ALK抑制剂

目的 研究上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)在肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)病人中的表达情况及其与预后和术后肿瘤复发、淋巴转移的关https://www.selleck.cn/products/z-vad-fmk.html系。方法 回顾性分析2015年1月至201BAY 73-4506 MW7年12月在北京大学人民医院行手术治疗的42例ICC病人的临床、病理及预后资料，应用免疫组织化学染色测定EpCAM的表达水平，分析其与预后及肿瘤复发转移的关系。采用Pearson检验进行相关性分析，Kaplan-Meier法分析术后生存率，log-rank检验比较组间生存率的差异，采用多因素Cox回归分析生存率的影响因素。结果 在42例ICC肿瘤组织中，EpCAM高表达的比例为85.7%(36/42)。其中，EpCAM高表达病人术后肿瘤复发率在90.0%以上，并且EpCAM表达水平与淋巴转移存在明显的相关性(r=0.356,P=0.021)。此外，单因素分析显示：EpCAM高表达与EpCAM低表达的ICC病人比较，3年总生存率(30.6%比83.3%,χ~2=4.043,P=0.044)和3年无病生存率(16.7%比66.7%,χ~2=4.599,P=0.032)更低，5年总生存率(22.2%比83.3%,χ~2=6.355,P=0.012)和5年无病生存率(11.1%比66.7%,χ~2=7.006,P=0.008)也更低。多因素分析显示：EpCAM表达水平是ICC病人术后3年无病生存率(P=0.030)、5年总生存率(P=0.Recipient-derived Immune Effector Cells041)、5年无病生存率(P=0.019)的独立影响因素；EpCAM高表达的ICC病人术后3年复发风险高于EpCAM低表达病人[HR=4.902,95%CI(1.162,20.679),P=0.030],5年死亡风险[HR=8.069,95%CI(1.094,59.532),P=0.041]和5年复发风险[HR=5.594,95%CI(1.328,23.558),P=0.019]也高于EpCAM低表达病人。结论 EpCAM在ICC病人中具有较高的表达水平且与术后长期生存、肿瘤复发及淋巴转移相关，可能成为潜在的协助ICC早期诊断及预后评估的分子标志物，可作为病人术后肿瘤复发转移的预测指标。

阿霉素肾病（adriamycin nephropathy,AN）模型是经典的慢性肾脏病模型，可以模拟人类肾病综Z-VAD-FMK合征（nephrotic syndrome,NS）的临床表现及病理变化，用于研究NS的病理机制，为开发NS的治疗药物提供基础。实验研究多采用中医治疗水肿的方法治疗AN，大多从肺、脾、肾论治，以补肺，健脾，益肾，活血，利水为治则指导用药。根据肾脏的生理功能及慢性肾脏病的病理变化，关于中药治疗AN的机制的研究主要集中在以下几个方面：调节水通道蛋白（aquaporin,AQP）的表达，改善肾脏对水平衡的调节功能；改善炎症细胞的表达，减轻炎症反应；修复足细胞，改善肾小球的通透性；以及通过各种信号通路减缓肾脏纤维化进程。各个实验研究结果显示中药在AN模型治疗中有显著的效果，不同的中药方剂具有不同的作用机制，有一种或多种作用通路。本文选取了近年来中药治疗AN的实验研究，做此综述，希望能为临床selleck激酶抑制剂治疗NS提Egg yolk immunoglobulin Y (IgY)供佐证，能为后来的实验研究提供经验和思路。

研究一:临床研究加味黄芪赤风汤对IgA肾病患者血清IL-18和IL-1β表达的影响目的:通过临床随机对照试验,观察加味黄芪赤风汤治疗IgAN患者的有效性和安全性,及其对患者血清IL-18和IL-1β表达的影响。方法:中医辨证为气虚血瘀兼风邪热毒证的80例IgAN患者,随机分为治疗组和对照组,每组40例。同时纳入23例性别、年龄相匹配的健康受试者。健康受试者仅采集一次静脉血,用于检测血清IL-18和IL-1β水平。IgAN患者两组均予以西医基础治疗和替米沙坦治疗,治疗组加用加味黄芪赤风汤颗粒剂进行治疗,治疗周期24周。对治疗前、治疗第12周和第24周的24小时尿蛋白定量和中医证候积分进行分析。血生化指标及血清IL-18和IL-1β水平在治疗前和治疗第24周进行检测。结果:①24小时尿蛋白定量:与治疗前相比,两组患者在第12周的24小时尿蛋白定量明显降低(均P<0.05);第24周的24小时尿蛋白定量进一步下降(均P<0.01)。组间比较显示,与对照组相比,治CHONDROCYTE AND CARTILAGE BIOLOGY疗组在第24周时的24小时尿蛋白定量更低(P<0.01)。②中医证候积分:与治疗前相比,治疗组患者的中医证候积分在第12和第24周均明显降低(P<0.01);对照组患者的中医证候积分在第24周明显降低(P<0.01)。组间比较显示,与对照组相比,治疗组在第12周、第24周的中医证候积分更低(分别P<0.05,P<0.01)。③血清Scr、ALT、AST:治疗前后两组患者血清Scr、ALT、AST组内和组间无统计学差异(P>0.05)。④临床疗效:治疗组总有效率优于对照组(83.78%to 60.61%,P<0.05)。⑤中医证候疗效:治疗组总有效率优于对照组(81.08%to 54.55%,P<0.05)。⑥血清IL-18和IL-1β:与健康受试者相比,IgAN患者治疗前的IL-18和IL-1β水平更高(P<0.01);IgAN患者两组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗后的IL-18和IL-1β水平均低于治疗前(P<0.01);对照组治疗后的IL-1β水平低于治疗前(P<0.01)。与对照组相比,治疗组的IL-18和IL-1β水平更低(均P<0.01)。结论:加味黄芪赤风汤联合替米沙坦在治疗IgAN患者蛋白尿的临床疗效方面,优于单用替米沙坦,并且可以改善患者中医症状,同时还可以AZD1152-HQPA降低IgAN患者NLRP3炎症小体下游因子血清IL-18和IL-1β水平。研究二:动物实验一 IgA肾病大鼠不同时间点的自噬水平的动态观察目的:在不同时间点对IgAN大鼠肾脏自噬进行检测,观察其体内的动态自噬水平。方法:32只SD大鼠被随机分为正常组(n=13)和IgAN模型组(n=19),IgAN模型组大鼠进行IgA肾病的模型构建。实验第12周从正常组与IgAN模型组各取3只大鼠进行造模鉴定。为了评估不同时间点的自噬的变化,IgAN模型组的大鼠被分为三个时间点,M15、M18和M21(分别对应实验第15、18和21周的取材)。每个时间点随机抽取三只大鼠进行取selleck合成材。正常组的大鼠仅在实验第12周和第21周取材(分别记录为N12和N21)。每3周检测大鼠24小时尿蛋白定量。实验第21周结束进行肾脏取材。Western Blot法检测大鼠肾组织beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62 以及炎症指标 IL-18、IL-1β3 的表达,RT-qPCR 检测 beclin 1、p62mRNA水平,免疫组化检测LC3和beclin 1的表达与分布情况,同时采用透射电镜观察肾脏超微结构及自噬体。结果:①24小时尿蛋白定量:正常组大鼠不同时间点的24小时尿蛋白定量无统计学差异(P>0.05),与正常组大鼠比,IgAN模型组大鼠不同时间点的24小时尿蛋白定量逐渐升高(P<0.01)。②IgAN大鼠模型建立:与正常组相比,IgAN组大鼠系膜区可见明显的IgA免疫荧光沉积。电镜下系膜区可见电子致密物沉积,足细胞足突融合,表明IgAN模型建立成功。③IgAN大鼠自噬增强:实验第12周,Western Blot结果显示,与正常组相比,IgAN组大鼠肾组织beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62的表达上调(分别P<0.01,P<0.01,P<0.05)。免疫组化分析显示IgAN模型组大鼠肾脏beclin 1和LC3的表达明显高于正常组大鼠(均P<0.01)。通过透射电镜证实IgAN模型组存在典型的自噬空泡结构,自噬体呈含有细胞质物质和/或细胞器的双膜结构。④IgAN大鼠不同时间点的动态自噬:Western Blot结果显示,正常组大鼠肾组织自噬水平不随时间变化(均P>0.05)。IgAN模型组大鼠肾组织自噬水平逐渐升高,表现为beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达的上调和p62表达的下调(均P<0.05)。通过RT-qPCR检测,结果显示,beclin 1和p62mRNA表达水平的变化趋势与观察到的蛋白表达趋势基本一致。免疫组化结果显示与第15周相比,IgAN模型组在第18和21周时beclin1的表达升高(均P<0.01),第18周时LC3的表达升高(P<0.05)。透射电镜对第21周的正常组和IgAN模型组大鼠肾脏自噬进行观察,与正常组大鼠相比,IgAN模型组大鼠存在大量的自噬空泡结构。⑤IgAN大鼠不同时间点的炎症观察:Western Blot结果显示,正常组大鼠肾脏炎症指标IL-18和IL-1β水平不随时间变化(均P>0.05),均处于较低水平。随时间推移,IgAN模型组大鼠IL-18和IL-1β炎症水平逐渐升高(P<0.05)。结论:本次研究,我们观察到了 IgAN大鼠自噬水平的增强,并且进一步通过对不同的时间点的IgAN大鼠肾脏的自噬进行检测,结果显示,IgAN大鼠处于自噬诱导且持续激活的状态,炎症水平亦持续升高。研究三:动物实验二加味黄芪赤风汤抑制自噬降低IgA肾病大鼠NLRP3炎症小体活化的机制研究目的:在实验一的基础上,进一步探讨加味黄芪赤风汤是否可以通过调控自噬途径,降低IgAN大鼠NLRP3炎症小体活化从而改善IgAN大鼠肾脏病理损伤,为今后临床应用加味黄芪赤风汤治疗IgAN提供进一步的理论依据。方法:66只大鼠被随机分为六组:正常组(Normal,n=13),IgAN模型组(IgAN,n=13),加味黄芪赤风汤组(MHCD,n=10),雷帕霉素组(Rapa,n=10),3-甲基腺嘌呤组(3-MA,n=10),加味黄芪赤风汤+3-甲基腺嘌呤组(MHCD+3-MA,n=10)。实验第12周从正常组与IgAN模型组各取3只大鼠进行造模鉴定。之后,再对大鼠进行9周的治疗。治疗组的大鼠给予相应的加味黄芪赤风汤水煎剂(25g/kg/d)或雷帕霉素(1mg/kg/d)灌胃,3-MA(15mg/kg/d)通过腹腔注射给药,而正常组和IgAN模型组的大鼠则灌胃生理盐水直至第21周末。每3周检测大鼠24小时尿蛋白定量。实验第21周结束进行腹主动脉取血和肾脏取材,对血清进行生化指标测定,同时HE、PAS、Masson染色进行肾组织形态学观察,Western Blot法检测大鼠肾脏beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62和NLRP3炎症小体的表达,RT-qPCR检测beclin 1、p62和NLRP3炎症小体mRNA水平,免疫组化检测LC3和beclin 1的表达与分布情况,采用透射电镜观察肾脏超微结构及自噬体,免疫荧光检测NLRP3表达情况。结果:①24小时尿蛋白定量:在第18周和第21周,与正常组相比,IgAN组的24小时尿蛋白定量明显升高(P<0.01)。与IgAN组相比,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组的24小时尿蛋白定量明显降低(均P<0.01)。②大鼠血生化指标:实验第21周末对大鼠肝肾功能进行测定,包括血清ALB,ALT,AST,BUN和Scr。各指标组间无统计学差异(P>0.05)。③大鼠肾脏病理:采用HE、PAS和Masson染色对各组大鼠肾组织形态进行观察。正常组大鼠肾小球和小管结构正常。IgAN模型组大鼠肾小球可见系膜细胞增生、基质增多,间质炎性细胞浸润。经治疗后,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组肾组织形态均有一定程度的改善。此外,通过定量分析Masson染色胶原沉积情况,结果表明,与正常组相比,IgAN模型组大鼠有更多的胶原沉积(P<0.01)。与IgAN模型组相比,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组沉积情况明显改善(均P<0.01);Rapa组沉积程度加重(P<0.05)。透射电镜对各组大鼠肾脏超微结构进行观察。正常组大鼠肾组织结构正常,系膜区未见电子致密物沉积,无足突融合与脱落。IgAN模型组大鼠可见大量系膜区电子致密物沉积,广泛足突融合和脱落。与IgAN模型组相比,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组沉积的电子致密物均有所减少,且足突融合和脱落情况减轻。④大鼠自噬指标:Western Blot结果显示,与正常组大鼠的肾组织相比,IgAN模型组大鼠的beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平明显升高(分别P<0.05,P<0.01)。与IgAN组大鼠相比,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组逆转了大鼠beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量的增加(P<0.01);Rapa组则进一步促进了 beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量的升高(P<0.05)。自噬相关蛋白p62与自噬呈负相关,IgAN模型组显著下降(P<0.01),药物干预后,3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组逆转了大鼠p62表达量的下降(均P<0.01)。RT-qPCR对大鼠肾组织的beclin 1和p62 mRNA的表达进行检测,结果显示自噬指标在基因层面的表达与蛋白层面的表达基本一致。免疫组化结果亦与之一致。透射电镜下观察各组大鼠肾组织自噬结构,正常组大鼠肾组织结构清晰,偶见自噬体。IgAN模型组大鼠可见大量自噬体聚集,存在典型的自噬空泡结构,有含细胞质物质或细胞器的双膜结构的自噬体,也有单层膜结构的胞浆成分已降解的自噬溶酶体。药物干预后的各组,加味黄芪赤风汤组和3-MA组大鼠自噬体数量减少,加味黄芪赤风汤+3-MA组大鼠自噬结构不明显,而Rapa组大鼠肾组织自噬体数量呈增加趋势。⑤大鼠炎症指标:Western Blot结果显示,与正常组相比,IgAN组大鼠的NLRP3、cleaved caspase-1、IL-18 和 IL-1β 表达水平明显升高(均P<0.01)。与IgAN模型组大鼠相比,加味黄芪赤风汤组、3-MA组和加味黄芪赤风汤+3-MA组可以逆转其表达量的增加(P<0.05);Rapa组则进一步促进了 NLRP3、cleaved caspase-1和IL-1β表达量的升高(P<0.05)。RT-qPCR对大鼠肾组织的NLRP3、cleaved caspase-1、IL-18和IL-1β mRNA的表达进行检测,结果显示炎症指标在基因层面的表达与蛋白层面的表达基本一致。NLRP3免疫荧光结果显示,IgAN模型组大鼠肾脏NLRP3表达增多,加味黄芪赤风汤组、3-MA组、3-MA+加味黄芪赤风汤组NLRP3表达减少,Rapa组NLRP3表达仍然较强。结论:本实验通过建立IgAN大鼠模型,予以自噬增强剂雷帕霉素、自噬抑制剂3-MA以及加味黄芪赤风汤干预,证实了加味黄芪赤风汤治疗IgAN大鼠蛋白尿的有效性和安全性,同时对大鼠肾脏自噬和NLRP3炎症小体等指标进行检测,结果显示加味黄芪赤风汤可能是通过抑制IgAN大鼠体内的过度自噬,降低NLRP3炎症小体的活化,从而减少IgAN大鼠尿蛋白排泄,改善肾脏病理损伤而发挥其肾脏保护作用。

绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino为葫芦科绞股蓝属的草质藤本植物。绞股蓝皂苷是其主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、降脂降糖、神经保护、保肝等多种功效。通过微生物转化去掉糖基得到稀有皂苷,从而提高绞股蓝皂苷的生物活性。本研究选用肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)P3-1转化绞股蓝皂苷,通过高效液相色谱分析转化前后绞股蓝皂苷的变化情况,经HR-TOF-MS质谱初步鉴定化学结构。利用脂多糖诱导RAW264.7细胞构建炎症细胞模型,测定转化前后绞股蓝皂苷抗炎活性。将转化产物应用在绞股蓝复合软糖中,通过响应面实验优化产品配方。具体内容如下:1.采用肠膜明串珠菌P3-1对绞股蓝皂苷进行转化,以绞股蓝皂苷为研究对象,培养基MRS,温度30℃,接种量5%,转化时间6 d,等体积水饱和正丁醇萃取三次,减压浓缩后蒸馏水转移,真空冷冻干燥得到绞股蓝总皂苷转化产物粉末。高效液相色谱分析转化前后绞股蓝皂苷的变化,转化后色谱图在t_R=56.39 min和t_R=60.67 min出现两个新峰。制备这两个化合物,经HR-TOF-MS质谱初步鉴定了它们的化学结构,化合物1为3β,20ξ,23ξ-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖基-20,23-二羟基达玛-24-烯-21羧酸21,23-内酯(3β,20ξ,23ξ-3-OMultiplex Immunoassays-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyranosyl-20,23-di hydroxydammar-24-en-21 oci acid 21,23-lactone),化合物2为3β,20ξ,21ξ,23ξ-四羟基-21,24ξ-环氧达玛-25-烯3-O-[β-D-木糖基(1→3)]-α-L-阿拉伯糖苷(3β,20ξ,21ξ,23ξ-tetrahydr oxy-21,24ξ-cyclSAG配制odammar-25-ene 3-O-[β-D-xylopyranosyl(1→3)]-α-L-arabinopyranoside)。2.脂多糖诱导RAW264.7细胞产生炎症因子,构建炎症细胞模型。测定绞股蓝皂苷及其转化产物对NO分泌量的影响;Elisa法测定细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、COX-2的表达水平;采用流式细胞术检测绞股蓝皂苷及其Entinostat细胞培养转化产物对RAW264.7细胞凋亡的影响。结果表明,转化后的绞股蓝皂苷能显著降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、COX-2的表达水平,显著抑制NO的分泌量,且有效降低细胞凋亡数目,说明经肠膜明串珠菌P3-1转化的绞股蓝产物具有更好的抗炎活性。3.利用转化后的绞股蓝皂苷为原料制作绞股蓝复合软糖,以感官评分为指标,采用单因素和Box-Behnken中心组合试验设计原理对产品的配方进行优化。绞股蓝复合软糖的最佳配方为:转化产物添加量25%,罗汉果粉末添加量15%,复合凝胶剂添加量20%(明胶:卡拉胶=3:1),柠檬酸添加量1.5%。采用该配方生产的软糖色泽适宜,风味浓郁,口感软弹。本研究利用肠膜明串珠菌P3-1对绞股蓝皂苷进行转化,产物的抗炎活性增强,以转化产物为原料研发了一款绞股蓝复合软糖,为绞股蓝皂苷的综合利用提供新思路。

目的 探索厄贝沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾形态和功能的影响。方法 用高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型，并将造模成功的DN大鼠随机分为模型组和实验组，每组10只；另取10只标准饲料喂养大鼠作为正常组。实验组给予50 mg·kg~(-1)厄贝沙坦灌胃；其他2组均给予等剂量0.9%NaCl灌胃。3组大鼠均连续给药22周。于22周末，检测大鼠尿白蛋白/肌酸酐比值(UACR),用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肾组织中整合素av和整合素β5 mRNA的表达水平，用免疫组化法检测肾组织中玻连蛋白(VN)、层粘连蛋白(LN)的定位分布LEE011说明书和蛋白表达水平。结果 实验组、模型组和正常组的UACR分别为(436.23±96.52)、(698.00±90.38)和(46.56±9.68)mg·g~(-1),整合素av mRNA相对表达水平分别为1.52±0.17、2.31±0.28和0.52±0.04,整合素β5 mRNA相对表达水平分别为1.76±0.15、2.65±0.23和0.68±0.07,VN平均光密度值分别为430.32±38.46、8Selection for medical school80.35±63.26和160.46±12.37,LN平均光密度值分别为450.17±36.35、730.42±6E70808.28和350.08±36.42。实验组的上述指标与模型组相比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 厄贝沙坦可能通过抑制整合素avβ5及其相关蛋白的表达，从而发挥肾保护作用。

随着人口老龄化的发展，神经退行性疾病逐渐成为我国公共卫生领域的重大问题。肠道菌群的组成和丰度的改变与神经退行性疾病的发生发展密切相关，而体育锻炼被认为是肠道菌群的重要调节因素，并且不同的体育运PUN30119纯度动对肠道菌群的多样性和菌群结构均有较好的调控作用，因此运动、肠道微生物群和神经退行性疾病三者之间的动态相互作用也成为研究热点。多项研究结果均证实，运动可通过调控肠道菌群从而调节神经活性代谢物分泌、减少β淀粉样蛋白沉积、降低氧化应激水平和改善血脑屏障功能等，在神经退行性疾病防治方面发挥重要作用。本文以阿尔茨海默病、帕金森nonprescription antibiotic dispensing病和肌萎缩侧索硬化症三种神经退行性疾病为研究对象，主要阐述运动、肠道菌群和神经退行性疾病相关的研究进展，以期为运动预防神经退行性疾病selleck Lapatinib提供新的思路和理论依据。

研究背景:二型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)是以胰岛素分泌相对不足、胰岛素抵抗和血糖增高为特征的慢性代谢性疾病。胰岛素抵抗是T2DM最主要的发病因素,胰岛β细胞通过代偿性分泌胰岛素维持机体正常的血糖水平。而胰岛β细胞失代偿将导致内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)、氧化应激、自噬流抑制、细胞焦亡,并最终导致胰岛素分泌功能障碍以及细胞凋亡。脂毒性是导致T2DM中胰岛β细胞损伤的主要原因,高浓度的游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)导致胰岛β细胞生理代谢紊乱,最终诱导功能障碍甚至死亡。一型糖尿病(Type 1 diabetes,T1DM)是一种免疫系统缺陷疾病,自身免疫抗体损伤胰岛β细胞,导致胰岛素分泌绝对缺乏。T2DM和T1DM的中末期普遍存在胰岛β细胞死亡,伴随细胞功能障碍,但相关分子机制仍需进一步讨论。丝裂原活化蛋白激酶5(Mitogen activated protein phosphatase 5,MKP-5)作为MAPK家族负向调控因子,参与到免疫调节与肺纤维化等疾病中,但MKP-5在糖尿病胰岛β细胞中的作用仍需进一步探索。研究目的:1.本研究以MKP-5基因为靶点,利用胰岛β细胞系和小鼠的原代胰岛细胞中探讨MKP-5对脂毒性损伤的影响。2.探讨并比较MKP-5基因敲除对T2DM和T1DM小鼠的糖脂代谢紊乱和胰岛β细胞损伤的影响。3.分析MKP-5基因敲除后胰岛细胞差异基因变化,探讨MKP-5调节糖尿病小鼠胰岛细胞损伤的分子机制。研究方法和结果:1、MKP-5调控胰岛β细胞的脂毒性损伤Real-time PCR和Western blot结果表明,MKP-5过表达显著抑制棕榈酸(Palmitic acid,PA)对Rin-m5f胰岛β细胞炎症、氧化应激、ERS和凋亡的激活,并缓解对细胞增殖的抑制。利用ELISA进行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS),与Real-time PCR和Western blot结果共同表明,MKP-5能缓解PA诱导的Rin-m5f细胞中胰岛素分泌功能障碍。而利用si-RNA敲降Rin-m5f细胞中MKP-5则加剧了PA诱导的线粒体途径的凋亡、ERS以及胰岛素分泌功能障碍。肥胖小鼠原代胰岛细胞中MKP-5的表达水平显著下降,凋亡和ERS相关蛋白的表达显著增加,而胰岛β细胞的功能蛋白表达受到抑制。MKP-5过表达/抑制表达能缓解/加剧脂毒性诱导的原代胰岛细胞损伤过程。MKP-5缓解PA诱导的MAPK通路的活化,JNK与P38抑制剂能分别缓解MKP-5调控PA诱导的胰岛β细胞线粒体途径凋亡和功能损伤。2、MKP-5敲除对糖尿病小鼠代谢异常和胰岛细胞损伤的影响MKP-5敲除促进T2DM小鼠体重进一步增加、T1DM小鼠体重进一步降低,也加剧了T2DM和T1DM小鼠的高血糖。腹腔内注射葡萄糖耐量实验(Intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)和腹腔内注射胰岛素耐量实验(Intraperitoneal insulin tolerance test,IPITT)表明,MKP-5敲除后加剧了糖尿病selleck抑制剂小鼠的葡萄糖耐受损伤和胰岛素抵抗。此外,MKP-5敲除后T2DM和T1DM小鼠部分血脂指标进一步恶化。免疫组化和ELISA实验显示,MKP-5敲除加剧了STZ注射小鼠胰岛中免疫细胞的浸润和血清中炎症因子的释放。HE染色显示,MKP-5敲除进一步增加高脂饮食(High fat diet,HFD)饲养小鼠胰岛的尺寸,也进一步抑制STZ注射小鼠原代胰岛的尺寸。免疫组化显示,MKP-5敲除后降低HFD饲养雄性小鼠的胰岛素强度/胰岛面积,对雌性小鼠的上述比值无影响。MKP-5敲除降低了STZ注射后小鼠胰岛中胰岛素强度/胰岛面积。此外,在MKP-5 KO HFD雌性小鼠中,胰高血糖素强度/胰岛面积进一步升高,而MKP-5敲除对STZ注射后小鼠胰岛中高血糖素强度/胰岛面积无明显影响。GSIS结果显示,无论正常饮食(Chow)还是HFD饲养的小鼠,MKP-5敲除后其血清胰岛素水平显著增加。同时MKP-5敲除进一步加剧了STZ对原代胰岛GSIS的抑制。Western blot与免疫荧光结果显示,HFD可上调WT小鼠胰岛细胞中凋亡相关蛋白的表达,而STZ注射则对其无影响。与WT小鼠相比,无论是HFD还是STZ处理时,MKP-5 KO小鼠胰岛内凋亡蛋白表达水平均显著增加。在WT小鼠胰岛中,HFD增加cleaved GSDMD表达,STZ注射增加了cleaved Caspase-1和cleaved GSDMD表达。值得注意的是,在MKP-5 KO的处理组小鼠胰岛中,上述焦亡相关蛋白均大幅增加。在WT小鼠胰岛中,HFD仅增加了p-JNK/JNK的水平,对p-P38/P38和p-ERK/ERK无影响,但其表达水平均在MKP-5 KO HFD组中显著增加。STZ注射WT小鼠胰岛后p-ERK/ERK显著增加,但对p-P38/P38和p-JNK/JNK无影响。而在MKP-5 KO STZ组中,上述比值均显著增加。3、MKP-5通过GRP-78缓解胰岛β细胞脂毒性损伤和自噬抑制转录组测序结果表明,WT与MKP-5 KO小鼠胰岛细胞中自噬、ERS、胰岛素通路、能量代谢等通路存在差异。Western blot表明,在MKP-5敲降后,HFD饲养小鼠的原代胰岛中LC3-Ⅱ、p-m TOR蛋白表达进一步增高,p-AMPK和Beclin-1蛋白表达进一步抑制,而在MKP-5敲降后,STZ注射进一步抑制p-AMPK和Beclin-1蛋白的表达,对其他自噬蛋白无影响。免疫荧光结果显示,HFD抑制了WT小鼠胰岛β细胞中Beclin-1蛋白的表达,STZ则无上述作用,但MKP-5 KO未能进一步抑previous HBV infection制HFD饲养小鼠胰岛β细胞中Beclin-1表达。激光共聚焦显微镜、透射电镜和Western blot结果共同证实,MKP-5过表达可缓解脂毒性诱导的胰岛β细胞内自噬流抑制。此外,MKP-5可缓解自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)与PA诱导Rin-m5f细胞的凋亡、ERS、氧化应激和功能蛋白的抑制。在Rin-m5f细胞中敲降自噬调节基因AMPK后,MKP-5不再缓解PA对胰岛β细胞自噬和功能蛋白表达的抑制。荧光素酶报告基因实验表明,MKP-5可能通过调控AMPK转录水平发挥上述调节作用。与转录组测序结果相一致,葡萄糖调节蛋白-78(Glucose regulation protein78,GRP-78)在MKP-5 KO小鼠胰岛细胞中表达量显著增加。MKP-5 KO加剧HFD饲养小鼠胰岛细胞中GRP-78和ERS蛋白表达。而STZ注射WT小鼠后GRP-78与ERS蛋白表达无变化。因此本研究构建了Retro Q-sh GRP78逆转录病毒,发现其在抑制原代胰岛细胞自噬基因AMPK的基础上,又通过抑制了自噬小体合成加剧了脂毒性对Rin-m5f细胞自噬流的抑制。此外,sh GRP-78加剧了MKP-5 KO HFD组中ERS、细胞焦亡、凋亡蛋白水平增加,进一步抑制了Ferrostatin-1纯度胰岛β细胞功能蛋白表达水平。最后Co-IP实验提示,MKP-5蛋白可能通过与GRP-78蛋白结合,从而缓解胰岛β细胞的脂毒性损伤。结论:(1)MKP-5敲除加剧T1DM和T2DM小鼠糖脂代谢紊乱和胰岛细胞功能异常。(2)MKP-5通过AMPK调控的自噬,部分缓解胰岛β细胞的脂毒性损伤。(3)MKP-5通过内质网分子伴侣GRP-78缓解胰岛β细胞自噬流抑制和脂毒性损伤。

目的 比较伏硫西汀与文拉法辛治疗抑郁障碍的临床效果及对认知selleckchem功能的影响。方法 选取2020年1—12月常熟市第三人民医院收治的抑郁障碍患者60例，采用随机数字表法分为伏硫西汀组及文拉法辛组，每组30例。伏硫西汀组采用伏硫西汀治疗，文拉法辛组采用文拉法辛治疗，2组均连续治疗Bioactive coating8周。比较2组治疗前与治疗2、4、8周后汉密尔顿抑郁量表-17(HAMD-17)评分、抑郁症患者认知缺陷问卷(PDQ-D)评分、数字符号替换测验(DSST)评分及不良反应。结果 治疗2、4、8周后，2组HAMD-17、PDQ-D评分均低于治疗前(P<0.01),DSST评分均高于治疗前(P<0.01),且伏硫西汀组治疗4周后HAMD-17评分低于文拉法辛组(P<0.01),伏硫西汀组治疗4、8周后PDQ-D评分低于文拉法辛组，DSST评分高于文拉法辛组(P<0.05或P<0.01),其他时间点2组评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。伏硫西汀组与文拉法辛组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(20.00%vs. 30.00%,χ~2=0.800,P=0.371)。结论 伏硫西汀与文拉法辛均可获悉更多有效治疗抑郁障碍，但伏硫西汀对患者认知功能的改善效果优于文拉法辛，具有较高的安全性。

背景与目的:颅内动脉瘤(IA)是大脑动脉血管壁的瘤状膨出,其破裂造成的蛛网膜下腔出血往往给病人带来毁灭性的伤害。尽管在诊断及治疗方面有了很大的进步,但IA的形成机制仍然未知。近年来,研究发现血流动力学因素可以导致血管壁内炎症反应的发生、内皮受损以及管壁异常重构,这些可能与IA的形成发展密切相关。本研究通过体外实验,模拟血管内皮细胞在血管分叉处所受血流动力学应力变化,造成内皮细胞炎症及损伤的相关机制。方法:我们的研究采用课题组自行研发的改良T型流体力学系统,模拟颅内血管分叉处的血流动力学变化,筑建血管内皮细胞损伤模型。以500ml/min的流量在37℃和5%CO2的环境下冲击人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不同时间(0.5h、1h、2h、3h、6h),观察细胞密度与形态变化,运用蛋白印迹检测p-PKCα、HMGB1和NF-κB等蛋白的表达及调控情况,q PCR检测IL-1β、IL-6、IL-8的表达变化。随后对HUVEC运用PLiving biological cellsKCα磷酸化抑制剂以及质粒敲除HMGB1,探究p-PKCα、HMGB1和NF-κB之间的调控联系。结果:冲击流作用下,区域I中的细胞在冲击作用不同时间下均保持汇合,其密度与形态未见明显变化;在区域II中,冲击流作用0.5h、1h后,细胞密度减少,间隙增大,并且随着冲击作用的时间增加(2h、3h、6h),细胞数量进行性减少,并且细胞形态呈现多样化;冲击流作用0.5h、1h后区域III中的细胞密度及形态变化不明显,而随着冲击作用时长的增加(2h、3h、6h),细胞汇集密度增加,连接紧密。蛋白印迹检测发现3个区域合集的内皮细胞在冲击流作用0.5h后激活p-PKCα、HMGB1和NF-κB的表达,并且随着冲击时间的延长(1h、2h、3h)表达量逐渐增加,在冲击3h后达最高水平(p<0.01)。q PCR检测发现冲击流可激活内皮细胞IL-1β、IL-6、IL-8selleck MK-2206m RNA表达水平,并且随着冲击时间的延长,表达量进行性增加,同样在冲击3h后表现为高水平(p<0.05),据此选定冲击流3h为后续干预时间点。特异性抑制p-PKCα激活后,可降低细胞内HMGB1和NF-κB的表达,抑制IL-1β、IL-6、IL-8的水平。敲低HMGB1后可使NF-κB表达下降,抑制IL-1β、IL-6、IL-8水平,但对p-PKCα影响作用有限。结论:冲击流诱导血管内皮细胞损伤模型中,随着冲selleck HPLC击流时间的延长可见高壁剪切应力区域细胞密度的进行性下降,间隙增大,形态变化明显。冲击流以时间依赖性激活p-PKCα、HMGB1、NF-κB、IL-1β、IL-6和IL-8的表达,并通过PKCα/HMGB1/NF-κB信号通路促进血管内皮炎症的发生,参与血管内皮损伤。

目的 探究依托咪酯（Eto）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路对糖氧剥夺/复氧（OGD/R）诱导的神经元损伤的影响。方法 将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率，筛选Eto最佳干预浓度；EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡；ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平；全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平；Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低，凋亡此网站率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高（P<0.05）；与模型组比较，Eto低、中、高剂量HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著升高，凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著降低（P<0.05）;cAMP/PKA/CREB信号通路抑制剂H-89可减弱Eto对神经细paediatrics (drugs and medicines)胞的保护作用（P<0.0Laduviglusib半抑制浓度5）。结论 Eto可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路，抑制氧化应激和炎症反应，促进细胞增殖，降低细胞凋亡，减弱OGD/R诱导的HT22细胞损伤。