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Argonaute(Ago)蛋白质是广泛存在于真核生物和原核生物的可编程核酸酶。真核Agos(eukaryotic Agos,e Agos)利用向导RNA(guide RNA,g RNA)靶向切割RNA,并在RNA干扰(RNAi)途径中起关键作用。大多数已报道的原核Agos(prokaryotic Agos,p Agos)利用向导DNA(guide DNA,g DNA)靶向切割DNA,在抵御外来遗传物质Roxadustat生产商入侵和细胞复制等途径发挥作用。最近,几种靶向RNA的p Agos被报道,尽管才开始对它们的功能和作用机制展开研究,但它们在RNA靶向等领域已展示出较大的应用潜力。为了扩展靶向RNA的p Agos的种类,本研究以Kurthia massiliensis来源的能够靶向RNA的Km Ago的PIWI结构域作为种子序列在NCBI中进行BLAST,并对候选p Agos进行表达纯化和生化性质分析。初步实验表明,Verrucomicrobia来源的VbAgo在5′端磷酸化的DNA(5′P-g DNA)和5′端羟基化的DNA(5′OH-g DNA)引导下切割互补的RNA靶(t RNA)。本文系统研究了VbAgo的酶学性质和催化性质,具体研究结果如下:1.VbAgo在25-65℃利用5′Pselleckchem LEE011-g DNA和5′OH-g DNA切割RNA靶,在37℃专一性切割RNA靶而非DNA靶,在≥45℃表现出微弱的DNA靶(tsandwich bioassay DNA)切割活性;2.VbAgo对盐浓度较为敏感,Na Cl浓度≥100 m M会抑制切割活性;3.VbAgo利用12-44 nt的5′P-g DNA和13-44 nt的5′OH-g DNA切割RNA靶,且在15 nt和16 nt g DNA引导下切割活性最高;4.VbAgo依赖Mn~(2+)和Mg~(2+)切割RNA靶,并且Mg~(2+)优于Mn~(2+);5.VbAgo对g DNA和RNA靶之间的错配具有低耐受性,在g DNA的6、9、11和12位引入单核苷酸错配和3-15位引入双核苷酸错配会显著降低VbAgo的切割效率;6.VbAgo对具有不同5′端核苷酸的g DNA没有明显偏好性,同时表现为多转化数酶;7.VbAgo在37℃和50℃能利用5′P-g DNA切割含有高级结构的RNA靶;综上所述,VbAgo具有在37℃专一性切割RNA靶的活性,对不同首位核苷酸的向导链没有明显偏好性,并且还能切割具有高级结构的RNA靶,这些特性拓宽了对Ago蛋白质的理解。VbAgo可能应用于RNA编辑,扩展了基于p Ago的RNA操纵工具箱。

Argonaute(Ago)蛋白质是广泛存在于真核生物和原核生物的可编程核酸酶。真核Agos(eukaryotic Agos,e Agos)利用向导RNA(guide RNA,g RNA)靶向切割RNA,并在RNA干扰(RNAi)途径中起关键作用。大多数已报道的原核Agos(prokaryotic Agos,p Agos)利用向导DNA(guide DNA,g DNA)靶向切割DNA,在抵御外来遗传物质Roxadustat生产商入侵和细胞复制等途径发挥作用。最近,几种靶向RNA的p Agos被报道,尽管才开始对它们的功能和作用机制展开研究,但它们在RNA靶向等领域已展示出较大的应用潜力。为了扩展靶向RNA的p Agos的种类,本研究以Kurthia massiliensis来源的能够靶向RNA的Km Ago的PIWI结构域作为种子序列在NCBI中进行BLAST,并对候选p Agos进行表达纯化和生化性质分析。初步实验表明,Verrucomicrobia来源的VbAgo在5′端磷酸化的DNA(5′P-g DNA)和5′端羟基化的DNA(5′OH-g DNA)引导下切割互补的RNA靶(t RNA)。本文系统研究了VbAgo的酶学性质和催化性质,具体研究结果如下:1.VbAgo在25-65℃利用5′Pselleckchem LEE011-g DNA和5′OH-g DNA切割RNA靶,在37℃专一性切割RNA靶而非DNA靶,在≥45℃表现出微弱的DNA靶(tsandwich bioassay DNA)切割活性;2.VbAgo对盐浓度较为敏感,Na Cl浓度≥100 m M会抑制切割活性;3.VbAgo利用12-44 nt的5′P-g DNA和13-44 nt的5′OH-g DNA切割RNA靶,且在15 nt和16 nt g DNA引导下切割活性最高;4.VbAgo依赖Mn~(2+)和Mg~(2+)切割RNA靶,并且Mg~(2+)优于Mn~(2+);5.VbAgo对g DNA和RNA靶之间的错配具有低耐受性,在g DNA的6、9、11和12位引入单核苷酸错配和3-15位引入双核苷酸错配会显著降低VbAgo的切割效率;6.VbAgo对具有不同5′端核苷酸的g DNA没有明显偏好性,同时表现为多转化数酶;7.VbAgo在37℃和50℃能利用5′P-g DNA切割含有高级结构的RNA靶;综上所述,VbAgo具有在37℃专一性切割RNA靶的活性,对不同首位核苷酸的向导链没有明显偏好性,并且还能切割具有高级结构的RNA靶,这些特性拓宽了对Ago蛋白质的理解。VbAgo可能应用于RNA编辑,扩展了基于p Ago的RNA操纵工具箱。

目的 基于机器学习(ML)算法构建孕产妇围产期抑郁症(PND)辅助诊断预测模型并评估不同ML算法模型的性能。方法 采用9条目患者健康问卷抑郁量表(PHQ-9)对5 814例孕产妇(产前研究对象4 665例，产后研究对象1 149例)进行评估，收集7种量表的19个量表维度变量和人口学特征作为观察变量。按照年龄分别对产前、产后研究对象进行1∶1倾向性评分匹配，利用单因素Molecular Biology Services分析及Pearson相关系数确定特征选择变量。基于Logistic回归模型、随机森林(RF)、支持向量机(SVM)、极限梯度提升树(XGBoost)、反向传播(BP)神经网络这5种ML算法分别纳入所有变量和特征选择变量集，构建产前、产后抑郁的诊断模型。采用5折交叉验证方法评估模型的预测性能，评价指标包括灵敏度、特异度和曲线下面积(AUC)。结果 纳入不同变量的情况下，通过5种ML算法分别基于产前研究对象、产后研究对象构建的预测模型的灵敏度、特异度、AUC均在0.600～0.900范围内；RF算法在产前预测模型(纳入所有变量时，AUC为0.834;纳入特征选择变量集时，AUC为0.849)和产后预测模型(纳入所有变量时，AUC为0.873;纳入特征选择CP-456773配制变量集时，AUC为0.864)的构建中均为最优算法。结论 基于5种ML算法构建的预测模型均可有效预测孕产妇PND风险，其中以BYL719RF算法的表现最优，为开发快速筛查和诊断PND的辅助工具提供了参考依据。

全球每年有70万人死于抗生素耐药性感染,抗生素耐药被selleckchem GSK J4认为是全球卫生面临的最大威胁之一。然而,近30年没有全新作用机制的抗生素上市。因此,研发对多重耐药菌有效的新型抗生素是迫在眉睫的事。百里酚是对金黄色葡萄球菌有一定抗菌活性且公认安全的天然产物,但其抗菌活性较弱限制了其作为潜在抗菌药物的发展。我们通过对百里酚进行结构修饰提高其抗菌活性,通过毒性活性实验筛选出了最有成药潜力的化合物Thy3d并对其展开抗菌机制的研究。主要研究成果如下:(1)对改造后的一系列化合物进行了活性毒性筛选。我们对得到的化合物进行了最小抑菌浓度的测定。发现Thy1、Thy2和Thy4的抗菌活性与改造前相比仅提高了4～8倍,而Thy3的抗菌活性比改造前高出32倍。随后,我们测定了Thy3与三苯基膦(TPP)偶联物的最小抑菌浓度,检测出其抗菌活性比天然百里酚(Thy)提高了100倍以上。最后,通过溶血性实验和细胞毒性实验,我们筛选出了抗菌活性好,毒性低的化合物Thy3d。(2)对Thy3Disinfection byproductd进行了体内外活性研究。在体外活性研究中,我们发现Thy3d没有抗生素联用效果和抑制生物膜效果。通过杀菌曲线实验发现Thy3d属于浓度依赖性杀菌作用。持留菌实验结果显示,Thy3d在高浓度下能够清除一定数量级持留菌。通过耐药实验发现Thy3d不易产生耐药性。我们还成功建立了小鼠皮下感染模型,对Thy3d进行了体内活性研究。结果证明,Thy3d有着优异的体外抗菌能力,并且对体内细菌有一定的清除作用。(3)对Thy3d的抗菌机制进行了探索。通过MD模拟预测了Thy3d对细菌细胞膜的作用。随后用膜通透、膜电位、ROS、DNA泄露实验对Thy3d对细菌细胞膜的作用进行验证,结果发现Thy3d能够穿透细菌细胞膜并引起细胞膜电位的去极化,引起氧化应激,导致细菌细胞内ROS水平升高,并能造成细菌细胞内DNA泄露。最后在场发射扫描电镜下观察Thy3d对细菌细胞膜形态的改变。我们发现,Thy3d通过破膜机制发挥抗菌作用。本研究成功筛选出了抗菌活性好且活性-毒性窗口较大的化合物Thy3d,并发现Thy3d的抗菌功能是通过破坏细菌的细胞膜来实现的,这种作用于非靶点蛋白的药物不易诱导细菌产生耐药性。综上,Thy3d具有抗多重耐药菌作用,有被更多开发成为新型抗菌药物的潜力。

五肽重复序列(pentatricopeptide repeat,PPR)蛋白在细胞器基因的Lapatinib试剂转录后表达调控中发挥着重要作用。近年来大量的PPR基因被鉴定和深入研究,尽管已有部分PPR蛋白已报道在水稻线粒体及叶绿体发育中发挥着重要作用,但PPR蛋白在介导植物免疫中的调控机制尚不清楚。基因OsMISF9编码线粒体定位的五肽重复序列(PPR)蛋白。具有6个PPR基序,它编码A T4G01400的同源基因。本课题利用CRISPR-Cas9基因编辑技术鉴定得到了一种水稻(Oryza sativa)突变体osmisf9。osmisselleckchem Dorsomorphinf9突变体表现出对水稻细菌性条斑病(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)的抗性,qPCR分析表明osmisf9突变体中免疫相关基因PR1a、_PR1b、NPR1等基因上调表达,表明OsMISF9可能负调控植物免疫。进一步的分析表明,OsMISF9功能HPV infection丧失影响了线粒体nad2、nad5等转录本的剪接,同时nad家族基因是编码线粒体复合物Ⅰ的核心亚单位,其剪接缺陷影响了线粒体复合物Ⅰ的组装并导致了线粒体活性氧水平的降低、替代呼吸途径的氧化酶基因表达量升高和线粒体形态的破坏。研究结果表明,PPR蛋白OsMISF9对线粒体的发育和功能至关重要,其抑制水稻免疫响应。

近年来,环境污染问题日益突出,实现对环境污染物的实时监测是环境综合治理的关键环节。气体传感器是获取污染物气体信息的感知单元,在各种类型的传感器中,电阻式气体传感器具有成本低、体积小、易集成、可实时监测等优点,是目前应用和研究最为广泛的一类气体传感器。对于电阻式气体传感器,敏感材料是其关键部件,器件通过敏感材料与外界气体发生具有电子得失的表面反应来改变材料电阻,以此达到监测气体的目的。因此,对敏感材料的研究与开发,是提高气体传感器敏感特性的主要途径之一。金属有机骨架结构(MOF)是一类由金属离子与有机配体连接而成、具有网络骨架结构的新型多孔材料,它同时具有大比表面积、高孔隙率、结构可调等优势。然而,和传统金属氧化物半导体(MOS)的气敏性能相比,MOF在灵敏度和稳定性上仍处劣势,多孔、大比表面积的优势并没有得到充分发挥,而导致这一结果的关键原因在于:MOF导电性差,使得气-固反应信号很难传输并转换成器件的电阻intestinal immune system信号;此外,MOF无法烧结、成膜质量差所带来PR-171核磁的不良接触,进一步加剧了敏感膜导电性的不足。所以使得当前对MOF的气敏性能研究只能集中在其烧结后的金属氧化物,或者通过与其他金属氧化物复合上,确认细节而对MOF自身的气敏特性研究却非常匮乏。因此,我们开展了以下研究:(1)在陶瓷衬底表面直接生长基于原始MOF阵列(ZIF-67纳米片)的坚固的气敏薄膜。为了提高MOF阵列的导电性,采用阴离子交换法将普鲁士蓝类似物(PBA)偶联到ZIF-67阵列表面。这种置换反应在保持其片状结构基本不变的同时还可以显著提高MOF薄膜的导电性。所设计的ZIF-67/PBA薄膜具有良好的稳定性、较高的响应值(R_g/R_a=11.7)和较快的响应/恢复速度(5/182 s),这得益于其坚固的结构和改善的电导率。(2)将MOF(ZIF)薄膜化学接枝到导电氧化石墨烯(GO)纳米片的表面。制备的ZIF@GO复合材料在室温下对200 ppm的醋酸不仅具有较高的响应值(R_a/R_g=13.07),而且具有较快的响应/恢复速度(119/312 s)。此外,ZIF@GO复合材料对醋酸和其他干扰气体(S_(乙酸)/S_(干扰气体))的响应值之比高达7.72,而纯GO对氨和其他干扰气体(S_氨/S_(干扰气体))的响应值之比仅为1.23。值得注意的是,通过简单地在复合材料的ZIF结构中引入Co物种,检测气体的最高响应从醋酸转变为了三乙胺。

孤独症是一种神经系统失调导致的发育障碍,当前的医疗水平有限,无法预防和治愈孤独症,只能通过教育康复减轻患者症状、帮medical risk management助其融入社会。近年来孤独症的患病率呈现持续上升趋势,根据相关研究统计结果,我国孤独症谱系障碍人群已超过1000万人,并且存在确诊不及时、配套资源不足、对大龄孤独症患者的社会支持有限等问题。媒体作为公众获取信息的重要来源,作为社会治理和实现公共福祉的重要参与者,其行动将直接作用于社会认知,并将有助于社会各界统筹协调以改善此类问题。本研究选择《澎湃新闻》的孤独症报道为研究对象,采用内容分析的研究方法,对《澎湃新闻》2014年-2022年期间关于孤独症的新闻报道进行梳理分析,并结合建设性新闻视域下的四种建设性新闻实践类型,探究《澎湃新闻》作为新型主流媒体对孤独症的报道在内容和形式上的实践特征,反思《澎湃新闻》孤独症报道实践中的不足,并立足于此思考改善路径,提升主流媒体促进解决此类社会问题的实践水平和实践能力。研究发现,《澎湃新闻》的孤独症报道对建设性新闻理念的整体应用频率较高,从建设性新闻四类分支实践的内容呈现上来看,方案新闻报道兼顾微观经验与宏观布局,预期新闻重点关注前沿探索与关键突破,和平新闻呈现多方观点以促进社会理解与对话,恢复性叙事重点讲述康复故事和社会关爱活动;在传播方式上,图文、视频形式的报道占比较多,报道的可视化程度较高。但报道样本中患者本人较少成为主要消息来源,乡村患者群体集体失语,报道的信源、地域均衡性不足;在非建设性新闻报道中,正面宣传类报道未能兼容建设性;方案新闻的参考性AZD1152-HQPA配制与预期新闻的前瞻性不足。最后,针对《澎湃新闻》孤独症报道出现的不足,提出了突出患者主体性,提升报道均衡性;加强问题意识,促进协同共建;协调方案逻辑,加强探索实践等Cell Cycle抑制剂报道建议。

矮牵牛是世界各地广泛应用的花坛花卉和研究花发育的模式植物。研究矮牵牛雄蕊发育调控网络、创制雄性不育系材料可以缩短杂交育种的周期、降低生产成本,具有重要的科学和实践意义。课题组前期研究表明转录因子PhMYC2a在茉莉酸介导的矮牵牛花药发育中发挥着重要的功能。为了进一步验证茉莉酸通过PhMYC2a对矮牵牛花药发育的影响并鉴定PhMYC2a的下游调控基因,本研究观测了PhMYC2a超量表达株系OE-F-16的花药组织结构和茉莉酸甲酯处理植株的花器官表型,进一步通过花药转录组测序筛选获得了PhMYC2a的下游候选基因,并对其进行了生物信息学分析和酵母单杂验证。主要的研究成果如下:(1)与野生型矮牵牛相比,OE-F-16株系的花药畸形,无花粉粒产生且绒毡层延迟降解;PhMYC2a的表达量在0.3 cm至1.5 cm时期的花药中逐渐升高,随后显著降低。茉莉酸甲酯处理导致矮牵牛花药尺寸变小、花粉萌发率和可萌发花粉数显著降低以及PhMYC2a在花药中的表达量显著上调。(2)转录组测序各差异组的差异表达基因数量从1514个至8308个不等,它们主要富集在RNA修饰、茉莉酸介导的信号通路调控、热响应、植物激素信号转导和α-亚麻酸代谢等通路;在不同株系(OE-F-16和野生型)和不同处理(MeJA处理和对照组)的8个差异分组中获得了33个共有的差异表达基因,其中包括8个sHSP基因。定量验证结果显示12个基因在不同样本间的表达量变化同转录组数据保持一致;部分茉莉酸生物合成相关基因响应茉莉酸甲酯的刺激,部分茉莉酸信号转导相关基因则在OE-F-16植株花药中的表达量高于野生型。(3)顺式作用元件预测结果显示,8个sHSP基因的启动子上存在MYB结合元件、MYC结合元件、G-boxNeuropathological alterations元件和MeJA响应元件;基因表达模式分析表明,不同的sHSP基因在矮牵牛花药发育中的表达量变化趋势不同。酵母单杂点对点验证结果显示,PhMYC2a在酵母体内与HSP21.9、HSP26.9、HSP16.1、HSP40.8和HSP70启动子的结合呈阴性。尽管植物MYC2和茉莉酸的相关功能研究已较为深入,但多与抗性相关,且在观赏植物中的研究仍然不足。本研究利用外源MeJA处理和转录组测序,以期探究PhMYCLiproxstatin-1体外2a和茉莉酸在矮牵牛花药发育中的功能,挖掘PhMYC2a下游调控基因,完善以PhMYC2a为核心的矮牵牛花药发育调控网络。研究结果表明,PhMYC2a和茉莉酸参与调控矮牵牛花药绒毡层降解和花粉粒发育等过程;矮牵牛的茉莉酸生物合成既存在正反馈调节又存在PhMYC2a介导的负反馈调节;PhMYC2a可能通过与其他蛋白互作或直接结合外显子序列进而GDC-0068 molecular weight调控上述sHSP基因的表达。

目的：分析抑郁症患者行无抽搐电休克治疗(MECT)后发生不良反应的危险因素。方法：选取2020年2月—2021年9月收治的抑郁症患者140例作为研究对象，对其病历资料、870人次MECT治疗过程进行观察，结合其病历资料和诊疗信息等，对患者的不良反应发生率进行分析，并对引起患者不良反应发生的危险因素进行单因素及多因素分析。结果：140例抑郁症患者中，行MECT后出现不良反应的患者共25例，不良反应发生率为17.86%,不良反应发生次数从高到低依次为烦躁不安、头痛、发热、呼吸道分泌物过多、呼吸恢复时间延长GW4869细胞培养、恶心呕吐、记忆障碍。经单因素分析结果表明，抑郁症患者行MECT后不同性别、吸氧、心理疏导均会影响不良反应的发生情况(P<0.05)。经多因素分析结果表明，MECT后低流量吸氧、心理疏导是影响不良反应发生的独立影响因素(P<0.05)。结论：抑郁症患者在接受MECBreast biopsyT后，极易出现烦躁不安、头痛、呼吸道分泌物过多与发热等不良反应，在治疗后给予患者低流量吸氧、心理疏导等干预措施能够有效减少其不更多良反应的发生。

目的 优化乳胶灌注技术，并将该技术应用于小鼠头面部静脉血管模型制作。方法 将9只8周龄、体质量（25.0±1.3） g的雄性C57BL/6小鼠随机Zemstvo medicine分成60%乳胶生理盐水组、60%乳胶肝素组和30%乳胶肝素组，相应试剂灌注完成后将标本浸泡于4℃甲醛固定液中，24 h后解剖观察并测量颈外GSKJ4半抑制浓度血管直径。结果 于小鼠颈外静脉灌注乳胶灌注液200μL后，各组小鼠的眶上静脉、眶下静脉、颞静脉、面后静脉、咬肌静脉、颈MK-1775半抑制浓度外静脉等均得到灌注，通过对灌注后面部血管末端分支、舌下静脉及舌尖小静脉的灌注程度比较后发现，30%乳胶肝素组的灌注效果最佳，其次为60%乳胶肝素组，而60%乳胶生理盐水组的灌注效果最差。结论 优化后的乳胶灌注技术可有效灌注小鼠头面部的静脉血管，该技术可为小鼠面部静脉血管的走向及形态研究提供很好的参考。