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Nmedial rotating kneer4a3 (nuclear receptor subfamily 4 group a member 3)属于核受体亚家族成员，参与细胞增殖、细胞迁移和细胞凋亡的调控。据报道，Nr4a3在多种肿瘤组织中表达下调。为探索Nr4a3在乳腺癌发生、发展中的作用，我们利用公共数据库分析了NR4A3在乳腺癌组织中的表达以及与乳腺癌患者的Laduviglusib供应商总生存率的关系。在4T1细胞系上敲除Nr4a3基因，通过流式细胞术等检测了细胞凋亡、细胞周期；CCK-8与集落形成实验检测细胞活力；细胞划痕与侵袭检测细胞迁移与侵袭能力；通过q-PCR检测细胞周期和凋亡基因的表达水平。结果表明，Nr4a3在乳腺癌组织中表达水平显著下调；与乳腺癌患者的总生存率呈正相关关系；Nr4a3敲除后，细胞增殖增强，细胞凋亡减少及细胞迁移能力和侵袭能力增强。本研究BLZ945小鼠揭示了Nr4a3在乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的潜在作用，可能成为乳腺癌潜在的治疗靶点。

目的:筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)转移的关键基因，并基于卵巢癌细胞Naporafenib临床试验株SKOV3,探索其对卵巢癌细胞迁移侵袭的影响。方法:基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库、基因表达综合(GEO)数据库及人类基因数据库(GeneCards),通过limma差异表达分析及Kaplan-Meier生存分析挖掘在卵巢癌中高表达且与患者不良预后相关的迁移侵袭相关基因，并通过基因本体(GO)功能富集分析预测基因参与的生物学过程。利用PXN敲减慢病毒感染SKOV3细胞后，通过细胞划痕实验和Transwell迁移侵袭实验探讨PXN敲减对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。利用癌症药物敏感性基因组学点击此处(GDSC)数据库对样本的化疗反应进行预测，评估PXN基因的卵巢癌细胞化疗敏感性的影响。结果:共筛选到36个迁移侵袭相关基因在卵巢癌组织中高表达，其中PXN基因高表达与卵巢癌患者不良预后相关(P<0.05)。PXN的功能与组蛋白修饰、染色质共价修饰、赖氨酸肽基修饰、蛋白质去泛素化、通过去除小蛋白进行蛋白质修饰、组蛋白去泛素化以及组蛋白H3-K4三甲基化等相关。荧光显微镜、WeLabel-free immunosensorstern blot结合RT-qPCR结果显示，在SKOV3细胞中成功敲减PXN基因。细胞功能学实验表明，PXN敲减组相对于空白对照组和阴性对照组，划痕愈合面积更小，穿膜细胞数更少。PXN高表达组中的顺铂及紫杉醇IC_(50)明显高于PXN低表达组(P<0.001),而其吉西他滨及多柔比星的IC_(50)明显低于PXN低表达组(P<0.0001)。肿瘤细胞中紫杉醇的IC_(50)明显低于正常卵巢细胞(P<0.0001),其西他滨及多柔比星的IC_(50)值高于正常卵巢细胞(P<0.0001)。结论:迁移侵袭相关基因PXN在卵巢癌中高表达，且与患者不良预后相关。PXN表达水平降低能抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移和侵袭。PXN基因表达水平与卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性相关。

目的:应用压力-应变环(pressure strain loop, PSL)技术研究左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)正常的多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)患者早期左室做功状况。方法:前瞻性选取2021年06月至2022年07月52例在血液科确诊的MM患者和32例年龄、性别相匹配的同期健康正常人纳入研究。均进行传统超声心动图检查并进行STE分析峰值应变离散度(peak strain dispersion, PSD)及整体纵向应变(global longitudinal strain, GLS);输入血压值后软件分析出整体做功指数(global work index, GWI)、整体有效功(global constructive work, GCW)、整体无效功(global waste work, GWW)、整体做功效率(global work efficiency, GWE),对两组之间所有测量参数进行差异性、相关性的统计学分析。结果:MM组E/ABaf-A1比值、室Pexidartinib间隔运动速度(IVS e’)、左室侧壁运动速度(LVSW e’)比对照组明显降低(Z/t=3.725、2.822、2.816),A值、室间隔E/e’比对照组明显增高(Z/t=2.876、5.486),差异均有统计学意义(P<0.05);MM组的GLS绝对值、GWI、GWE均比对照组降低(U=360.000、470.000、118.000),GWW、PSD比对照组增高(U=137.000、381.500),差异均有统计学意义(P<0.05)。GLS绝对值、GWI、GCW、GWE与LVEF呈正相关(r=0.716、0.522、0.503、0.335,P<0.05); GWW、PSD与LVEF呈负相关(r=-0.236、-0.543,P<0.05)。重复性检测显示操作性、重复性良好。结论:PSL技术可定量评估早期MM患者左心室做功状况及左室收缩不同步，比常规超声心动图更早地发现左室收缩功能损伤，可medicinal guide theory为临床提供参考依据。

中医药在防治骨质疏松症中发挥着重要作用，多以“虚证”立论，然而“虚证”与“瘀证”联系紧密，在骨质疏松症的辨证中应当对“瘀证”同样重视Antibiotic Guardian。GPX4通路可抑制人体细胞铁死亡中关键物质细胞内活性氧堆积，并对细胞铁死亡引起的组织特异性消融起重要调控作用，是目前研究细胞铁死亡的主要方向。国内外学者针对此通路做了大量研究，笔者通过查阅相关文献对GPX4通路介导破骨细胞、成骨细胞铁死亡在骨质疏松症中的发病机制，以及中医“瘀VX-765分子式证”理论与GPX4通路调控细胞铁Pexidartinib死亡和骨质疏松症之间关系进行总结，发现GPX4通路调控下破骨细胞及成骨细胞的铁死亡可降低骨吸收和骨形成，对骨代谢平衡产生影响，进而导致骨质疏松症发生或加剧病情“。瘀证”理论指导下运用活血化瘀类方药可以干预GPX4通路调控细胞铁死亡，对“骨代谢稳态”产生积极影响。

目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)相关心血管疾病是全球范围内的主要死因,因此,对AS发病因素的研究是公共卫生领域重要议题之一。高脂饮食是公认的AS发生发展的重要危险因素。研究显示,高脂摄入人群在我国居民中的占比逐年增长,对我国居autopsy pathology民健康造成巨大威胁。然而,环境风险因素影响此类高易感人群AS发生发展的相关数据亟待补充。全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonic acid,PFOS)是一种环境介质中广泛分布的全氟化合物,并且在人体血液样本中被检出。流行病学研究证据显示,PFOS暴露是AS发生发展的重要危险因素。然而,高易感人群PFOS暴露与AS之间的直接联系及其潜在机制尚不清楚。巨噬细胞是AS固有免疫应答的主要细胞,其表型的相对比例变化影响AS进展。研究显示,巨噬细胞表型受细胞内代谢状态调控。因此,本研究基于巨噬细胞能量代谢调控的表型重塑过程,揭示PFOS暴露致高易感模型AS发生发展的关键细胞事件以及分子机制。方法:本研究分别建立了动物和细胞实验暴露模型,模型建立过程以及涉及的具体方法如下:1、动物模型:选用野生型C57BL/6J小鼠构建高脂饮食喂养(High-fat diet,HFD)联合PFOS灌胃暴露模型,染毒进行8周,结束后,取各组小鼠主动脉,利用油红O、H&E、EVG等组织病理学染色方法检测AS斑块面积、主动脉壁厚度及内皮损伤等病理结构的变化;通过流式细胞术、q PCR和免疫荧光等技术分析巨噬细胞亚型占比、数量变化以及巨噬细胞能量代谢关键酶表达。2、细胞模型:建立氧化性低密度脂蛋白(Oxidized LDL,ox-LDL)刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞(Bone marrow derived macrophage,BMDM)的细胞研究模型。使用Western blot、油红O染色和免疫荧光等方法测定巨噬细胞表型及功能变化。此外,通过检测巨噬细胞氧化磷酸化和糖酵解相关底物水平、产物含量、相关蛋白表达量以及相关调控分子表达水平,探究ox-LDL作用条件下,PFOS暴露对巨噬细胞细胞能量代谢的影响。3、采用ox-LDL作用条件下糖酵解抑制剂2-DG与PFOS共处理实验,应用Western blot和q PCR探究PFOS暴露诱导的能量代谢重塑对促进巨噬细胞表型重塑的调控作用。4、应用Western blot、分子对接、流式细胞术和免疫荧光等方法,聚焦PFOS对铁蛋白重链(FTH)表达及Fe~(2+)水平的关键调控作用,通过Fe~(2+)螯合剂CQ共处理实验,综合阐明PBMN 673FOS暴露诱导的Fe~(2+)水平变化在诱导巨噬细胞能量代谢重塑中的调控作用。结果:1、同高脂饮食对照组小鼠相比,PFOS暴露小鼠8周后,小鼠主动脉中动脉粥样硬化斑块面积显著增加;主动脉壁厚度增加并出现炎性浸润及内皮损伤;此外,PFOS暴露小鼠主动脉中巨噬细胞占比增加,巨噬细胞泡沫化增强。提示高脂饮食条件下PFOS暴露促进小鼠动脉粥样硬化发生发展。2、小鼠主动脉流式细胞术结果显示,高脂饮食条件下PFOS暴露8周小鼠主动脉经典激活巨噬细胞(CAM,促炎表型)数量及占比均增多,交替激活巨噬细胞(AAM,抑炎表型)减少,对小鼠主动脉中CAM、AAM标志物转录水平进行测定得到与上述一致结果;细胞实验结果显示,在ox-LDL作用条件下PFOS暴露后巨噬细胞CAM标志物表达水平升高,巨噬细胞CAM标志物转录水平升高且AAM标志物转录水平降低。并且,巨噬细胞黏附能力增强、ox-LDL摄取能力增强。说明PFOS可以诱导巨噬细胞表型重塑,促进经典激活巨噬细胞(CAM)的生成,抑制交替激活巨噬细胞(AAM)生成;并且PFOS影响巨噬细胞的正常生理功能加剧动脉粥样硬化。3、Ox-LDL作用https://www.selleck.cn/products/AZD1152-HQPA.html条件下,PFOS暴露后巨噬细胞内总ATP含量减少、线粒体呼吸链复合物蛋白表达降低;葡萄糖摄取速率升高、乳酸和丙酮酸的含量增加,己糖激酶(Hk)表达增高;乳酸脱氢酶A(Ldha)、葡萄糖转运体1(Glut1)和丙酮酸激酶(Pkm)基因转录水平上调。以上结果提示PFOS暴露促进巨噬细胞能量代谢由氧化磷酸化向糖酵解重塑,导致总体能量生成减少。4、糖酵解抑制剂2-DG与PFOS共处理实验结果显示,与ox-LDL与PFOS共处理暴露组相比,2-DG与PFOS共处理后,巨噬细胞i NOS蛋白表达降低,CAM标志物Tnf-α、Il-1β、Ccl2转录水平下降,而AAM标志物Fizz1、Ym-1转录水平上升。结果提示:抑制糖酵解水平可缓解由PFOS诱导的巨噬细胞能量代谢重塑,并进一步减轻由PFOS引发的巨噬细胞表型重塑,说明PFOS暴露诱导的能量代谢重塑对促进巨噬细胞表型重塑起到重要调控作用。5、PFOS暴露使BMDM细胞内FTH蛋白表达量增加。分子对接结果显示,PFOS与FTH结合在Glu64、Glu61、Glu140、His65等储铁功能位点,分子对接结合能为-7.1 kcal/mol,说明PFOS可以与FTH稳定结合并影响其储铁功能。进一步对胞内Fe~(2+)含量进行检测发现,PFOS暴露BMDM细胞促使胞内Fe~(2+)含量明显升高。选用Fe~(2+)螯合剂CQ与PFOS共同处理后,PFOS引起的巨噬细胞能量代谢重塑得到缓解。说明PFOS暴露诱导的Fe~(2+)增加对促进巨噬细胞糖酵解起到重要调控作用。结论:本研究探究了高脂饮食高易感模型下,PFOS暴露对动脉粥样硬化发生发展的风险调控、关键细胞事件及其分子机制。研究发现,PFOS通过靶向FTH影响其储铁功能,导致巨噬细胞内Fe~(2+)水平升高,促使巨噬细胞糖酵解水平上调,诱导巨噬细胞向促炎表型分化,进而加剧动脉粥样硬化发生发展。本研究反映了高易感人群暴露PFOS的风险以及关键事件的特征,为PFOS暴露致动脉粥样硬化机制研究提供新的视角和关键数据。

目的 探讨柚皮苷(Nar)对棕榈酸(PA)处理Blebbistatin IC50后成熟脂肪细胞炎症反应的影响及机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞经成脂化诱导为成熟脂肪细胞后采用不同浓度(0、25、50、100、200μmol·L~(-1))PA处理细胞48 h, CCK-8检测细胞活力，ELISA检测细胞AM-2282作用上清IL-6水平，确定后续实验最佳PA浓度。不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))Nar处理成熟脂肪细胞，CCK-8检测细胞活力，确定后续实验最佳Nar浓度。单独PA处理实验分为2组：Ctrl组、PA组；联合Nar处理实验分为4组：Ctrl组、PA组、Nar组、PA+Nar组；western blotting法检测各组p-ERK1/2和DRP1蛋白表达水平。联合线粒体裂变抑制剂Mdivi-1处理实验分为7组：Ctrl组、PA组、Nar组、Mdivi-1组、PA+Nar组、PA+Mdivi-1组、PA+Nar+Mdivi-1组，ELISA和western blotting法分别检测7组细胞上清IL-6水平和p-ERK1/2、DRP1蛋白表达水平。结果 后续实验PA和Nar分别选择50和25μmol·L~(-1)。与Ctrl组比较，PA组p-ERK1/2和DRP1表达水平均升高(P<0.001)。与PA组比较，PA+Nar组、PA+Mdivi-1组、PA+Nar+Mdivi-1组IL-6水平、p-ERK1/2和DRP1表达均更低(P<0.Psychosocial oncology05);与PA+Nar组比较，PA+Nar+Mdivi-1组IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05),但p-ERK1/2和DRP1表达水平均降低(P<0.05)。结论 Nar可减轻PA处理后成熟脂肪细胞的炎症反应，其机制是通过抑制ERK1/2激活和DRP1表达实现的。

目的 研究苦prenatal infection杏仁苷（amygdalin,AMY）对动脉粥样硬化的治疗作用及其可能的作用机制。方法 利用不同剂量AMY干预人冠状动脉内皮细胞（HCAECs）。将HCAECs分为4组：对照组、ox-LDL组、AMY低剂量组（50μg/mL）和AMY高剂量组（100μg/mL）。Western blot检测焦亡标志蛋白（Caspase-1和GSDMD）以及组蛋白去甲基化酶（JMJD3）和半乳糖凝集素-3(Gal-3)表达水平；RT-qPCR检测IL-1β和IL-18 mRNA表达；TUNEL测试检测HCAECs死亡率。ChIP试验用于检测JMJD3和H3K27me3在Gal-3启动子上的富集。过表达Gal-3后分析Gal-3对AMY抑制ox-LDL诱导的HCAECs焦亡的影响。将40只载脂蛋白E缺陷（ApoE~(-/-)）雄性小鼠分为对照组、模型组、2.5 mg/kg和5 mg/kg AMY组。油红O染色用Rapamycin半抑制浓度于观察STM2457分子量小鼠主动脉脂质沉积和斑块形成；酶比色法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。结果 与对照组比较，AMY组对细胞存活率无显著影响，50、100μg/mL AMY干预细胞24 h内细胞存活率与对照相比差异无统计学意义，36、48 h时细胞存活率相较对照组降低；与ox-LDL比较，50和100μg/mL AMY组Caspase-1、GSDMD、Gal-3和JMJD3蛋白水平，IL-1β和IL-18 mRNA表达以及TUNEL阳性细胞率呈剂量依赖性降低；AMY干预后HCAECs内Gal-3启动子上JMJD3富集降低，H3K27me3富集升高；与ox-LDL+AMY+pcDNA-3.1组比较，ox-LDL+AMY+pcDNA-Gal-3组Gal-3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达水平和TUNEL阳性细胞率明显增加；与模型组相比，2.5 mg/kg AMY组、5 mg/kg AMY组小鼠中主动脉中脂质沉积显著减少，动脉粥样硬化病变面积百分比降低；TG、TC、LDL浓度和Gal-3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达水平呈剂量依赖性降低，HDL含量升高。结论 AMY可能通过参与调控JMJD3介导的Gal-3去甲基化对动脉粥样硬化导致的细胞焦亡有一定的改善作用。

研究目的:肩袖损伤(rotator cuff injury)是常见的运动创伤,可造成肩Liproxstatin-1关节疼痛和活动受限,严重影响了患者的日常生活和运动能力。肩袖损伤常伴随着肩袖肌的退行性病变,包括肌肉萎缩(muscle atrophy)、脂肪浸润(fatty infiltration,FI)和纤维化(fibrosis),这也是决定患者临床结果的关键因素。研究发现,在肩袖损伤的病理变化过程中常伴随着低氧损伤,低氧也是肌腱病(tendinopathy)早期的关键调节因素。低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)是哺乳动物产生缺氧反应的关键调节因子,它是由一个独特的氧依赖性α亚基和一个β亚基组成的异二聚体。哺乳动物的HIFα具有三种同工型,即HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α。研究表明HIFα可以参与到脂肪分化的调节中,其中HIF-1α是脂肪生成的负调节因子,HIF-2α则为正调节因子。目前尚不清楚肩袖撕裂后肩袖肌的缺氧情况及其与肌肉退行性病变的关系。因此本研究旨在通过建立小鼠肩袖损伤模型,明确肩袖损伤后肩袖肌中的缺氧情况及可能形成原因,为损伤后肌肉退行性病变的治疗提供实验依据。研究方法:实验选取30只3月龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为2大组,每组15只,分别建立两种小鼠肩袖损伤模型,即单侧冈上肌(supraspinatus,SS)肌腱和肩胛上神经横断术(tendon transection and suprascapular nerve transection,TTDN),以及单侧冈上肌腱横断术(tendon transection,TT);每组根据不同的损伤时间点分为术后1周组(1wk)、术后2周组(2wks)和术后6周组(6wks),每组5只,对侧冈上肌为假手术对照组(Sham),即按上述方法暴露肩袖和肩胛上神经,不进行离断,随后闭合肌肉和皮肤。所有手术均在全身麻醉条件下进行(1%-5%异氟烷)。在术后1周、2周和6周的不同时间点取小鼠双侧冈上肌,制作冰冻切片。采用油红O染色(Oil Red O)观察肌肉脂肪浸润程度,通过CD31和laminin免疫荧光双染色,并计算CD31+细胞/肌纤维数量百分比测定肌肉血管密度,以及统计肌纤维横截面积(cross-sectional area,CSA)测定肌肉萎缩程度,Western Blot观察肌肉中低氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)的蛋白表达水平。双因素方差分析(Two-Way ANOVA)检验各组间的差异,P<0.05具有显著性差异。研究结果:组织学观察发现在两种不同的肩袖损伤模型中,损伤侧冈上肌中出现大量脂滴聚积,其fat index(%)均较Sham侧冈上肌相比有显著升高(P<0.05),说明肩袖损伤后肩袖肌有明显脂肪浸润发生;肌纤维的排列出现紊乱,且通过对CSA进行统计后发现,在TT肩袖损伤模型中,损伤侧冈上肌的CSA较Sham侧相比,在术后2周和6周出现显著性减小(P<0.05);在TTDN肩袖损伤模型中,损伤侧冈上肌的CSA较Sham侧肌肉在各个术后时间点均出现显著性降低(P<0.05),这提示冈上肌在肩袖损伤后出现了明显的肌肉萎缩。接下来进一步通过对血管内皮细胞的标志物CD31的进行免疫荧光染色以观测血管密度。结果显示,在TT肩袖损伤模型中,损伤侧冈上肌中CD31+细胞/肌纤维数量百分比在损伤后各时间点均较Sham侧冈上肌显著降低(P<0.05),且该比值在损伤侧冈上肌中随着时间的延长显著升高(1wk vs 2wks:P<0.05;1wk vs6wks:P<0.01);在TTDN肩袖损伤模型中,与Sham侧冈上肌相比,CD31+细胞/肌纤维数量百分比在术后2周(P<0.01)和immune therapy术后6周时间点(P<0.05)均出现显著性降低。冈上肌血管密度在肩袖损伤后出现明显降低,意味着损伤部位的血流供应受到限制,这可能是造成肩袖肌缺氧的因素之一。随后通过Western Blot实验观察到,在TT肩袖损伤模型中,冈上肌中HIF-1α的蛋白含量在术后1周较Sham侧肌肉有明显升高(P<0.01),而在术后2周和6周时间点无明显变化(P>0.05),且术后2周损伤侧冈上肌的HIF-1α蛋白水平较术后1周损伤侧冈上肌相比出现显著下调(P<0.01)。HIF-2α和HIF-3α的蛋白表达在术后1周与HIF-1α的蛋白表达趋势相同,均出现显著升高(P<0.01)。损伤侧肌肉中HIF-2α的蛋白水平在术后2周和6周均较术后1周有显著降低(P<0.01),HIF-2α的蛋白水平随着时间的延长出现降低。而与HIF-1α和HIF-2α的蛋白表达不同的是,损伤侧肌肉中HIF-3α的含量在术后6周与Sham侧相比,出现显著上调(P<0.01);而在TTDN肩袖损伤模型中,冈上肌中HIF-1α的蛋白表达在术后1周和2周时间点较Sham侧冈上肌明显降低(P<0.01),但在术后6周无明显变化。与HIF-1α的变化相反,HIF-2α蛋白水平PI3K/Akt/mTOR抑制剂在术后1周和2周表现出显著升高(P<0.01)。冈上肌HIF-3α的蛋白表达在术后1周与Sham侧冈上肌相比无明显变化,但在术后2周和6周较Sham侧出现明显升高(P<0.01)。不同的HIFα亚型在肩袖损伤后肌肉中的表达不尽相同,在两种肩袖损伤模型的后期(术后6周),结果均显示HIF-3α的蛋白水平有很大程度的升高,并伴随着肌纤维横截面积的显著减小和脂滴堆积,表明损伤后的肌肉脂肪浸润和萎缩的严重程度可能与HIF-3α的表达增加有关。研究结论:肩袖损伤导致肩袖肌发生严重肌肉萎缩和脂肪浸润,且伴随着肩袖肌中血管密度显著降低,因此引起肩袖肌供血不足导致了损伤区域的低氧状态,使得HIFα亚型在肩袖损伤后不同时间点出现不同程度的变化,因此明确低氧对肌肉萎缩和脂肪浸润程度的影响,可在未来为治疗肩袖损伤后肩袖肌的退行性病变提供新的思路。

目的:毛蕊异黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及诱导凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法:1.基于课题组前期毛蕊异黄酮作用肺腺癌SPC-A1细胞实验研究,参考选择毛蕊异黄酮浓度梯度为(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于多发性骨髓瘤U266细胞,分别取12、24、36和48h时间点,采用CCK8法检测毛蕊异黄酮对各组细胞活力的影响,计算不同时间点IC20、IC40和IC60对应的毛蕊异黄酮浓度,筛选并验证所选择的后续实验的干预时间及浓度。2.采用FCM法检测毛蕊异黄酮对各组细胞周期阻滞情况。3.采用TUNEL法检测毛蕊异黄酮各组细胞凋亡影响。4.采用WB检测毛蕊异黄酮干对各组细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、NF-κB p65和p-IκBα的表达影响。5.采用RT-qPCR检测细胞周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1 m RNA的表达情况。结果:1.毛蕊异黄酮浓度梯度(0、5、10、15、20、25、30、50、70及90μM)作用于U266细胞不同时间点(12、24、36和48h)后,对CCK8法所测OD值分析:随着毛蕊异黄酮浓度梯度不断增加对U266细胞的抑制率逐渐增加,同一浓度随着培养时间的延长对U266细胞的抑制率也逐渐增加,毛蕊异黄酮对U266细胞的抑制作用呈明显浓度-时间依赖性。根据公式分别计算出不同时间毛蕊异黄酮作用U266细胞的IC20、IC40和IC60值,并对IC20、IC40和IC60所对应浓度验证后选取浓度48h及48h时所对应IC20、IC40和IC60的毛蕊异黄酮的浓度(13.88μM、34.2μM和91.78μM)为后续实验的作用条件。2.通过FCM法探究不同浓度毛蕊异黄酮作用于U266细胞后对细胞周期的影响,结果显示毛蕊异黄酮可以使U266细胞得细胞周期停medical worker滞在G0/G1期,并具有浓度依Apoptosis抑制剂赖性。3.TUNEL染色在镜下观察细胞的凋亡情况,随着毛蕊异黄酮浓度逐渐增加,U266细胞的凋亡数量逐渐增加,具有明显的浓度依赖性。4.WB结果显示各实验组药物处理后蛋白NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1的表达量均下调,Bax蛋白的表达水平上调,与对照组比较,均有显著差异(P<0.05),其中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1在毛蕊异黄酮浓度为13.88μM、34.2μM组时蛋白的表达水平有明显的差异性(P<0.05),34.2μM、91.78μM浓度处理的细胞中NF-κB p65、p-IκBα、Bcl-2、CDK4及Cyclin D1蛋白的表达水平变化不明显(P>0.05),但是Bax蛋白上调水平与毛蕊异黄酮浓度有明显的依赖性(P<0.05)。5.RT-qPCR结果显示不同作用浓度的毛蕊异黄酮处理后细胞中Cyclin D1、CDK4m RNA的表达水平均下调,与对照组比较均有明显差异(P<0.05),13.88μPS-341配制M与34.2μM浓度处理的细胞差异性明显(P<0.05),34.2μM与91.78μM浓度处理的细胞中Cyclin D1和CDK4 m RNA的表达无明显差异性(P>0.05)。结论:CA有抑制U266细胞增殖及促进其凋亡的作用,机制可能与抑Cyclin D1、CDK4、p-IκBα、NF-κB p65和Bcl-2蛋白的表达及促进Bax蛋白的表达相关。

目的:鹿血多肽(DBP)是以鹿血为原料,经过蛋白酶水解提取的多肽成分,中医临床预防及治疗方面得到了广泛的开发与利用。同时,多种疾病的发生发展与患者自身免疫力低下相关,调节自身免疫力对多种疾病的辅助治疗都是行之有效的途径。目前,对于鹿血多肽的免疫调节活性相关的深入研究较少。因此,本研究的目的是筛选免疫调节活性高的鹿血多肽的制备方法,并用RAW 264.7细胞以及环磷酰胺(CTX)致免疫抑制小鼠模型对其进行验证,从而揭示鹿血多肽在免疫调节方面的作用机制。方法:酶解法制备鹿血多肽,得到胃蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解的鹿血多肽(PTDBP)、胃蛋白酶提取的鹿血多肽(PDBP)和胰蛋白酶提取的鹿血多肽(TDBP)。用比色法测定含量,Tricine-SDS-PAGE法测定分子量区间。通过细胞活力,吞噬活性和一氧化氮(NO)的分泌能力的检测,筛选并确定了具有免疫调节活性潜力的PTDBP。用体外抗氧化体系评价PTDBP、PDBP、TDBP的抗氧化能力。测定了PTDBP中氨基酸的组成及含量,评价PTDBP的营养价值。采用小鼠RAW 264.7巨噬细胞探究PTDBP的体外免疫调节作用,观察PTDBP对巨噬细胞的细胞活力,吞噬活性,NO的分泌能力,黏附能力,活性氧(ROS)分泌能力的影响。检测细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况,并检测RAW 264.7细胞的细胞周期。在基因水平上研究了PTDBP对i NOS、TNF-α和IL-6 m RNA的表达量的影响。基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,探讨PTDBP对RAW 264.7的免疫调节活性机制。建立CTX致免疫抑制小E7080体内鼠模型,以研究PTDBP的体内免疫调节活性。计算小鼠免疫器官指数,检测血象相关指标,测定免疫球蛋白和细胞因子的变化情况,并对小鼠免疫器官进行了HE染色。通过Western blot实验方法,探讨PTDBP是否激活MAPK信号通路以发挥体内免疫调节作用。通过正交试验,以腥味评定为指标,研究β-环糊精和酵母的最佳脱腥工艺。以稳定性系数为指标,筛选合适的稳定剂。以感官评定为指标,确定PTDBP口服液Cell Imagers的配方。最后,通过测定PTDBP口服液的理化指标,考察其稳定性。结果:成功制备了PTDBP、PDBP、TDBP,其中PTDBP的多肽含量最高。初步免疫调节活性研究表明,与PDBP和TDBP相比,PTDBP可以增强巨噬细胞的增殖作用,吞噬活性和NO分泌量,说明PTDBP具有最佳的免疫调节活性。PTDBP氨基酸分析结果表明,PTDBP中包含了18种氨基酸,其中含有7种必需氨基www.selleck.cn/products/wnt-c59-c59酸。PTDBP对DPPH·的IC_(50)值为4.061±0.288 mg/m L,对ABTS·的IC_(50)值为0.629±0.015mg/m L,对·OH的IC_(50)值为3.864±0.245 mg/m L,表明PTDBP有一定的自由基清除活性。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,PTDBP分子量小于7.8k Da。基于RAW 264.7巨噬细胞,研究了PTDBP的体外免疫调节活性。结果表明,PTDBP对细胞无明显毒性。125.0-500.0μg/m L PTDBP显著提高巨噬细胞的吞噬能力、黏附功能、NO、TNF-α、IL-6的分泌水平,还可以刺激巨噬细胞产生ROS。PTDBP通过作用于RAW 264.7细胞G0/G1期,达到促进细胞增殖的作用。PTDBP上调i NOS、TNF-α、IL-6m RNA表达水平,激活MAPK信号通路发挥免疫调节作用。建立CTX致小鼠免疫抑制模型,研究PTDBP的体内免疫调节活性。实验结果表明,经过PTDBP干预后,缓解了CTX造成的减重倾向,恢复了小鼠白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)等血细胞指标及骨髓有核细胞数(BMNC),并且促进了免疫抑制小鼠血清中免疫球蛋白Ig G和细胞因子TNF-α和IL-6的分泌。同时,PTDBP提高免疫抑制小鼠的免疫器官指数,保护脾脏和胸腺的生长以及改善病理学变化。Western blot实验结果显示,不同浓度的PTDBP可以上调CTX诱导的免疫抑制小鼠脾脏MAPK信号通路中p38、JNK、ERK蛋白磷酸化水平,表明PTDBP激活MAPK信号通路发挥免疫调节作用。制备PTDBP口服液,4.0%β-环糊精和1.5%酵母作为脱腥剂,黄原胶0.07%、果胶0.06%、CMC-Na 0.06%为稳定剂,配方为PTDBP 0.5%,蔗糖4.98%,柠檬酸0.05%。PTDBP口服液感官良好。结论:本研究采用两步酶解法制备了PTDBP,研究表明PTDBP通过激活MAPK通路,提高体内和体外的免疫调节活性,为PTDBP作为免疫调节肽的综合利用与开发开辟新思路。