CXCR4-3’-UTR双荧光素酶报告基因载体的构建及与microRNA-494的靶向作用

目的 构建野生型与突变型CXCR4基因3′-非编码区(3′-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-494 (miR-494)对CXCR4的靶向调控作用。方法 使用生物信息学相关软件预测miR-494与CXCR4之间的靶向关系;利用PCR法扩增CXCR4的目的基因片段构建野生型与突变型CXCR4基因3′-UTR的双荧光素酶报告基因载体;将miR-494模拟物和阴性对照物分别与野生型pMIR-CXCR4-wt-3′-UTR或突变型pMIR-CXCR4-mut-3′-UTR双荧光素酶报告基因载体共同转染NRK-49F细胞,然后进一步检测相对荧光值。结果 成功构建野生型与突变型CXCR4基因3′-UTR的双荧光素酶报告基因BMS-354825采购载体,荧光结果显示加入miR-494模拟物可使野生型pMIR-CXCR4-wt-3′-UTR的荧光素酶活性降低约52%,但突变型pMIhttps://www.selleck.cn/products/lgx818.htmlR-CXCR4-mut-3′-UTR的荧光素酶活性与对照组相比无显著变化。结论 初步证实mSublingual immunotherapyiR-494与CXCR4之间存在靶向调控关系。