FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对I型IFN信号通路的作用

本研究旨在构建口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）3D基因真核表达质粒，并探究其monogenic immune defects对I型干扰素（interferon，IFN）信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将Smoothened Agonist半抑制浓度其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D，经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞，Weshttps://www.selleck.cn/products/byl719.htmltern blotting及间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay，IFA）检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因、Real-time PCR、TCID_(50)等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒（Versicular stomatitis virus，VSV）诱导的I型IFN信号通路的影响。结果显示，真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功；3D蛋白在HEK-293T细胞中表达，大小约为55 kDa，主要定位在细胞核中；3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平，促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制I型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。