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研究目的:心血管疾病(cardiovascular diseases,CVDs)是我国城乡居民死亡的首要原因,其中,年龄是诱导CVDs的独立危险因素。在我国社会人口老龄化现象日趋严重的背景下,揭示衰老过程中,心功能和结selleckchem INCB28060构变化的相关分子调控机制,寻找衰老早期有效预防CVDs风险增高的方式方法至关重要。近年来相关研究报道发现,氧化应激是心脏衰老调控机制的核心环节之一,在心脏衰老中具有重要意义。随着个体年龄增长,心肌组织中氧化应激水平呈现逐步升高的趋势,导致内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)、线粒体功能障碍和细胞凋亡等现象发生,是导致CVDs发生的关键原因。内质网是真核细胞内主要的蛋白质合成细胞器,当细胞内错误折叠蛋白质积累过多时,即可诱导未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response, UPR)的发生,持续的UPR和错误折叠蛋白积累过多,最终将导致ERS发生。在病理状态下,ERS可诱导细胞内相关稳态失衡,最终将导致细胞凋亡现象的发生。运动可有效改善心脏抗氧化能力,降低CVDs发生风险,但运动是否可改善衰老进程中心肌细胞损伤现象仍需进行确证。组蛋白赖氨酸甲基转移酶1(Smyd1)可参与表观遗传修饰,在调控心脏和骨骼肌生长发育、心脏和骨骼肌生理和病理状态以及成体心脏功能维持中发挥重要作用,并参与心肌细胞线粒体能量代谢和内质网稳态调控,但其在心脏中表达的年龄变化特征以及在衰老心脏的运动保护中的相关作用和可能机制尚不清楚,有待进一步深入研究。在衰老早期进行运动干预是否可通过调节衰老早期心肌组织Smyd1表达,改善心肌氧化应激、ERS和细胞凋亡水平,降低衰老诱导的CVDs发生风险概率,其可能机制如何,尚无相关报道,仍需进一步研究探索。本研究通过建立衰老早期小鼠抗阻训练模型,构建Smyd1-shRNA和Smyd1过表达慢病毒干预的衰老心肌细胞模型,检测衰老早期进行抗阻训练对小鼠心肌Smyd1蛋白表达、氧化应激、ERS和细胞凋亡的影响,探讨Smyd1在其中的可能作用及相关调控机制,为今后衰老心脏损伤的运动预防和干预靶点筛选提供实验依据。研究方法:选择健康状态的3月龄和15月龄雌性昆明小鼠,随机分为年轻安静组(Young-Sed)、年轻运动组(Young-RT)、衰老早期安静组(Old-Sed)和衰老早期运动组(Old-RT),共4组,每组8只。运动组小鼠进行8w负重爬梯(爬梯总长1m、每梯间隔1cm、倾斜角度为70°)抗阻运动。第1w为适应性训练,以无负重起始,按照15%体重(Body weight,BW)/d的负荷递增,分别增至35%BW(衰老早期运动组)和70%BW(年轻运动组)。第2-8周以此负荷进行训练,3次为1组,共进行8组,组间间歇2min,5d/w×7w。采用DHE染色检测小鼠心肌氧化应激水平,采用Western Blotting检测Smyd1、抗氧化酶(SOD1、SOD2)、ERS(GRP78、CHOP和ATF4)和细胞凋亡(Bcl-2和Bax)相关蛋白表达。体外培养H9C2大鼠心肌细胞,给予10g/LD-gal干预48h,制备细胞衰老模型;给予Smyd1-shRNA和Smyd1过表达慢病毒载体干预,取感染复数为10,制备细胞Smyd1敲低和过表达模型;给予50 nM Nrf2-siRNA干预48h,制备细胞Nrf2表达敲低模型;给予1 mM AICAR干预24h,制备细胞模拟运动模型。采用Western Blotting检测细胞Smyd1、抗氧化酶(SOD1、SOD2)、ERS(GRP78、CHOP和ATF4)和细胞凋亡(Bcl-2和Bax)相关蛋白表达;采用DHE染色检测心肌此网站细胞氧化应激水平,采用TUNEL染色检测心肌细胞细胞凋亡水平。研究结果:动物实验结果发现,抗阻训练可上调小鼠心肌Smyd1蛋白表达,降低衰老导致小鼠心肌组织氧化应激和ERS相关因子表达水平升高。与Young-Sed组相比,Young-RT组小鼠心肌组织Smyd1蛋白表达显著升高(P<0.01);与Old-Sed组相比,Old-RT组小鼠心肌组织Smyd1蛋白表达显著升高(P<0.01);与Young-Sed组相比,YEdiacara Biotaoung-RT组小鼠心肌组织SOD1蛋白表达显著升高(P<0.01),Old-Sed组小鼠心肌组织Trb3蛋白表达显著升高(P<0.05);与Young-Sed组相比,Young-RT组小鼠心肌组织GRP78蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2/Bax表达降低(P<0.05),Old-RT组小鼠心肌组织Bcl-2/Bax表达降低(P<0.01),ATF4(P<0.01)、CHOP(P<0.01)、c-Caspase12(P<0.05)蛋白表达升高;与Old-Sed组相比,Old-RT组小鼠心肌组织ATF4(P<0.05)和CHOP(P<0.01)蛋白表达降低。细胞实验结果发现,Smyd1介导衰老心肌细胞ERS和细胞凋亡。与control组相比,D-gal干预下调H9C2细胞Smyd1蛋白表达(P<0.01),升高H9C2细胞ROS水平(P<0.01);与D-gal干预组相比,Smyd1过表达慢病毒显著上调H9C2细胞Smyd1蛋白表达,降低H9C2细胞氧化应激水平(P<0.01);与载体对照组相比,D-gal显著增加H9C2细胞CHOP蛋白表达(P<0.05),降低H9C2细胞Bcl-2/Bax水平(P<0.01),增加H9C2细胞TUNEL阳性细胞数目(P<0.05);与载体对照+D-gal组相比,Smyd1过表达显著降低了H9C2细胞GRP78(P<0.01)、ATF4(P<0.01)和CHOP(P<0.05)蛋白表达,上调H9C2细胞Bcl-2/Bax水平(P<0.01);与正常对照组相比,Nrf2-siRNA干预组H9C2细胞ATF4(P<0.01)蛋白表达显著升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01);Nrf2-siRNA干预显著上调H9C2细胞ATF4蛋白表达(P<0.01);同时,Nrf2-siRNA干预显著降低Smyd1过表达慢病毒+D-gal组H9C2细胞Bcl-2/Bax水平(P<0.01);与vector组相比,Smyd1-shRNA组H9C2细胞Smyd1蛋白表达明显降低(P<0.01),ATF4(P<0.01)和CHOP蛋白表达(P<0.01)显著升高,vector+D-gal组、Smyd1-shRNA组H9C2细胞细胞凋亡水平显著升高(P<0.01);与vector+AICAR组相比,Smyd1-shRNA+AICAR组H9C2细胞细胞凋亡水平升高(P<0.01)。研究结论:Smyd1参与调控衰老心肌细胞ERS和细胞凋亡,抗阻训练可上调衰老早期小鼠心肌Smyd1表达,改善心肌细胞氧化应激和ERS现象,降低心肌细胞凋亡水平,发挥运动保护效应。

目的:阿片戒断后持续存在的睡眠障碍和负性情绪是引发复吸的重要原因,二者互相影响,且存在内在联系,但其具体机制不清。本研究采用小鼠吗啡慢性给药模型,探讨阿片戒断诱发睡眠障selleck合成碍和负性情绪的共同神经机制,以进一步理解和治疗阿片使用障碍。方法:(1)小鼠进行6天吗啡递增剂量慢性给药,其中后3天进行纳洛酮催促戒断Q-VD-Oph分子式诱导的条件性位置厌恶(CPA)训练,经历6天戒断及脑电睡眠监测后进行CPA测试Biotin-streptavidin system及高架十字等焦虑抑郁样行为学检测。(2)小鼠进行6天慢性给药及低剂量纳洛酮诱导CPA训练后,在戒断期每天进行3小时睡眠剥夺,观察对上述行为学的影响。(3)小鼠慢性给药第6天进行纳洛酮催促戒断,灌流后通过免疫荧光c-Fos标记筛选出戒断激活的脑区。结果:(1)小鼠经过6天戒断后存在稳定的CPA反应及焦虑抑郁样症状。(2)戒断期睡眠剥夺可加重负性情绪的表现。(3)c-Fos染色结果显示戒断可引起前额叶皮层、中央杏仁核、丘脑室旁核、外侧缰核等脑区显著激活。结论:本研究发现中央杏仁核等脑区可能介导了阿片戒断诱发的睡眠障碍及负性情绪,对其具体神经机制进行进一步探索将有利于理解和治疗阿片使用障碍。

目的 研究西红花酸(CRO)介导焦亡途径对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。方法 将HK-2细胞分为对照组(5.6 mmol·L~(-1)葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖)、西红花酸低剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄Captisol化学结构糖+5.0μmGSK2118436ol·L~(-1 )CRO)、西红花酸中剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+10.0μmol·L~(-1 )CRO)、西红花酸高剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+30.0μmol·L~(-1) CRO)。药物处理48 h后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率，用试剂盒法检测各组细胞氧化应激指标，用蛋白质印迹检测各组细胞相关蛋白表达，以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量。结果 对照组、高糖组、西红花酸低剂量组、西红花酸中剂量组和西红花酸高剂量组的细胞活性氧(ROS)水平分别为(100.00±3.64)%、(201.41±15.47)%、(172.31±12.16)%、(146.22±10.85)%、(121.37±9.68)%,胱天蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平分别为0.22±0.02、1.13±0.11、0.87±0.06、0.58±0.04、0.33±0.02,N端Gasdermin D蛋白(GSDMD-N)蛋白水平分别为0.40±0.05、1.09±0.08、0.76±0.05、0.58±0.04、0.42±0.03,IL-18蛋白水平分别为0.33±0.02、0.95±0.07、0.75±0.05、0.60±0.04、0.45±0.03,核因子κB(NF-κB) p65蛋白水平分别为0.34±0.05、0.97±0.10、0.75±0.05、0.54±0.04、0.37±0.05,胞质NF-κB p65蛋白水平分别为0.88±0.05、0.41±0.03、0.52±0.04、0.63±0.05、0.79±0nature as medicine.06。上述指标，高糖组与对照组比较，西红花酸低、中、高剂量组与高糖组比较，不同剂量组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 西红花酸可介导NF-κB通路抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号，调控细胞焦亡和氧化应激，缓解高糖诱导的HK-2细胞损伤。

目的 研究西红花酸(CRO)介导焦亡途径对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。方法 将HK-2细胞分为对照组(5.6 mmol·L~(-1)葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖)、西红花酸低剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄Captisol化学结构糖+5.0μmGSK2118436ol·L~(-1 )CRO)、西红花酸中剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+10.0μmol·L~(-1 )CRO)、西红花酸高剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+30.0μmol·L~(-1) CRO)。药物处理48 h后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率，用试剂盒法检测各组细胞氧化应激指标，用蛋白质印迹检测各组细胞相关蛋白表达，以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量。结果 对照组、高糖组、西红花酸低剂量组、西红花酸中剂量组和西红花酸高剂量组的细胞活性氧(ROS)水平分别为(100.00±3.64)%、(201.41±15.47)%、(172.31±12.16)%、(146.22±10.85)%、(121.37±9.68)%,胱天蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平分别为0.22±0.02、1.13±0.11、0.87±0.06、0.58±0.04、0.33±0.02,N端Gasdermin D蛋白(GSDMD-N)蛋白水平分别为0.40±0.05、1.09±0.08、0.76±0.05、0.58±0.04、0.42±0.03,IL-18蛋白水平分别为0.33±0.02、0.95±0.07、0.75±0.05、0.60±0.04、0.45±0.03,核因子κB(NF-κB) p65蛋白水平分别为0.34±0.05、0.97±0.10、0.75±0.05、0.54±0.04、0.37±0.05,胞质NF-κB p65蛋白水平分别为0.88±0.05、0.41±0.03、0.52±0.04、0.63±0.05、0.79±0nature as medicine.06。上述指标，高糖组与对照组比较，西红花酸低、中、高剂量组与高糖组比较，不同剂量组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 西红花酸可介导NF-κB通路抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号，调控细胞焦亡和氧化应激，缓解高糖诱导的HK-2细胞损伤。

目的 研究西红花酸(CRO)介导焦亡途径对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。方法 将HK-2细胞分为对照组(5.6 mmol·L~(-1)葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖)、西红花酸低剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄Captisol化学结构糖+5.0μmGSK2118436ol·L~(-1 )CRO)、西红花酸中剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+10.0μmol·L~(-1 )CRO)、西红花酸高剂量组(30.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+30.0μmol·L~(-1) CRO)。药物处理48 h后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率，用试剂盒法检测各组细胞氧化应激指标，用蛋白质印迹检测各组细胞相关蛋白表达，以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量。结果 对照组、高糖组、西红花酸低剂量组、西红花酸中剂量组和西红花酸高剂量组的细胞活性氧(ROS)水平分别为(100.00±3.64)%、(201.41±15.47)%、(172.31±12.16)%、(146.22±10.85)%、(121.37±9.68)%,胱天蛋白酶-1(caspase-1)蛋白水平分别为0.22±0.02、1.13±0.11、0.87±0.06、0.58±0.04、0.33±0.02,N端Gasdermin D蛋白(GSDMD-N)蛋白水平分别为0.40±0.05、1.09±0.08、0.76±0.05、0.58±0.04、0.42±0.03,IL-18蛋白水平分别为0.33±0.02、0.95±0.07、0.75±0.05、0.60±0.04、0.45±0.03,核因子κB(NF-κB) p65蛋白水平分别为0.34±0.05、0.97±0.10、0.75±0.05、0.54±0.04、0.37±0.05,胞质NF-κB p65蛋白水平分别为0.88±0.05、0.41±0.03、0.52±0.04、0.63±0.05、0.79±0nature as medicine.06。上述指标，高糖组与对照组比较，西红花酸低、中、高剂量组与高糖组比较，不同剂量组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 西红花酸可介导NF-κB通路抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号，调控细胞焦亡和氧化应激，缓解高糖诱导的HK-2细胞损伤。

【目的】通过网络药理学和动物实验探讨黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜的修复机制。【方法】（1）应用网络药理学预测分析黄芩苷治疗慢性萎缩性胃炎的潜在关键靶点。（2）动物实验：将40只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、维酶素组、黄芩苷组，每组10只。除正常组，其他3组小鼠获悉更多采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）灌胃结合饥饱失常法构建慢性萎缩性胃炎模型。给药结束后，采用苏木素-伊红（HE）染色法观察胃黏膜组织病理变化，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中胃泌素（GAS）和前列腺素E2(PGE2)水平变化，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测胃黏膜组织中Janus酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活子3(STAT3)的mRNA与蛋白表达水平。【结果】网络药理学Decitabine核磁结果显示，黄芩苷与核心靶点JAK1、STAT3可自发结合。动物实验结果显示：与正常组比较，模型组小鼠胃黏膜组织发生萎缩，腺体排列紊乱，存在大量淋巴细胞，胃黏膜细胞凋亡指数显著升高（P<0.05），血清中GAS与PGE2水平显著降低（P<0.05），胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；与模型组比较，维酶素组与黄芩苷组小鼠胃黏膜病变减轻，腺体排列相对整齐，结构较完整，胃黏膜细胞凋亡指数显著降低（P<0.05），血清中GAS与PGE2水平显著升高（P<0.05），胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著降低（P<0.05）；黄芩苷组上述各指标与维酶素组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。【结论】黄芩苷可Laboratory Automation Software有效修复慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜病变，其机制可能与下调JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达有关。

【目的】建立QuEChERS超高效液相色谱串联质谱法测定淡水鱼中地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂残留的方法。采用单因素实验和五因素四水平的正交试验优化淡水鱼产品中3种镇静剂的QuEChERS提取方法。对云南省各地的淡水鱼市场中常见的淡水鱼中的三种镇静剂进行检测分析。针对检测结果进行讨论分析。【方法】使用高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱仪,建立了三种镇静剂的QuEChERS前处理法,并优化质谱条件,通过比较色谱柱、柱温、流速、流动相及其洗脱梯度优化色谱条件,建立检测方法。在单因素的基础上,通过极差法选定5因素,利用正交表对料液比、PSA粉末的量、C8粉末的量、超声时间、超声温度等因素设计正交试验,以回收率的高低为评价指标进行综合评分,确定样品最佳的提取方法。使用建立的检测方法对云南省各地州淡水鱼样品中3种镇静剂进行了定性定量的检测。【结果】1.建立了QuEChERS样品前处理结合超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定淡水鱼中地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂残留的方法。方法可在8分钟内完成检测,3种目标化合物在线性范围AY-22989细胞培养内线性关系良好,地西泮的线性相关系数(r2)为0.9986,检出限和定量限分别是0.24、0.81μg/kg,奥沙西泮的线性相关系数(r2)为0.9990,检出限和定量biogas slurry限分别是0.27、0.91μg/kg,MS-222的线性相关系数(r2)为0.9989,检出限和定量限分别是0.03、0.12μg/kg,机制效应ME绝对值(%)分别为10.1,12.3和8.6。仪器的精密度良好,三种化合物低中高三种浓度的相对标准偏差分别为1.AZD9291体外28%、2.13%、4.02%;1.39%、1.97%、3.88%和1.18%、2.09%、3.83%。该方法快速、稳定、可靠,并且相对传统方法,其检出限更低更精确。2.利用单因素实验和正交试验比较不同称样量和提取试剂体积比例、不同PSA粉末的量、不同的C18粉末的量、不同超声时间和不同超声温度的提取效率,确定样品最佳条件为:称样量和提取试剂的体积比例为2:5,PSA粉末量为0.1g、C18粉末的量为0.1g、超声温度为50℃和、超声时间为10min,提取上清液过聚四氟乙烯(PTFE,直径13mm,孔径0.2μm)的滤膜。3.采集了云南省各地州淡水鱼市场共40样品,检测结果表明,从云南省各地州采集的40份样品中三种镇静剂的检测结果均为未检出。【结论】1.本文建立的QuEChERS液相色谱串联质谱法灵敏度高,稳定性好,检测线低,更为精确,可同时检测地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂,且回收率实验中其目标物质的损失更少,能够满足大批量淡水鱼产品中三种目标镇静剂的检测要求。2.本实验确定三种镇静剂检测的最佳前处理条件为:称样量和提取试剂的体积比例为2:5,PSA粉末量为0.1g、C18粉末的量为0.1g、超声温度为50℃和、超声时间为10min,提取上清液过聚四氟乙烯的滤膜。3.对云南各地州淡水鱼市场中三种镇静剂进行了检测,从云南省各地州采集的40份样品中三种镇静剂的检测结果均为未检出。

目的：整合多种生物信息学方法对黄葵胶囊治疗慢性肾脏病（Chronic kidney disease， CKD）的机制进行综合分析。方法：本研究从文献中收集黄葵胶囊的化学成分，从Genecards、OMIM和TTD数据库中收集CKD疾病靶点，利用Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点”网络和蛋白互作网络进行核心成分和靶点筛选。利用GEO数据库中的临床样品对黄葵胶囊治疗CKD的核心靶点进行差异分析，找出差异表达的核心靶点（significantly differently expressed core genes， SDECGs），并对这些靶点进行表达分析以及免Technology assessment Biomedical疫细胞浸润分析。将CKD样品进行聚类并进行聚类间SDECGs表达分析、免疫细胞分析及富集Belumosudil采购分析。再把CKD样品进行加权基因共表达分析，分别得正常组与CKD组、CKD样品聚类组之间的模块关键基因，取交集，将交集基因以4种机器学习算法筛选，构建模型，从而得到重要性评分前五的特征基因，构建列线图。使用GEO数据集及分子对接对预测结果进行验证Trichostatin A半抑制浓度。结果：黄葵胶囊检索到化学成分43种，靶点393个，其中核心成分为杨梅素、槲皮素、棉皮素等7种；CKD与黄葵胶囊交集靶点247个，其中核心靶点25个；通过GEO差异分析可获得18个SDECGs，该18个靶点与免疫细胞表达多呈正相关；将CKD样品聚类后获得2个聚类（C1、C2），两个聚类涉及的SDECGs表达、免疫细胞表达及通路富集等都分别与正常组和CKD组对应。分析所得涉及的机制主要有：免疫炎症、氧化应激、细胞焦亡、等过程。通过WGCNA结合支持向量机构构建模型，得到5个特征基因（CCDC186、SMC5、SLC30A7、COIL、DMXL1），该特征基因可预测CKD患者使用黄葵胶囊治疗的敏感度以及CKD的患病风险。结论：黄葵胶囊治疗CKD主要通过多成分（杨梅素、槲皮素、棉皮素等）作用于多靶点（ALB、AKT1、GAPDH等）及多途径(免疫炎症、氧化应激、细胞焦亡和自噬及组织修复等机制)发挥作用。本研究对CKD的临床治疗以及黄葵胶囊的机制探索有一定的指导意义。

目的 研究沉默信息调节因子3(Sirt3)在晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌老化过程中的作用，并初步探讨黄山药总皂苷(TSDP)改善心肌老化的机制。方法 提取原代心肌细胞，AGEs干selleck PCI-32765预诱导细胞老化，转染小干扰RNA(siRNA)敲降Sirt3表达。免疫印迹实验检测P16、P53、超氧化物歧化酶-2(SOD2)及SIRT3的蛋白表达水平。半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测细胞老化。2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)。TSDP预干预AGEs诱导的心肌老化后，采用SA-β-Gal染色试剂盒检测细胞老化。采用GraphPad Prism统计软件进行数据分析。组间比较采用单因素方差分析。结果 和未转染慢病毒的对照组相比，转染阴性参照NC siRNA后加入AGEs的干预组SIRT3及SOD2的表达减少，P53的表达增加，SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧的水平增加。转染Sirt3pro‐inflammatory mediators siRNA后加入AGEs的干预组与对照组相比，SIRT3及SOD2表达减少，SA-β-Gal染色阳性细胞比例及活性氧水平升高，且与转染Sirt3 siRNA组相比，P53表达水平进一步增加。转染NC siRNA的TSDP预处理AGEs干预组较转染NC siRNA后AGEs干预组SA-β-Gal染色阳性细胞比例减少，但转染Sirt3 siRNA的TSDP预处理AGEs干预细胞后上述TSDP引起的SA-β-Gal改变作用消失。结论 AGElexacaftorEs可能是通过下调Sirt3的表达水平，减少抗氧化物蛋白SOD2的表达，加重线粒体氧化应激，促进AGEs诱导的心肌老化进程。TSDP可能通过调控Sirt3的表达水平而影响老化。

【背景】神经退行性疾病是一类神经元慢性进行性损伤的疾病,表现为神经元死亡、变性及坏死,相关机制尚未明immunity to protozoa确。小胶质细胞作为重要的免疫细胞,在中枢神经系统起着关键作用,参与免疫应答、炎症反应和神经损失修复等多种过程。大脑遭遇损伤、感染时后,小胶质细胞可被激活为具有神经毒性作用的M1型小胶质细胞,也可分化为具有神经保护作用的M2型小胶质细MDV3100试剂胞,其中M2型小胶质细胞可趋化于损失部位进行吞噬损伤和坏死细胞,而M1型小胶质细胞可分泌炎症因子损伤周围神经元。LncRNA作为一类长链非编码RNA,通过调控转录、翻译来抑制靶基因的表达,它作为表观遗传修饰物参与了多种生物过程和越来越多的疾病。目前,关于LncRNA U90926在神经退更多行性疾病的作用研究相对较少。因此,本研究通过细菌脂多糖刺激小胶质细胞,检测lncRNA U90926的表达量,进而探讨抑制lncRNA U90926对LPS诱导原代小胶质细胞氧化应激和炎症反应的影响,并分析其作用机制,为神经退行性疾病提供新的作用靶点。【实验目的】探讨LncRNA U90926对小胶质细胞细菌脂多糖(LPS)诱导后表型和炎症反应的影响及其机制。【实验方法】将原代的小胶质细胞和BV2细胞(小胶质细胞细胞系)进行体外培养,依照Lipofectamine3000试剂盒将si RNA-Nrf2、si RNA-U90926转染至小胶质细胞中,并设置阴性对照组。LPS诱导激活小胶质细胞建立炎症反应模型,采用q RT-PCR检测体外LPS激活小胶质细胞后lncRNA U90926表达谱,同时也检测小胶质细胞M1标记物i NOS、IL-1、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平和小胶质细胞M2标记物Arg1、IL10的m RNA表达水平;Western blot测定TNF-α、IL-6、IL-1β、i NOS、Nrf2、keap1的蛋白表达水平;流式细胞术检测活性氧ROS含量。【结果】LPS诱导BV2细胞后,lncRNA U90926表达水平显著上调;同时也明显增强其氧化应激和炎症反应,增加了TNF-α、IL-6、IL-1β和i NOS促炎因子的表达和ROS含量。因此在敲减lncRNA U90926后,M1型标记物i NOS、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达明显降低,M2型标记物Arg-1 m RNA和IL-10的表达明显增加,并减少ROS含量,抑制氧化应激反应。此外,敲减lncRNA U90926可靶向调控BV2细胞中Nrf2的活化,使其入核激活下游通路,从而发挥抑制BV2细胞的炎症反应和氧化应激效应。【结论】小鼠的小胶质细胞可以被细菌脂多糖诱导激活,并向M1型转化,其细胞内lncRNA U90926表达量显著升高。而抑制lncRNA U90926的表达可以阻碍小胶质细胞向M1型转化,并通过Keap1/Nrf2-ARE信号通路促进小胶质细胞向M2型转化,抑制小胶质细胞的炎症反应和氧化应激效应。本研究提示lncRNA U90926可能为抑制神经炎症的一个关键分子,是预防神经退行性疾病发生的可靠策略。