)能与HLA-A2.1分子结合且亲和力较高。将携带HLA-A2/IgG1融合基因的病毒载体转染293T细胞中。72h后在荧光显微镜下可以观察到大量绿色荧光,表明感染效率较高,且细胞的形态正常,表明重组慢病毒成功感染人293T细胞。应用RT-q PCR检测HLA-A2/IgG1融合基因的表达效果,结果显示,与空白对照组组相比,转染HLA-A2/IgG1过表达质粒组表达效率明显升高(P<0.05),提示HLA-A2/IgG1质粒有显著过表达效果,具有较高的转染效率。表明获得了过表达HLA-A2/IgG1基因的人293T细胞。将能够在含有嘌呤霉素培养基中稳定生长的细胞继续进行单克隆化,提取细胞培养上清液检测其HLA-A2/IgG1融合蛋白的表达水平,大量扩增生长状态良好且表达目的蛋白水平高的细胞。提取稳定过表达HLA-A2/IgG1基因的人293T细胞上清液,获得HLA-A2/IgG1融合蛋白,浓缩提纯后应用ELISA试剂盒检测HLAA2/IgG1二聚体蛋白的浓度为757.5 ng/m L,Western-blot结果显示HLA-A2/IgG1融合蛋白在未被还原处理前以HLA-A2/IgG1二聚体形式存在,分子量约为150k Da。向HLA-A2/IgG1二聚体溶液中加入过量Zn T8(107-115)抗原肽,即可合成Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体。将Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体加载到PLLA/G-p DA膜上。所得材料为负载pMHC的明胶/聚乳酸静电纺丝膜(PLLA/G-p DA-pMHC膜)。扫描电镜结果表明接枝Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体后支架的直径及孔径以及力学性能均无明显改变。pMHC能够被接枝于PLLA/G-p DAsports & exercise medicine膜上且吸附率较高,提高了支架的亲水能力更强,更有利于纤维支架表面粘附细胞。MTT法检测细胞增殖实验表明PLLA/G-p DA-pMHC支架助于细胞的黏附和增殖,具有良好的细胞相容性。为下一步负载NOD小鼠BMSCs并移植入小鼠体内预防及治疗1型糖尿病提供固相载体。通过CFSE染色法检测PLLA/G-p DA-pMHC复合支架对Zn T8特异性CD8+T细胞的增殖能力,证明了PLLA/G-p DA-pMHC复合支架具有一定的抑制CTL增殖作用。使用ELISPOT方法检测PLLA/G-p DA-pMHC复合支架对Zn T8表位肽刺激特异性CTL分泌IFN-γ的影响,证明了PLLA/G-p DA-pMHC复合支架对Zn T8表位肽刺激特异性CTL分泌IFN-γ具有明显的抑制作用。同时应用ELISA检测表明PLLA/G-p DA-pMHC复合支架对Zn T8表位肽刺激特异性CTL分泌perforin的影响,证明了PLLA/G-p DA-pMHC复合支架对Zn T8表位肽刺激特异性CTL分泌perforin具有一定的抑制作用。结论1.HLA-A2/IgG1质粒转染293T细胞能够过表达HLA-A2/IgG1融合蛋白,浓缩提纯后加入Zn T8(107-115)抗原肽,能够合成Zn T8(107-115)/HLA-A2二聚体。2.PLLA/G-p DA-pMHC静电纺丝支架具有较适宜的纤维特征、亲水性以及生物相容性,增加了其表面细胞粘附水平。在体外抑制了糖尿病小鼠Zn T8特异性CD8+T细胞增殖和特定的CD8+T细胞的细胞毒性,具有一定的抑制反应性T细胞的能力。
雄激素对乳腺癌细胞增殖的影响
目的 探讨不同浓度雄激素对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 将雌激素受体(ER)+乳腺癌细胞株(MCF-7)传代培养,并制备不同浓度雄激素加入细胞培养液中进行细胞培养,通过CyQuant和噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖及细胞活力,分析不同浓度雄激素对乳腺癌细胞增殖的影响。结果 雄激素可以抑制乳腺癌细胞增殖,但不同浓度抑制效果不同。双氢睾酮(DHT)浓度为1.6 nmol/L时抑制最低,随着DHT浓度升高,则表现出促进增殖的作用。睾酮(T)浓度anti-infectious effect为2 nmol/L时抑制最低,且随着T浓度升高对细胞增殖的抑制作用越明显(P<Galunisertib溶解度0.05)。结论 当T达到特定浓度后则表现出抑制细胞增殖的作用,DHT在特定浓度时也是可以抑制乳腺癌细胞增殖确认细节的,但其同样具有刺激乳腺癌细胞增殖的作用。人体内雌雄激素代谢是一个复杂的通路,需要各种激素相互协同、拮抗起作用,因此无法将雄激素尤其是DHT确定为有抑制乳腺癌细胞增殖的作用。
2022年首创性小分子药物研究实例浅析
2022年,是全球经历新冠疫情侵扰的第三个年头,其对药物研发的影响也逐渐显现。美BMS-907351体内国FDA药物评价和研究中心(CDER)在过去一年里共计批准了37款新药,相比2021年50款新药获批的历史峰值有了明显下降。首创性(first-in-class)药物仍是新药获批的主力军,本年度共计有21款,其中小分子的首创性药物有7款。今年新药获批的总数虽大幅下降,但其中不乏多款具有重要借鉴意义的首创性小分子药物,例如首款口服丙酮酸激酶(PK)激活剂米他匹伐(mitapivat),首个选择性心肌β肌球蛋白三磷酸腺苷(ATP)酶变构抑制剂玛伐凯泰(mavacamten)molecular mediator,首个靶向TYK2(酪氨酸激酶2)的氘代变构抑制剂氘可来昔替尼(deucravacitinib),首个靶向HIV衣壳的长效抑制剂来那帕韦(lenacapavir)等。首创性药物的研究需要聚焦临床难点问题,通过全新的作用靶标和生物机制实现对特定疾病的治疗效果。在生物机制研究、靶标选择、分子筛选、先导物确定、成药性优CP-690550化学结构化等多方面研究过程中均存在巨大挑战,成功的首创性药物研发过程具有重要的学习和借鉴意义。本文通过浅析本年度3个首创性小分子药物的研发背景、研发过程和治疗应用,以期为更多的首创性药物提供研究思路与方法。
丙泊酚减少乳腺癌患者术后复发率的网络药理学和分子对接分析
目的 乳腺癌患者术后血液里的肿瘤细胞数sociology of mandatory medical insurance是复发率升高和生存率降低的独立影响因素。丙泊酚虽然已经被证实能减少乳腺癌患者术后血液循环里的肿瘤数,但是丙泊酚是否能直接与乳腺癌细胞相互作用、通过什么受体与乳腺癌细胞相互作用仍然处于未知状态,因此本研究通过网络药理学技术、癌症基因组图谱(TCGA)数据挖掘、分子对接技术试图探索出丙泊酚与乳腺癌细胞直接作用的靶点及相关的通路。方法 在PubChem数据库中检索出丙泊酚selleckchem AY-22989的3D结构和Canonical smiles序列并在Swiss Target prediction、Chembl、Drugbank三个数据库中整合出丙泊酚的作用位点,在Uniprot数据库中转换成基因名称。在DisGeNet、Gene cards数据库中检索出与乳腺癌相关的基因。将上述两组基因数据集取交集得到19个共有基因。将得到的基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)、基因本体论(GO)富集分析。筛选出与乳腺癌相关的KEGG通路和基因,并在TCGA乳腺癌的基因表达数据集中对筛选出的基因进行验证。最后使用分子对接技术将丙泊酚分子和雌激素受体α(ESRα)进行对接验证。结果 丙泊酚作用靶点数据集与乳腺癌相关基因数据集有19个共有基因,KEGG分析中雌激素信号通路是与乳腺癌最相关的通路,富集在这条通路上的基因有γ氨基丁酸B型受E-616452抑制剂体基因(GABBR1,GABBR2)、雌激素受体基因(ESR1)。在TCGA乳腺癌基因表达数据集中分析上述3个基因在肿瘤组织和非肿瘤组织中的差异性表达情况,发现上述3个基因在肿瘤组织和非肿瘤组织中存在明显的差异性表达,分子对接结果显示丙泊酚与ESRα结合良好。结论 丙泊酚可能通过与乳腺癌细胞膜上的GABA_B受体和雌激素受体结合,影响乳腺癌细胞的“膜启动类固醇信号传导”,从而减少乳腺癌细胞术中的微转移,减少乳腺癌患者术后血液循环内的肿瘤细胞数量,最终减少乳腺癌患者术后复发率。
深共熔溶剂提取黄酮类化合物的方法研究
现代科技的快速发展为天然产物有效成分的提取和功能研究提供了新途径,有关的研究和实graft infection践不断深入。近年来,低毒性、环境友好、价廉、操作简便的提取溶剂成为天然产物化学领域的热点之一。离子液体、超临界流体、深共熔溶剂等提取溶剂引起研究工作者的广泛关注。由氢键受体和氢键供体制备而成的二组分或三组分深共熔溶剂,其熔点显著低于各个组分纯物质的熔点,在天然产物化学、电化学、有机合成、药物缓释等领域应用潜力巨大。本文选择了11种不同Regorafenib配制摩尔比的深共熔溶剂,对其制备工艺进行了研究,分析其密度和黏度;采用深共熔溶剂分别提取杨梅叶、瓜蒌皮中的黄酮类化合物,并采用大孔树脂对提取物进行分离纯化,并对杨梅素和芦丁含量测定,优化了提取工艺;最后对提取分离的芦丁、杨梅素进行了抗氧化活性的研究。主要进行了以下研究工作:(1)研究了深共熔溶剂制备及其物理性质。结果发现,制备的11种深共熔溶剂在氢键受体与氢键供体相同的条件下,随着氢键供体摩尔比的增大,制备深共熔溶剂消耗时间更少。随着温度的上升,深共熔溶剂的黏度在逐渐降低,深共熔溶剂的黏度与氢键供体的黏度有关。氢键供体为多元醇类制备的深共熔溶剂密度值更小,深共熔溶剂的密度由氢键供体决定。(2)研究了杨梅叶中黄酮类化合物提取、分离及抗氧化性。研究发现,使用11种含水率为30%的深共熔溶剂提取杨梅叶中杨梅素,与使用体积分数80%的乙醇比较,选择DES-5(氯化胆碱-草酸)的组合可获得较好的提取效果。响应面试验结果表明,获得最佳的提取条件为:含水率19%,液料比37:1 m L/g,提取温度72℃,提取时间45 min,在此条件下,杨梅素提取量为21.58 mg/g。最优组合的提取液经AB-8大孔吸附树脂吸附解吸,得到的最佳结果为吸附速率为1 BV/hr,使用无水乙醇解吸速率为1BV/hr,解吸体积为2 BV。DPPH法与·OH自由基法对杨梅素的抗氧化活性的研究中,在2μg/m L~16μg/m L的浓度下杨梅素的清除率要比Vc的更好。(3)研究了瓜蒌皮中黄酮类化合物提取、分离及抗氧化性。研究发现,使用体积分数为80%甲醇与制备的11中含水率为30%CP-690550细胞培养的深共熔溶剂提取瓜蒌皮中的芦丁,采用DES-3(氯化胆碱-乙二醇)可获得较好的提取效果。采用响应面法优化得到的最佳提取工艺条件为:含水率36%,液料比25:1 m L/g,提取温度57℃,提取时间34 min,在此条件下,芦丁提取量为28.77μg/g。使用AB-8型大孔树脂分离纯化瓜蒌皮中的芦丁,甲醇解吸,旋蒸。在瓜蒌皮中的芦丁浓度为20μg/m L~180μg/m L的范围内对DPPH具有良好的抗氧化作用;在Vc与瓜蒌皮中的芦丁浓度为20μg/m L~160μg/m L的范围内对·OH自由基的清除率逐渐增大,瓜蒌皮中的芦丁的抗氧化效果比Vc略差。
Smarcad1重组蛋白表达及多克隆抗体验证
目的:建立稳定的实验室多克隆抗体制备流程,选择Smarcad1作为目的基因进行重组蛋白表达纯化与多克隆抗体制备,并对其进行特异性验证。方法:以本实验室的pcDNA3.1-Flag-Smarcad1质粒作为模板,构建pEPF-07321332化学结构T-16b-Smarcad1-F1原核表达质粒。表达Smarcad1-F1蛋白,并纯化。利用蛋白质免疫印迹,蛋白质免疫共沉淀和免疫荧光实验检测抗体特异性。interface hepatitis结果:PCR鉴定结果显示,成功构建pET-16b-Smarcad1-F1表达质粒。蛋白表达纯化Torin 1分子式实验中,考马斯亮蓝染色检测,相较于诱导前,加入IPTG后Smarcad1蛋白成功诱导表达,且纯化出分子量为27 kD的目的蛋白。Western印迹证明,制备的抗体能够特异性识别内源性Smarcad1蛋白。蛋白质免疫共沉淀实验显示,相较于对照组,制备的抗体能够与Smarcad1蛋白结合。免疫荧光实验检测所制备抗体的特异性,结果显示制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白。结论:成功构建了Smarcad1原核表达质粒,利用原核蛋白表达纯化出Smarcad1蛋白,利用该蛋白制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白,为后续原核表达蛋白及多克隆抗体制备提供思路。
瑞巴派特联合奥美拉唑治疗慢性胃炎的临床效果
目的 观察瑞巴派特联合奥美拉唑DNA-based medicine治疗慢性胃炎的临床效果。方法 选取2019年12月—2020年11月中山亚太医院收治的慢性胃炎患者62例,根据数字随机表法分为观察组和对照组,每组31例。对照组Colforsin MW行奥美拉唑治疗,观察组行瑞巴派特联合奥美拉唑治疗,2组患者均治疗2个月。比较2组患者临床疗效、临床症状消退时间,治疗前后胃肠道激素水平、症状积分及不良反应。结果 观察组患者总有效率为90.32%,高于对照组的64.52%(χ~2=5.905,P=0.015);观察组患者胃部烧灼点击此处、反酸及上腹疼痛症状消退时间均短于对照组(P<0.01);治疗2个月后,2组患者胃泌素(GAS)、胃动素(MOT)及生长激素(GH)水平均高于治疗前,且观察组高于对照组(P<0.01);2组患者上腹疼痛、腹胀、嗳气及乏力积分均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.01);2组患者不良反应总发生率比较差异无统计学意义(χ~2=1.040,P=0.308)。结论 瑞巴派特联合奥美拉唑治疗慢性胃炎的效果较好,可改善患者临床症状,还可纠正患者胃肠道激素分泌异常情况,改善预后,可推广应用。