猫细小病毒病是由猫细小病毒(FPV)引起的一种急性高度接触性传染病,可感染猫科、鼬科、浣熊科动物,死亡率较高,对相关经济动物、野生动物及宠物造成严重威胁。疫苗免疫是控制该病的主要手段,但近年来免疫失败现象时JNJ-42756493使用方法有发生,有研究表明FPV的一些关键氨基酸位点发生改变可改变其抗原识别位点,导致免疫逃避现象。有必要深入了解猫细小病毒主要抗原基因的遗传进化特征,探索开发新型检测试剂及疫苗。本研究通过对沈阳某动物医院疑似FPV患猫进行临床调查,收集病例样本进行PCR检测,对阳性样本的VP2基因进行T克隆、测序及遗传进化分析,选择有代表性的毒株,将其VP2基因亚克隆到p ET32a原核表达载体中,构建p ET32a-VP2重组质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞诱导表达VP2蛋白,利用初步纯化的VP2蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体。VP2基因扩增结果:共获得了7份阳性毒株,基因全长均为1755bp,7份FPV VP2基因与50株国内外参考毒株VP2基因核苷酸同源性在98.8%～99.9%之间,与疫苗株EU498680核苷酸同源性在98.9%～CX-5461价格99.5%之间;7份FPV VP2基因与参考毒株氨基酸同源性为97.9%～100%;以标准株M38246为参考毒株,其中6份VP2基因编码的氨基酸第91位点由A变为了S,2份VP2基因的第295位点由P变为了R。遗传进化分析显示:FPV VP2基因分为3个基因群,7份FPV VP2基因与疫苗株和标准株均不在一个基因群,与国内近年来流行的毒株亲缘关系较近,其中SNHF-V1位于G3群,其他6份毒株均位于G1群。选取与国内近年来流行毒株亲缘关系较近的SNHF-V3 VP2基因进一systemic immune-inflammation index步构建了p ET32a-VP2重组表达载体,表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western-blot分析,获得了大小约为84k Da的Trx A-His-VP2标签融合蛋白,该融合蛋白可与小鼠抗6X His单克隆抗体发生特异性结合,表明其具有较好的免疫原性。将目的蛋白纯化后免疫SPF级6周龄20g昆明小鼠,制备小鼠抗FPV VP2多克隆抗体,经Western-blot检测,具备较好的免疫反应原性。