1.1动物
清洁级 C57BL/6 小鼠 24 只，♂，鼠龄 8~10周，体质量为(19±1)g，购自北京维通利华实验动物 技 术 有 限 公 司 ， 动 物 生 产 许 可 证 号 为SCXK(京)2016-0006。实验前小鼠在动物房适应性
饲养 1 周。伦理审批号：2020DW269；本批小鼠的实验动物合格证号：11400700310163。
1.2主要药物与试剂selleck化学
药物 FSD-C10(由天津红日药业股份有限公司制备，纯度≥98%)[7]；MPTP(美国 Sigma-Aldrich，批号：SLBM9246V)；BCA 蛋白质定量检测试剂盒
( 上 海 生 工 生 物 技 术 股 份 有 限 公 司 ， 批 号 ：FB14DA0001)；酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)一抗(英国 Abcam，批号：GR 3204690-2)；过氧化氢酶(catalase，CAT)试剂盒(批号：20210927)、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)试剂盒(批号：20180102)、丙二醛试剂盒(批号：20180111)、一氧化氮(nitric oxide，NO)试剂盒(批号：20210917)均购自南京建成生物工程研究所；肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)ELISA 试剂盒(批号：P155996) 、白介素 1β(interleukin-1β ，IL-1β) ELISA 试 剂 盒 ( 批 号 ： P156121) 、 白 介 素 6 (interleukin-6，IL-6)ELISA 试剂盒(批号：P144951)均购自美国 R&D 公司；ROCKⅡ一抗(批号：8236S)购自 Cell Signaling Technology 公司。
1.3仪器
MSI-DIG-RT 啮齿动物步态检测分析系统(美国 MSI 公司 ) ； Trans-Blot?SD Cell 转膜仪、Trans-Blot?SD Cell 凝胶成像分析仪均购自美国Bio-Rad 公司；C-1150 酶标仪(德国 Leica 公司)。
2方法
2.1PD 模型的制备和分组 Rapamycin
24 只小鼠随机分为正常组、PD 组和 FSD-C10组，每组 8 只。PD 组和 FSD-C10 组均腹腔注射MPTP 建立小鼠的 PD 模型，第 1 天剂量为15 mg·kg–1；第 2 天剂量为 20 mg·kg–1；第 3~7 天剂量为 30 mg·kg–1。正常组给予等量生理盐水灌胃7 d。FSD-C10 组从 MPTP 处理的第 1 天起，给小鼠灌胃 FSD-C10，剂量为 50 mg·kg–1，连续给药时间为 14 d。正常组和 PD 组给予等量生理盐水灌胃14 d。
2.2旷场行为学测试
旷场行为学测试用于评价小鼠的自主活动能力。将 4 只小鼠分别放入观察箱(长 50 cm，宽 50 cm，高 50 cm)中适应30 min；同时在旷场行为学测试分析系统 Smart 3.0 软件中，将旷场底部划分为 9 个方格。适应结束后，保持环境安静，摄像机录像小鼠的自主活动，每次录像时间为 10 min，录像 3次，收集并分析各组小鼠移动的总距离、休息时间、穿格次数等数据。每换4 只小鼠要彻底清除观察箱，并用 75%乙醇清洁，以避免气味对其他小鼠行为方式的干扰[8]。
2.3Western blotting 检测 TH、ROCKⅡ
取脑组织裂解液，BCA 法测定的蛋白质浓度，依据蛋白质浓度计算各样本 SDS-PAGE 电泳的上样体积。样品与 5×loading buffer 以 4∶1 比例混合上样，5%浓缩胶堆积蛋白，10%分离胶分离蛋白。电泳结束，半干式转膜法将凝胶蛋白转移到甲醇活化的 PVDF 膜，稳压 20 V，时间 40 min，5%脱脂奶粉摇床上封闭 PVDF 膜 2 h，TBST 充分洗涤后，加入 TH、ROCKⅡ一抗(均 1∶1 000)，于 4 ℃孵育过夜，次日 TBST 充分洗涤后，加入二抗(1∶ 10 000)摇床孵育 2 h，TBST 冲洗后加 ECL 化学发光液，Bio-Rad 凝胶成像分析仪拍照蛋白质条带，Image Lab 3.0 软件分析蛋白质的灰度值。
图 1 FSD-C10 对 PD 小鼠旷场行为学的影响
与正常组比较，1)P<0.01；与 PD 组比较，2)P<0.05，3)P<0.01。
Fig. 1 Effect of FSD-C10 on open field behavior of PD mice
2.4CAT、丙二醛、GSH 及 NO 的比色法检测
取脑组织匀浆液，分别参照 CAT、丙二醛、GSH 及 NO 试剂盒说明书的操作步骤完成实验。基于比色法分别计算出脑组织中 CAT 活力，丙二醛、GSH 及 NO 的含量。
2.5ELISA 检测 TNF-α、IL-1β 及 IL-6
具体操作步骤参照炎性因子 TNF-α、IL-1β 及IL-6 试剂盒说明书。根据各炎性因子的标准曲线计算各样本的浓度。
2.6统计学方法MK-1775供应商
数据的统计分析采用 GraphPad Prism 5.0 软件，计量资料用 x ± s 表示，多组间比较采用ANOVA，两两比较用 t 检验，P<0.05 表明差异有统计学意义。