目的:研究旨在验证HyFS是否能够诱导三阴型乳腺癌(TNBC)细胞发生免疫原性细胞死亡(ICD),并探讨其发挥抗肿瘤作用的分子机制。方法:1、使用流式细胞术、Western blot,ELISA、免疫荧光实验检测对比HyFS与地高辛诱导三阴型乳腺癌细胞死亡的方式。2、在HyFS处理的条件下,分别使用自噬抑制剂3-MA和CQ进一步处理后,Western blot检测自噬标志物的表达情Biomedical image processing况selleckchem PF-02341066,免疫荧光实验检测TNBC细胞中自噬体,自噬溶酶体的含量及定位情况。3、对比联合HyFS加自噬抑制剂处理与地高辛单独处理条件下,三阴型乳腺癌细胞发生ICD的程度,从而证实HyFS诱导的自噬参与调控ICD。4、HyFS联合自噬抑制剂处理与地高辛单独处理条件下,ICD的标志物RIPK1,RIPK3,KLKL,p MLKL的表达情况,阐明HyFS通过自噬参与调控ICD的分子机制。5、体内动物实验验证HyFS联合自噬抑制剂CQ治疗诱导ICD,在三阴型乳腺癌中能够发挥强有力的抗肿瘤作用。结果:1、尽管与DIG具有相似的碳烯内酯结构,但HyFS并不像DIG一样能够诱导TNBC细胞发生ICD,而是主要诱导产生自噬。2、HyFS诱导TNBC细胞产生完整的自噬流。3、HyFS诱导产生的自噬抑制了TNBC细胞发生ICD。4、HyFS诱导RIPK1/RIPK3坏死小体自噬降解引起TNBC细胞中RIPK3/MLKL信号通路的失活和ICD抑制。5、HyFS和自噬抑制剂CQ联合治疗能使免疫活性小鼠产生ICD并发挥强有力的抗肿瘤活性。结论:1、HLY2835219半抑制浓度yFS介导的RIPK1/RIPK3坏死小体自噬降解导致TNBC细胞中ICD的失活。2、HyFS与自噬抑制剂联合治疗可增强抗肿瘤活性,提示其可作为TNBC治疗的替代疗法。